張亞玲，牛卓婭，王世偉，賈 乾，姚智燕，劉 偉

（1河北醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，2河北省人民醫(yī)院體檢中心化驗(yàn)室，河北石家莊050051；3河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，河北省重大疾病的免疫機(jī)制及干預(yù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北石家莊050017）

0 引言

B淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，對(duì)體液免疫和細(xì)胞免疫都有著重要的作用。B淋巴細(xì)胞來(lái)源于骨髓的多能干細(xì)胞，其分化過(guò)程可以分為抗原非依賴期和抗原依賴期兩個(gè)階段，抗原非依賴期包括前B細(xì)胞、不成熟B細(xì)胞的分化過(guò)程，抗原依賴期是成熟B細(xì)胞發(fā)育成活化B細(xì)胞，繼而分化成分泌抗體的漿細(xì)胞的過(guò)程。每個(gè)過(guò)程中，細(xì)胞膜表面都存在其特有的標(biāo)志，主要是由免疫球蛋白基因編碼和重排的蛋白分子，稱為B細(xì)胞表面抗原受體（B cell receptor，BCR），其主要功能在于特異性識(shí)別和結(jié)合抗原，與免疫細(xì)胞和免疫分子相互作用。BCR的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)B細(xì)胞的發(fā)育和生存有著重大意義，其中磷脂酶Cγ?2是前B細(xì)胞受體（pre?BCR）和BCR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的一個(gè)重要分子，所以磷脂酶Cγ?2在B淋巴細(xì)胞的形成和維持中有著重要作用［1］。

近年來(lái)，腫瘤和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫病的發(fā)病率逐年增高。研究［2］表明，B細(xì)胞連接蛋白被磷酸酸化后，使PLCγ?2活化，影響B(tài)CR介導(dǎo)的信號(hào)通路，改變BCR的特異性，使免疫因子和面對(duì)不同抗原的抗體持續(xù)產(chǎn)生，從而維持自身免疫。B淋巴細(xì)胞的受體編輯主要意義在于使自身反應(yīng)性B細(xì)胞不對(duì)自身抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，使其得以存活。如果受體編輯異常，會(huì)使自身耐受得到破壞，自身反應(yīng)性B細(xì)胞不斷被清除，是自身免疫性疾病產(chǎn)生的機(jī)制之一。此外，Chen 等［3］的研究發(fā)現(xiàn)，PLCγ?2 對(duì)于腫瘤細(xì)胞的凋亡也具有重要的影響。

1 B淋巴細(xì)胞與受體編輯

B細(xì)胞的第一階段是前B細(xì)胞，這一階段的前BCR僅僅是由Ig重鏈基因重排所表達(dá)。隨著重鏈基因的重排成功，B淋巴細(xì)胞進(jìn)入第二階段，即未成熟B細(xì)胞，輕鏈在此時(shí)也開(kāi)始進(jìn)行重排，U蛋白隨之表達(dá)，從而使膜表面有了完整的IgM分子，并可以和抗原結(jié)合。隨后，未成熟B細(xì)胞從骨髓中流出進(jìn)入脾臟及其周圍免疫器官繼續(xù)發(fā)育，先形成膜表面免疫分子為CD21的過(guò)渡型T1和CD21CD23CD44－IgD＋的過(guò)渡性T2細(xì)胞，最后成為成熟B細(xì)胞［4］。在此過(guò)程中，部分未成熟B細(xì)胞會(huì)遇到存在于骨髓微環(huán)境的自身抗原識(shí)別并與其結(jié)合，使這些膜表面存在自身抗原受體的未成熟B細(xì)胞受到負(fù)向調(diào)控，從而被巨噬細(xì)胞迅速吞噬降解而無(wú)法運(yùn)出骨髓外，使其克隆丟失，不能發(fā)育成熟。

除此之外，一些未成熟B細(xì)胞還可以通過(guò)Ig輕鏈基因的重排使產(chǎn)生新的特異性受體，從而使這些自身反應(yīng)性B細(xì)胞在體內(nèi)存活下來(lái)，B細(xì)胞的這個(gè)陽(yáng)性選擇的過(guò)程叫做受體編輯。

2 PLCγ?2與B淋巴細(xì)胞

2.1 PLC?γ的分類與作用 磷脂酶是一類可以水解磷脂的酶類，是存在于胞漿膜上的一個(gè)關(guān)鍵酶，起著介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路的作用。目前發(fā)現(xiàn)在哺乳動(dòng)物體內(nèi)大約存在12種PLC的同工酶，包括β、γ、δ、ε和最新發(fā)現(xiàn)的ζ 5個(gè)家族，其中磷脂酶C?γ有磷脂酶Cγ?1（PLCγ?1）和磷脂酶 Cγ?2（PLCγ?2）兩種。

PLCγ?1存在于體內(nèi)多種組織中，主要是起到了調(diào)節(jié)細(xì)胞的作用，PLC?γ?2主要存在于造血系統(tǒng)、T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞中，影響B(tài)CR介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)，同時(shí)在B細(xì)胞的分化成熟中有重要作用［5］。

2.2 PLCγ?2對(duì) B 細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用 PLCγ?2 的活化主要是通過(guò)蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase，PTK）的途徑?；罨腜LCγ?2可以水解細(xì)胞膜表面的磷脂酰肌醇二磷酸（phosphatidylinositol diphosphate 2，PIP2）生成第二信使三磷酸肌醇（inositol triphos?phate， IP3）和二酰甘油（diacylglycerol， DAG）［6］。 在Sherwood等［7］的研究中發(fā)現(xiàn)，IP3是一種鈣離子調(diào)節(jié)信號(hào)，可與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的IP3受體結(jié)合，從而促進(jìn)鈣離子的釋放，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子的通路。DAG可以激活蛋白激酶C（protein kinase C，PKC），產(chǎn)生一系列生化反應(yīng)，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行生長(zhǎng)調(diào)節(jié)，促使B細(xì)胞的成熟和分化。因此磷脂酶Cγ?2是B細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育信號(hào)通路上的重要調(diào)節(jié)分子。

BCR是由重鏈（heave chain，H）和輕鏈（light chain，L）組成，其中編碼L鏈的基因是κ和λ座位的基因，通過(guò)野生型和PLCγ?2缺失型小鼠的實(shí)驗(yàn)研究表明，PLCγ?2缺失會(huì)引起Igλ和Igκ基因第二次重排的損傷，此外，還發(fā)現(xiàn)PLCγ?2缺失損傷了BCR誘導(dǎo)的RAG的表達(dá)，而RAG是Ig基因重排過(guò)程中所需要的酶。

最近研究［8］發(fā)現(xiàn)，缺乏 PLCγ?2 的小鼠、骨髓和脾臟中B細(xì)胞的輕鏈表達(dá)均減少，其原因是PLCγ?2的缺陷不能激活調(diào)節(jié)輕鏈的基因，同樣前B細(xì)胞輕鏈的重排也會(huì)受到影響。從而使表達(dá)前B細(xì)胞受體（pre?BCR）基因的二次重排（即受體編輯）受到影響，自身反應(yīng)性B細(xì)胞的BCR不能發(fā)生特異性的改變，使與自身抗原結(jié)合的自身反應(yīng)性B細(xì)胞被巨噬細(xì)胞吞噬。

3 PLCγ?2與臨床常見(jiàn)疾病及其靶向治療

磷脂酶Cγ?2是B淋巴細(xì)胞分化發(fā)育信號(hào)傳導(dǎo)中的關(guān)鍵分子，尤其在前BCR和BCR形成過(guò)程中起著重要的信號(hào)傳導(dǎo)作用，而且其靶向幾種促增殖因子，如核因子 κB（NFκB），Ras 和 Akt，此外，PLCγ?2還涉及B細(xì)胞表面受體的耦合［9］。

研究［10］發(fā)現(xiàn)，在SLE等自身免疫性疾病患者的T、B細(xì)胞、漿細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞中，酪氨酸激酶活性異常。在對(duì)BCR的反應(yīng)中，Src和Syk相關(guān)激酶能夠調(diào)節(jié)部分重疊蛋白的酪氨酸磷酸化，而PLC?γ2是形成Src的特定底物。信號(hào)通路異常在自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用，倘若可以從抑制PLCγ?2活性入手，靶向治療可能將成為治愈相關(guān)疾病患者的一個(gè)重要的突破口。

3.1 PLCγ?2 與 SLE 系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種慢性自身免疫性疾病，以產(chǎn)生多種自身抗體、免疫復(fù)合物、多器官免疫性炎癥為特征，外周血單個(gè)核細(xì)胞凋亡增加，但凋亡小體清除障礙。SLE患者中T、B細(xì)胞異常活化導(dǎo)致細(xì)胞因子、自身抗體持續(xù)產(chǎn)生，這對(duì)自身免疫反應(yīng)的啟動(dòng)及維持至關(guān)重要［11］。

當(dāng)B細(xì)胞連接蛋白（如SLP?65、BASH）被Syk磷酸化后，可激活Bruton酪氨酸激酶（Btk）、活化PLCγ?2進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)。Kitaura等［12］研究發(fā)現(xiàn)SLE中Syk的酪氨酸磷酸化及 PLCγ?2表達(dá)增強(qiáng)。 PLCγ?2表達(dá)增強(qiáng)與皮膚損害具有相關(guān)性，這是因?yàn)镻LCγ?2的活化在Fc?γ受體介導(dǎo)的皮膚免疫反應(yīng)中起到了不可缺少的作用。

目前已有十多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制藥用于臨床治療SLE，多為酪氨酸酶抑制劑，從而抑制了PLCγ?2的活化，影響了BCR的二次重排，例如Syk抑制藥R406、R788，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中狼瘡鼠蛋白尿的發(fā)生時(shí)間延長(zhǎng)，減少了腎損傷，避免了皮膚損害，有確定的治療作用；表皮生長(zhǎng)因子（epidermal growth factor）抑制藥甲磺酸伊馬替尼同樣可以使狼瘡鼠腎蛋白尿延期出現(xiàn)，生存期延長(zhǎng)［13］，但是酪氨酸激酶抑制藥在 SLE治療中仍存在局限性，如用藥后嚴(yán)重副作用，治療不穩(wěn)定性等。

3.2 PLCγ?2 與 DLBCL Huynh 等［9］發(fā)現(xiàn) PLCγ?2在63%的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma， DLBCL）病例中表達(dá)上調(diào)，而且 PLCγ?2 的高表達(dá)與更高的總生存率相關(guān)。因此，抑制PLCγ2可能是淋巴瘤治療的新靶點(diǎn)。

目前研究［14］發(fā)現(xiàn)PLC抑制劑U73122可以抑制PMA誘導(dǎo)的人類促細(xì)胞U937細(xì)胞分化成巨噬細(xì)胞，誘導(dǎo)凋亡和G0/G1細(xì)胞周期停滯，加入enzastaurin或Src抑制劑pp2共同治療與單獨(dú)使用U73122相比，對(duì)細(xì)胞增殖具有調(diào)節(jié)作用［12］。

3.3 PLCγ?2與慢性淋巴細(xì)胞性白血病 慢性淋巴細(xì)胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL）是一種淋巴細(xì)胞克隆性增殖的腫瘤性疾病，其特征在于微環(huán)境依賴性B細(xì)胞受體組成了通路的活化［9，12］。新型靶向治療消除BCR整合激酶已經(jīng)顯示出了明顯的臨床效果［15］。

Ibrutinib是一種BCR靶向治療藥物（在一線設(shè)置中可能用于年輕患者［16］），其在半胱氨酸481處共價(jià)結(jié)合Bruton丙種球蛋白血癥酪氨酸激酶（Bruton's tyrosine kinase，BTK），防止了其SH3結(jié)構(gòu)域的LYN和SYK定向自動(dòng)磷酸化，從而防止PLCγ?2的下游激活，進(jìn)而阻止下游BCR信號(hào)。然而，由于BTK和/或PLCγ?2 的突變可能會(huì)導(dǎo)致 Ibrutinib 的耐藥性［17］，在少數(shù)情況下BTK及其直接下游PLCγ?2獲得性突變導(dǎo)致Ibrutinib受阻［18］。BTK中的 C481S突變阻礙Ibrutinib共價(jià)結(jié)合，從而抑制該藥物發(fā)揮作用［19］。鑒于傳統(tǒng)PLCγ?2的激活需要BTK14的合作，潛在的分子機(jī)制可使突變的PLCγ?2繞過(guò)BTK抑制來(lái)治療對(duì)抗Ibrutinib耐藥性。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)［20］發(fā)現(xiàn) PLCγ?2的 R665W 突變體對(duì)SYK和LYN的功能依賴性與突變型PLCγ?2配合形成BTK旁路途徑，這一發(fā)現(xiàn)提供了Ibrutinib耐藥性的潛在機(jī)制，并確定針對(duì)這種突變的替代療法。研究結(jié)果［21］表明，復(fù)發(fā)患者中存在PLCγ?2R665W的錯(cuò)義點(diǎn)突變，過(guò)表達(dá)PLCγ?2R665W突變使BCR擴(kuò)增下游信號(hào)傳導(dǎo)的能力增強(qiáng)，超表達(dá)PLCγ?2不再需要BCR信號(hào)通路中的BTK，藥物靶向SYK和LYN可以消除超型PLCγ?2，SYK和LYN靶向治療可防止Ibrutinib產(chǎn)生耐藥性，從而阻斷BCR信號(hào)傳導(dǎo)。

3.4 PLCγ?2 與其他腫瘤 有研究［22］發(fā)現(xiàn)， PLCγ?2在喉癌組織中的表達(dá)較癌旁組織中的表達(dá)明顯增高，兩者間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P≤0.05），即 PLCγ?2 在喉癌組織中高表達(dá)，且與喉癌的臨床分期、病理分級(jí)和淋巴轉(zhuǎn)移關(guān)系親密，與年齡有關(guān)。腫瘤的臨床侵占規(guī)模越廣，伴隨淋巴轉(zhuǎn)移，PLCγ?2表達(dá)越高?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞功能可被PLCγ?2調(diào)節(jié)，如PLC抑制鱗狀細(xì)胞癌腫瘤起始細(xì)胞的增殖和存活［23］，PLCγ?2在 TPA誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡等，這也表明它代表了抗癌藥物開(kāi)發(fā)的重要治療靶標(biāo)。

目前中藥在治療腫瘤方面正發(fā)揮積極的作用［24］，例如：黃連，黃連中主要活性成分為黃連素（berberine，BBR）。研究證實(shí)，黃連素對(duì)肝細(xì)胞性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）具有抑制作用，其機(jī)制與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。Western Blot實(shí)驗(yàn)證實(shí)，BBR可以抑制PLC?γ的表達(dá)，提示黃連素可能通過(guò)抑制PLC?γ的磷酸化過(guò)程，抑制信號(hào)通路的傳導(dǎo)以阻止肝癌細(xì)胞的侵襲。

4 小結(jié)與展望

B淋巴細(xì)胞組群是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，B細(xì)胞在發(fā)育過(guò)程中通過(guò)Ig重鏈和輕鏈基因的二次重排改變了B淋巴細(xì)胞膜上表面受體的特異性，從而豐富了整個(gè)B細(xì)胞庫(kù)。同樣那些存在于胞漿膜上重要的通路調(diào)節(jié)分子的正常運(yùn)作也非常重要，磷脂酶Cγ?2作為這些調(diào)節(jié)分子的一個(gè)重要組成部分，同時(shí)也影響B(tài)細(xì)胞的受體編輯。如果能正確利用這一點(diǎn)進(jìn)行靶向治療，有效控制B細(xì)胞群的受體編輯，并結(jié)合臨床實(shí)際情況，那么對(duì)于治療由于基因錯(cuò)誤的重排所導(dǎo)致的各種疾病，如腫瘤、免疫缺陷病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫病將具有重大意義。

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