遲新濤

鹵蟲成體是海洋生態(tài)系統(tǒng)中重要的一類動(dòng)物性餌料生物，其富含促進(jìn)蝦、蟹生長發(fā)育和蛻皮特有活性物質(zhì)，是所有植物性餌料所不能替代的。鹵蟲成體是魚、蝦、蟹育苗后期適口的活餌料。用其直接投喂對(duì)提高抗病力，縮短養(yǎng)殖周期，凈化水質(zhì)有舉足輕重的作用。近幾年隨著一些水產(chǎn)品人工育苗技術(shù)的突破，對(duì)鹵蟲的需要時(shí)間從季節(jié)性變?yōu)槿晷?，?duì)鹵蟲的需要要求從無節(jié)幼體到成體。鹵蟲養(yǎng)殖具有投資少、生長快、周期短等優(yōu)點(diǎn)，是沿海漁民致富的好項(xiàng)目。

鹵蟲又稱鹽水豐年蟲，屬于節(jié)肢動(dòng)物門、甲殼綱，鰓足亞綱、無甲目、鹽水豐年蟲科，幼體適鹽范圍在20‰～100‰之間，成體適鹽范圍在10‰～120‰之間。鹵蟲成體適應(yīng)溫度范圍在15～35 ℃，最適溫度為25 ℃，孵化的適溫范圍在15～35 ℃之間，最適溫度為25～30℃。pH值7.8～9，溶解氧1 mg/L以上即可。

1選址

選擇進(jìn)排水方便，地勢平坦，圍堤堅(jiān)固，不滲漏的淺海池塘，水源水質(zhì)良好，鹽度20‰以上，pH值7.8～8.5。池塘兩端設(shè)進(jìn)排水閘門，進(jìn)水口處安裝80目濾網(wǎng)，排水口處安裝80目防逃網(wǎng).

2清池

清池具體方法是把池水排干曝曬3～5 d，然后加少許水用10 mg/L敵百蟲（含量90%）進(jìn)行清池，2～3天把池水排干、晾曬，直至藥性消失。

3施肥繁殖餌料生物

水體消毒2～3 d后，待毒性基本消失后，重新進(jìn)水80 cm，施用浮游藻類營養(yǎng)素培養(yǎng)鹵蟲的基本餌料生物，第一次施肥后，每隔5～7 d追肥一次，追肥量依池水中浮游藻類含量而定，施肥可按用尿素或硝酸銨22.5～67.5 kg/hm2并投磷肥11～22 kg/hm2。

4接種

當(dāng)池中浮游藻類達(dá)到一定數(shù)量，水溫穩(wěn)定在15 ℃以上，透明度小于35 cm，pH7.8～9，鹽度25‰～35‰，即可接種鹵蟲。接種鹵蟲的方法有兩種：一是直接接種鹵蟲卵。這種方法要使用前一年處理好的鹵蟲卵，接種密度為每升水體0.2～0.3 g，接種時(shí)要在池塘的上風(fēng)口順風(fēng)緩緩地倒入池塘中。二是先孵化出無節(jié)幼體，然后把無節(jié)幼體接種到池塘里。孵化鹵蟲時(shí)海水鹽度20‰～35‰，溫度25～30 ℃，溶解氧不低于2 mg/L，pH 7.8～9，光照2 000～4 000 lx，當(dāng)水質(zhì)達(dá)到孵化要求時(shí)，按每升水體放入3 g鹵蟲卵，在這樣的條件下大約24 h鹵蟲卵就可以孵化出無節(jié)幼體了。接種無節(jié)幼體時(shí)盡量安排在傍晚，選擇背風(fēng)處放養(yǎng)，每升水體接種500個(gè)無節(jié)幼體為最佳。

5培養(yǎng)管理

5.1維持池中浮游藻類的密度在適宜的范圍

最簡單的方法是測定池水的透明度，以透明度值來指導(dǎo)施肥，如果池水透明度值在35～50 cm之間表明池中的浮游藻類在適宜范圍之內(nèi)，如果透明度大于50 cm，表示浮游藻類數(shù)量不足，應(yīng)進(jìn)行施肥，如果透明度值小于35 cm，表示浮游藻類數(shù)量過多，應(yīng)停止施肥或灌入新鮮海水來調(diào)節(jié)。

5.2投餌

大面積培養(yǎng)鹵蟲，除施肥培養(yǎng)餌料生物外，隨著鹵蟲的生長，需逐步投喂人工餌料（如糠麩、雞糞、牛羊糞等，顆粒要小于50 μm，投喂量為每100 L水體投喂0.2 g，每天投喂2次。

5.3水質(zhì)監(jiān)測

正常的水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)是NH3不超過0.2 mg/L。要定期對(duì)水質(zhì)指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測，每天測定溫度、鹽度、pH、水色、透明度、溶解氧等指標(biāo)，每周監(jiān)測氨氮、亞硝酸鹽、H2S等指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)問題后，及時(shí)采取措施。

5.4生長狀況監(jiān)測

定期取樣，觀察鹵蟲的生長繁殖情況，觀察有無疾病及死亡現(xiàn)象，發(fā)現(xiàn)不正?，F(xiàn)象，應(yīng)分析原因，及時(shí)采取措施，及時(shí)解決。當(dāng)水溫超過25℃時(shí)，每隔7天用一次聚維酮碘進(jìn)行消毒，具體用量參照說明書。

7收獲

鹵蟲經(jīng)半個(gè)月的培養(yǎng)長成成體并繁殖后代，當(dāng)培養(yǎng)池中鹵蟲達(dá)到一定密度后，通常在200～3 000個(gè)/L時(shí)，即可收獲成體鹵蟲，一般采用10目塑料絲網(wǎng)布、粗網(wǎng)目的篩絹制成的抄網(wǎng)直接撈取，為保證餌料的連續(xù)供應(yīng)，應(yīng)采取連續(xù)培養(yǎng)，合理計(jì)劃收獲的方法，并加強(qiáng)管理，保持池中有足夠數(shù)量的鹵蟲，才能保持供應(yīng)。根據(jù)養(yǎng)殖期間每hm2水面每天的捕撈量150 kg算，按一年養(yǎng)殖6個(gè)月，成蟲8～10元/kg，每hm2養(yǎng)殖水面可達(dá)270 000元，扣除生產(chǎn)成本，估計(jì)年利潤150 000元左右，經(jīng)濟(jì)效益可觀。

（收稿日期：2018-06-30）

（上接第5頁）

[13] Chung H W.[Reverse transcriptase PCR （RT-PCR） and quantitative-competitive PCR （QC-PCR）][J].Experimental & Molecular Medicine，2001，33（1 Suppl）：85-97.

[14] Andréeanne Dussault M P.Rapid and simple comparison of messenger RNA levels using real-time PCR[J].Biological Procedures Online，2006，8（1）：1-10.

[15] 陳旭，齊鳳坤，康立功，等.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究進(jìn)展及其應(yīng)用[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，21（8）：148-155.

[16] 谷守芹，解靈君，范永山.植物組織總RNA提取的常用方法及優(yōu)化策略[J].保定師范專科學(xué)校學(xué)報(bào)，2005，18（2）：40-43.

[17] 林仁勇，丁劍冰，溫浩，等.半定量RT-PCR檢測細(xì)胞因子表達(dá)的研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，26（5）：427-429.

[18] 林萬明.PCR技術(shù)操作和應(yīng)用指南[M].人民軍醫(yī)出版社，1993.

[19] 高海波，張拴林，陳燕紅.半定量RT-PCR在基因表達(dá)方面的應(yīng)用[J].畜禽業(yè)，2008（2）：34-37.

[20] 楊桂梅，鮑寶龍，任大明.3-磷酸甘油醛脫氫酶、β-肌動(dòng)蛋白和18SrRNA作為相對(duì)定量的內(nèi)標(biāo)在牙鲆發(fā)育階段的穩(wěn)定性比較[J].上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，14（1）：84-88.

[21] 任亮，蘇玉虹，巴彩鳳，等.PCR引物設(shè)計(jì)技巧[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2005（6）：49.

[22] Taverniers I，Van B E，De L M.Cloned plasmid DNA fragments as calibrators for controlling GMOs： different real-time duplex quantitative PCR methods.[J].Analytical & Bioanalytical Chemistry，2004，378（5）：1198-1207.

[23] Buh G M，Tengs T，La Paz J L，et al.Comparison of nine different real-time PCR chemistries for qualitative and quantitative applications in GMO detection.[J].Analytical & Bioanalytical Chemistry，2010，396（6）：2023-2029.

Design and evaluation of primers for analysis of mitfa gene

expression in Amphilophus using real-time quantitative PCR technique

SHANG Dongwei1，LI Jinglong1，SHI Hongyue2，SUN Xueliang2，

FANG Zhenzhen2， JI Yanbin2，CHEN Chengxun2

（1.Lizigu Farm of Baodi，Tianjin 301809，China；2.College of Fisheries，Tianjin Agricultural

University，Tianjin Key Laboratory of Aquatic Ecology and Aquaculture，Tianjin 300384，China）

Abstract：Microphthalmia-associated transcription factor （MITF） plays an important role in the regulation of the development and differentiation of melanocytes.In order to understand the relationship between pigment related genes and body color，and to analyze the expression profiles of Amphilophus，real-time fluorescence quantitative PCR （qPCR） technology was used to extract RNA from the skin and fins of Amphilophus. The primers of the Mitfa gene fragment of Amphilophus were amplified and qPCR was assessed by Primer 5 software.

Key words：Amphilophus； Mitfa； real-time fluorescence quantitative PCR

（收稿日期：2018-06-19；修回日期：2018-09-11）《河北漁業(yè)》2018年第10期（總第298期）○病害防治DOI：10.3969/j.issn.1004-6755.2018.10.013