何金芬

摘 要：本文主要對種子檢驗技術的應用實踐進行分析。具體是對RFLP技術、RAPD技術以及免疫3種檢驗技術的優(yōu)劣勢進行分析的基礎上，通過查閱相關資料對其在各類農作物中的應用原理與應用效果進行歸納。希望各種檢驗技術在農作物種子檢測中的應用，在提高其純度方面發(fā)揮一定的輔助作用。

關鍵詞：檢驗技術；RFLP技術；RAPD技術；免疫技術；應用實踐

中圖分類號：S-1 文獻標識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20171232006

種子為農業(yè)生產的基礎，種子質量與農民收入以及種子經銷商效益之間存在密切的關聯性。在種子市場國際化局勢中，農業(yè)生產應用的種子質量應該得到切實的保障，隨著科學技術的發(fā)展與先進，多樣化技術在種子質量檢測中獲得較大的應用空間，尤其是分子標記技術的應用為品種檢定供應了新穎手段，就此本文展開相關論述。

1 RFLP技術在種子純度檢測中的應用

RFLP（限制性內切酶片段長度多態(tài)性）為在DNA水平上首次應用在種子純度與品種鑒定領域的技術，因為該技術在應用之時投入時間、精力、資金量大，程序繁雜等緣故，所以其通常不被應用在種子質量檢測工作中，但是借用某品種特殊RFLP標記可以精確性的標記該品種，并且維護其多形態(tài)穩(wěn)定性方面體現出一定的優(yōu)越性，重復性優(yōu)良、精準性高，體現出共顯特征?，F階段，RFLP技術在云南玉溪市玉米、小麥、蠶豆、水稻、甘蔗等農作品質檢測上具有一定的應用頻率。

Smith應用38個探針精確的辨識了78個玉米雜交種，同時發(fā)現RFLP同工酶與蛋白質電泳現象無法辨識玉米雜交種這一問題。Vacine等人應用RFLP技術辨識了54種意大利尋常小麥品種。RFLP技術在種子品質檢測中的應用流程可以做出如下概述：提取DNA是首要步驟，繼而應用限制性內切酶酶切DNA，并應用凝膠電泳分解DNA片段，將DNA片段轉移至濾膜上；應用放射性標記的探針雜交呈現特定的DNA片段（Southern雜交）與對結果進行分析。

2 RAPD技術在種子檢測中的應用

RAPD（隨機擴增的多態(tài)性DNA）技術劣勢體現在穩(wěn)定性與重復性差方面上，所以其不是種子檢測首選技術，但是若某一作物沒有任何分子生物學研究基礎的情景下，對其進行指紋圖譜建設與遺傳多樣性解析工作，體現出快捷性與簡潔性特征，不會產生放射性污染，投入資金低廉、分辯率較高、靈活性強，RAPD技術在農作物、蔬菜作物與果樹方面已經有所應用。

Hu對Brassica屬作物進行鑒定過程中，發(fā)現4個引物可以辨識14個硬花球花椰菜與12個花椰菜。Sticher應用RAPD技術證明9個RAPD多態(tài)性片斷可精確的辨識27個大麥品系[1]。趙久然、李啟云分別應用RAPD分子標記技術建設了玉米自交系與其雙親的DNA指紋圖譜，其在玉米自交系與雜交種真實性與純度鑒定領域中擁有較高的應用頻率。朱青竹等人應用16個引物對來自中國、美國、法國與澳大利亞等不同國家的棉花品種（系）進行RAPD分析，發(fā)現了5個多態(tài)性優(yōu)良的引物。

為了達到彌補RAPD重復性差的缺陷，通常在對種子檢測過程中創(chuàng)設重復實驗。作為DNA多態(tài)性標記位點的條帶應帶有可重復性特征，重復性優(yōu)良是其最重要的取舍憑據，而條帶的強弱不應該作為取舍的憑據。參照Thormann對十字花科植物解析結果，發(fā)現RAPD產物強弱和該產物在基因組中的拷貝數之間不存在直接的關聯性，但是和引物、模板的同源性程度相關聯。

3 免疫技術在種子純度檢測中的應用

免疫技術在種子純度檢測上的典型應用為大麥。Deichl等人應用定量免疫電泳技術鑒定了釀造大麥的多樣化品種；Burbidge等人從禾谷類貯藏蛋白單克隆抗體內提取出抗體21/23，把食用大麥Cape與釀造大麥Clipper精確的區(qū)分開，與此同時建設了斑點酶聯免疫法[2]。Brinke等人應用玉米自交系的特點醇溶蛋白制得的單克隆抗體和7個自交系進行酶聯免疫測檢測，發(fā)現其間存在顯著的交叉反應。

在免疫技術在種傳病毒檢測領域中獲得廣泛應用的情況下，抗原檢測技術被研制與應用。沈建國等人應用抗原獲得與一步RT-PCR 相結合的方法，同時借助完善相關條件的方法，確定一步IC-RT-PCR 的反應流程，并且對該方法特異性與現實檢測效果進行辯證。并對菜豆莢斑駁病毒免疫捕獲一步RT-PCR 檢驗。

4 結束語

在知識經濟一體化時代中，國內種子檢驗技術獲得優(yōu)質的發(fā)展空間，種子檢測研討工作日漸深入化，但是與他類學科相比較，種子檢測發(fā)展成熟度依然缺乏。所以在日后的研究與實踐工作中，應該積極的將高端技術與傳統技術整合在一起，構建一套行之有效的技術體系，從根本上處理與農作物檢測相關的現實問題，為農業(yè)最大效益的取得提供基礎條件。

參考文獻

[1]時偉芳，謝宗銘，楊麗明，王建華，孫群.基于近紅外光譜技術的春小麥單粒種子活力鑒定[J].麥類作物學報，2016（2）：200-205.

[2]劉小慧，鄒滿鈺，印麗萍，郭水良.檢疫性雜草假高粱與近緣植物種子的波譜鑒別方法[J].浙江大學學報（農業(yè)與生命科學版），2015（4）：421-427.