朱辰龍

浙江省杭州市富陽中醫(yī)骨傷醫(yī)院 浙江 杭州 311400

中藥研究

高效液相色譜法在去甲氧基姜黃素納米脂質(zhì)載體中藥物含量測定中的應(yīng)用

朱辰龍

浙江省杭州市富陽中醫(yī)骨傷醫(yī)院 浙江 杭州 311400

高效液相色譜法 去甲氧基姜黃素 納米脂質(zhì)載體 含量測定

作為臨床中一種十分常見的藥物構(gòu)成成分，去甲氧基姜黃素是姜黃素的類似成分，其臨床作用與姜黃素有著一定的相同之處[1]。去甲氧基姜黃素不僅能夠起到抗癌、抗氧化及抗炎等藥理作用，而且毒副作用少，具有良好的應(yīng)用前景。然而，臨床研究發(fā)現(xiàn)去甲氧基姜黃素水溶性差，降低了其生物利用度[2-3]。作為新型的藥物載體，納米脂質(zhì)載體能夠促進(jìn)液態(tài)脂質(zhì)向固態(tài)脂質(zhì)的轉(zhuǎn)化，提升藥物包封率及載藥量，與此同時(shí)增強(qiáng)藥物與癌細(xì)胞親和力，效果顯著[4]。研究采用高效液相色譜法（HPLC）測定去甲氧基姜黃素納米脂質(zhì)載體中藥物含量，并對研究結(jié)果做出總結(jié)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑：此次研究采用的高效液相色譜儀型號為LC-4000，購自山東金普分析儀器有限公司；真空干燥箱型號為DZF-6020，購自北京中科博達(dá)儀器科技有限公司提供；電子分析天平型號為FA6103C，購自上海精科天美科學(xué)儀器有限公司；紫外-可見分光光度計(jì)型號為KV-T3，購自南京肯凡電子科技有限公司；AS30600BDT超聲波清洗器購自杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司。研究使用的去甲氧基姜黃素試劑（純度＞99%）購自南京道斯夫生物科技有限公司；十二烷基硫酸鈉購自蘇州市元碩精細(xì)化學(xué)品有限公司；卵磷脂購自安慶市中創(chuàng)工程技術(shù)有限責(zé)任公司；棕櫚酸甘油酯購自上海升德醫(yī)藥科技有限公司；單硬脂酸甘油酯購自南通錦恒化工有限公司；分析純購自德州潤昕實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。研究時(shí)實(shí)驗(yàn)室用水均為蒸餾水，其余試劑均為分析純。

1.2 方法：分述如下。

1.2.1 供試溶液制備：首先采用電子分析天秤精密稱取去甲氧基姜黃素納米脂質(zhì)載體制劑1ml，將其置入具塞錐形瓶，給予超聲及甲醇破乳處理；然后將上述物質(zhì)轉(zhuǎn)移到容量為50ml的容量瓶中，在其中加入適量甲醇溶液予以定容，將其留作備用?？瞻准{米脂質(zhì)載體溶液的制備方法與上述相同。稱取去甲氧基姜黃素5.1mg，將其置入50ml棕色容量瓶，在其中加入甲醇定容，達(dá)到相應(yīng)刻度后得110mg/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液，將其作為對照品溶液。

1.2.2 檢測波長確定：將甲醇作為空白，在紫外波長200～800nm范圍內(nèi)對去甲氧基姜黃素溶液進(jìn)行掃描，劑量為5mg/ml，經(jīng)過掃描，發(fā)現(xiàn)當(dāng)波長處于420nm時(shí)，去甲氧基姜黃素?fù)碛凶顝?qiáng)吸收率。因此，以420nm作為檢測波長。

1.2.3 色譜條件確定：色譜柱規(guī)格為4.6nm×250nm，5mm，柱溫以300℃為宜，流速設(shè)置為1.0ml/min，進(jìn)樣量為20ml，流動(dòng)相為5%乙腈與43：57冰乙酸。

1.2.4 專屬性試驗(yàn)：取去甲氧基姜黃素對照品溶液及去甲氧基姜黃素-納米脂質(zhì)載體溶液、空白納米脂質(zhì)載體溶液，分別給予甲醇稀釋，稀釋后各取20ml，進(jìn)樣所需的色譜條件如1.2.3所示。結(jié)果顯示，輔料不會(huì)影響到對去甲氧基姜黃素的測定，說明該測定方法專屬性強(qiáng)。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線：取 對 照 品溶液200μl、400μl、800μl、1600μl、3200μl及5000μl，置入容量為10ml以下的棕色量瓶中，經(jīng)過甲醇破乳處理后定容，得到濃度 分 別 為 2.04μl/ml、4.08μl/ml、8.16μl/ml、16.32μl/ml、32.64μl/ml、52.5μl/ml，并對峰面積 Y及濃度X進(jìn)行線性回歸分析，得方程為Y=122.32X-276.32，r=0.9997（n=6），且當(dāng)去甲氧基姜黃素檢測濃度處于2.04～52.6mg/ml時(shí)，濃度與吸光度線性關(guān)系良好。

2.2 精密度試驗(yàn)：對對照品溶液給予5次/d連續(xù)檢測，對日內(nèi)精密度進(jìn)行計(jì)算，同樣條件下進(jìn)行1次/d檢測，連續(xù)檢測5d，得出日間精密。結(jié)果顯示日內(nèi)精密度與日間精密度RSD分別為0.59%、0.67%（n=5），其能夠滿足實(shí)驗(yàn)測定相關(guān)要求。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)：對同一對照品在0、2、4、8、16、24不同時(shí)間點(diǎn)予以峰面積測定，得出RSD=0.49%（n=6），說明在24h內(nèi)其吸收基本穩(wěn)定，符合測定要求。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)：精密量取同一樣品，平行條件下制備6份去甲氧基姜黃素納米脂質(zhì)載體供試液，在相應(yīng)的色譜條件下進(jìn)行測定，結(jié)果顯示RSD為0.99%，體現(xiàn)出其良好的重復(fù)性。

2.5 加樣回收率測定：精密量取供試品溶液1ml，將其置入9個(gè)棕色容量瓶中，并將其平均分為三組，每組分別加入161μl、20μl、242μl對照品溶液，得到不同濃度溶液，分別測定其在420nm位置的吸光度值，求出回收率。見表1。

2.6 樣品檢測：制備去甲氧基姜黃素納米脂質(zhì)載體制劑3份，分別精密量取20μl，將其置入4ml EP管，給予甲醇定容處理，通過回歸方程計(jì)算具體濃度，結(jié)合稀釋倍數(shù)計(jì)算藥物含量。見表2。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果分析（n=9）

表2 樣品含量測定結(jié)果分析（n=3）

3 討論

脂質(zhì)納米粒在臨床中又被稱作是亞微米載體系統(tǒng)，其應(yīng)用方便，能夠促進(jìn)活性物與水在任意比例下進(jìn)行互溶，提升吸收效果[5-6]。國外學(xué)者M(jìn)ishra A等人在研究中采用HPLC法對復(fù)方姜黃微囊中的姜黃素及胡椒堿含量進(jìn)行測定，結(jié)果顯示，姜黃素0.07342～0.36726μg間、胡椒堿0.00338～0.01696μg間表現(xiàn)為良好的線性關(guān)系，其回收率分別達(dá)到了97.86%、97.43%，RSD分別為1.81%、1.04%，基于此次試驗(yàn)結(jié)果，對HPLC法有著較高的認(rèn)可度，其認(rèn)為該方法具有較高靈敏度，可在復(fù)方姜黃微囊中姜黃素及胡椒堿含量測定中得以應(yīng)用[7]。此次研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)去甲氧基姜黃素在420nm位置呈現(xiàn)出最大吸收，當(dāng)其濃度在2.04～52.6mg/ml之間，去甲氧基與吸光度的線性關(guān)系呈現(xiàn)為良好狀態(tài)，經(jīng)過計(jì)算，其平均回收率能夠達(dá)到99.22%，體現(xiàn)出該方法的優(yōu)越性，與國外學(xué)者研究一致。

綜上所述，采用HPLC法測定去甲氧基姜黃素納米脂質(zhì)載體中藥物含量，操作便利、準(zhǔn)確性高，結(jié)果可靠，可在臨床藥物含量檢測中得以推廣應(yīng)用。

[1]劉永濤，李樂，王賽賽，等.魚組織中雙去甲氧基姜黃素、去甲氧基姜黃素和姜黃素含量的超高效液相色譜法測定

[J].分析測試學(xué)報(bào)，2017，21(2)：183-184.

[2]韓超，朱振甌，劉濱，等.微波輔助萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定溫郁金中3個(gè)姜黃素類化合物[J].藥物分析雜志，2013，21(2)：185-188.

[3]陳進(jìn)，代文婷，何爭民，等.姜黃素納米脂質(zhì)載體中藥物含量及包封率測定方法的建立[J].中國藥物與臨床，2012，12(12)：1550-1553.

[4]Barbosa R D M， Klassen A， Marcato P D， et al.Validation of an HPLC method for the determination of Dibucaine encapsulated in Solid Lipid Nanoparticles and Nanostructured Lipid Carriers[J]. Latin American Journal of Pharmacy，2013，32(9)：1362-1369.

[5]肖衍宇，陳曦，鄒浪，等.注射用姜黃色素納米脂質(zhì)載體的制備及其質(zhì)量評價(jià)[J].中國新藥雜志，2013，16(9)：1088-1093.

[6]陳進(jìn)，代文婷，邢海燕，等.微載體藥物遞送系統(tǒng)在姜黃素中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2012，29(10)：885-889.

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2017-08-01