馬 艷，丁香平

(江西省婦幼保健院腫瘤科陰道鏡室，南昌 330006)

P16和Ki-67在宮頸上皮內(nèi)瘤變分級中的臨床應(yīng)用

馬 艷，丁香平

(江西省婦幼保健院腫瘤科陰道鏡室，南昌 330006)

目的檢測不同級別的宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)中P16和Ki-67的表達(dá)水平，探討P16和Ki-67對輔助CIN分級的臨床意義。方法選擇不同級別的CIN患者513例(其中CINⅠ263例，CINⅡ131例，CINⅢ119例)，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法對其宮頸上皮組織進(jìn)行P16和Ki-67檢測，分析不同級別CIN所對應(yīng)的P16和Ki-67表達(dá)強(qiáng)度。結(jié)果P16表達(dá)強(qiáng)度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐漸增高，P16表達(dá)強(qiáng)度與CIN分級呈正相關(guān)(r=0.621，P<0.01)；Ki-67表達(dá)強(qiáng)度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐漸增高，Ki-67表達(dá)強(qiáng)度與CIN分級亦呈正相關(guān)(r=0.702，P<0.01)；P16和Ki-67兩種方法的表達(dá)呈一致性(r=0.834，P<0.01)。結(jié)論P(yáng)16和Ki-67對CIN分級提供十分有用的參考價(jià)值，兩者聯(lián)合應(yīng)用有助于病理醫(yī)生對CIN診斷的一致性。

P16； Ki-67； 免疫組織化學(xué)； 宮頸上皮內(nèi)瘤變； 分級

宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)診斷和分級以病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，而一份良好的組織學(xué)報(bào)告取決于臨床病史、病理組織的質(zhì)量和病理學(xué)醫(yī)師的專業(yè)技能和經(jīng)驗(yàn)。相關(guān)報(bào)道[1-2]表明對于高級別CIN(HSIL)，在不同的病理學(xué)醫(yī)師之間診斷的可重復(fù)性較好，而在診斷低級別CIN(LSIL)時(shí)可重復(fù)性較差。P16蛋白是由正常細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，可以抑制細(xì)胞周期蛋白D的合成，通過免疫組織化學(xué)染色檢測可了解其失活狀態(tài)；P16蛋白是輔助診斷CIN并鑒別LSIL和HSIL的一個(gè)標(biāo)記物[3]。Ki-67增殖細(xì)胞核抗原反映細(xì)胞增殖活性，通過免疫組織化學(xué)染色檢測標(biāo)記細(xì)胞的抗體水平，可反映正常和病變細(xì)胞的增殖活性。有研究[4]認(rèn)為Ki-67陽性細(xì)胞在CIN各級別的差異有顯著性，是有利于CIN分級的標(biāo)記物。本研究通過檢測不同級別CIN中P16和Ki-67的表達(dá)水平，探討P16和Ki-67對輔助CIN分級的臨床意義。

1 對象和方法

1.1 研究對象

選擇2016年1—12月在江西省婦幼保健院門診就診的513例患者，通過了解病史和病理診斷為CIN，其中CINⅠ 263例，CINⅡ 131例，CINⅢ 119例)。宮頸上皮組織標(biāo)本采用蘇木素-伊紅(HE)染色，由3位高年資病理醫(yī)師檢閱切片，選取2位以上醫(yī)師一致診斷意見。

1.2 檢測方法及判定標(biāo)準(zhǔn)

試劑：鼠抗P16/MTS1(6H12)抗體和小鼠抗人Ki-67單克隆抗體。組織切片：甲醛溶液固定石蠟切片。采用德國Leica公司生產(chǎn)的BOND-MAX型全自動免疫組織化學(xué)染色機(jī)檢測。

P16結(jié)果判定：陽性細(xì)胞比例<5%(-)陰性，陽性細(xì)胞比例5%～25%(+)弱陽性，陽性細(xì)胞比例26%～75%()陽性，陽性細(xì)胞比例>75%()強(qiáng)陽性。Ki-67結(jié)果判定：<5%細(xì)胞著色(-)陰性，5%～25%細(xì)胞著色(+)弱陽性，26%～50%細(xì)胞著色()陽性，>50%細(xì)胞著色()強(qiáng)陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS19.0建立數(shù)據(jù)庫，采用非參數(shù)檢驗(yàn)中Spearman檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 P16在各級別CIN的表達(dá)強(qiáng)度

P16表達(dá)強(qiáng)度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐級增高，Spearman檢驗(yàn)，相關(guān)系數(shù)r=0.621，P<0.01，提示P16表達(dá)強(qiáng)度與CIN級別呈正相關(guān)。見表1。

表1 P16在各級別CIN的表達(dá)強(qiáng)度 例

2.2 Ki-67在各級別CIN的表達(dá)強(qiáng)度

Ki-67表達(dá)強(qiáng)度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐級增高，Spearman檢驗(yàn)，相關(guān)系數(shù)r=0.702，P<0.01，提示Ki-67表達(dá)強(qiáng)度與CIN級別呈正相關(guān)。見表2。

表2 Ki-67在各級別CIN的表達(dá)強(qiáng)度 例

2.3 P16和Ki-67在各級別CIN的表達(dá)強(qiáng)度相關(guān)性比較

P16和Ki-67兩種檢測方法在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ表達(dá)強(qiáng)度呈一致性，相關(guān)系數(shù)r=0.843，P<0.01。

3 討論

P16蛋白能調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白E的合成，而細(xì)胞周期蛋白E能激活生長周期中DNA的合成，從而抑制細(xì)胞周期蛋白D的產(chǎn)生。HPV-E7基因產(chǎn)物可結(jié)合視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤的基因產(chǎn)物和蛋白，并抑制后者的磷酸化過程，因此，P16的過度表達(dá)間接顯示了E7蛋白的出現(xiàn)，表明致癌性的人類乳頭瘤病毒(HPV)整合進(jìn)入了宿主細(xì)胞。P16蛋白可通過免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測，且應(yīng)用P16免疫組織化學(xué)技術(shù)能鑒別LSIL和HSIL，并有較高的敏感性和特異性，P16在預(yù)測LSIL的結(jié)局也有一定價(jià)值[3]。Volgareva等[5]研究顯示P16的表達(dá)在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中的陽性率逐漸增加，推薦P16用于子宮頸癌的早期診斷的輔助檢查。Finegan等[6]研究認(rèn)為P16常在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)，在良性病變和低級別病變時(shí)陰性，P16可能是從低級別到高級別病變轉(zhuǎn)化的標(biāo)志物。O’Neill等[7]認(rèn)為P16有助于診斷局灶性高級別CIN病變。也有研究[8]表明P16在宮頸病變組織中的表達(dá)與組織分化程度呈顯著正相關(guān)關(guān)系，是宮頸病理和細(xì)胞學(xué)診斷的良好補(bǔ)充。本研究結(jié)果顯示，P16表達(dá)強(qiáng)度與CIN級別呈正相關(guān)，支持上述結(jié)論，同時(shí)結(jié)果(表2)也顯示有83.65%(220/263)CINⅠ患者P16呈陰性或弱陽性，39.69%(52/131)CINⅡ患者P16呈陰性或弱陽性，11.76%(14/119)CINⅢ患者P16呈弱陽性，提示P16并不能獨(dú)立作為CIN級別高低的鑒別。

Ki-67是一種增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，反映細(xì)胞增殖活性，與很多惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān)，在宮頸病變中，Ki-67的表達(dá)良性病變明顯低于惡性病變，Ki-67有助于CIN診斷、分級和評估預(yù)后[9-10]。Korolenkova等[4]認(rèn)為Ki-67表達(dá)指數(shù)與CIN相關(guān)，并可作為CIN診斷、分級和評估病程的標(biāo)記物。Calil等[11]認(rèn)為P16和Ki-67的表達(dá)與宮頸病變是否為高危型HPV感染和宮頸高級別病變密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示Ki-67表達(dá)強(qiáng)度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐級增高，表達(dá)強(qiáng)度與CIN級別呈正相關(guān)，提示Ki-67表達(dá)與CIN病變程度呈正相關(guān)。張燕等[12]研究認(rèn)為P16和Ki-67在宮頸組織中的表達(dá)一致性具有顯著的正相關(guān)性，P16和Ki-67對宮頸良性改變的甄別、CIN的分級判定及宮頸早期浸潤癌的診斷具有重要價(jià)值。謝小麗[13]研究認(rèn)為P16聯(lián)合Ki-67可以用于鑒別宮頸良性病變和CIN及CIN病變程度的判定。本研究結(jié)果顯示P16和Ki-67兩種檢測方法在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ表達(dá)強(qiáng)度呈一致性，提示P16和Ki-67兩種檢測方法聯(lián)合應(yīng)用對CIN分級判斷有重要參考價(jià)值。

P16和Ki-67能否對CIN進(jìn)行預(yù)后判定目前尚有爭議。del Pino等[14]對138例P16陽性的CINⅠ患者進(jìn)行平均29個(gè)月的追蹤隨訪，僅10.1%進(jìn)展為CINⅡ或CINⅢ，47.6%轉(zhuǎn)陰，42%維持CINⅠ，55.8%患者P16表達(dá)繼續(xù)保持陽性，提示CINⅠ即使P16表達(dá)陽性，也很少進(jìn)展高級別CIN。Zhong等[15]研究認(rèn)為P16和Ki-67表達(dá)有助于提高CIN病變的診斷準(zhǔn)確性，但不能對LSIL的預(yù)后進(jìn)行預(yù)測。王榮敏等[16]對P16與CINⅠ病變進(jìn)展進(jìn)行Meta分析，認(rèn)為P16是CINⅠ病變進(jìn)展的預(yù)測因子，對CINⅠ的分流有一定價(jià)值，可用于篩查出高危人群重點(diǎn)隨訪。

綜上所述，P16和Ki-67對CIN分級提供十分有用的參考價(jià)值，兩者結(jié)合應(yīng)用有助于CIN診斷和分級，兩種方法聯(lián)合應(yīng)用可能對CIN預(yù)后判定有幫助，但仍然需要進(jìn)一步相關(guān)研究。

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ClinicalApplicationofP16andKi-67inGradingofCervicalIntraepithelialNeoplasia

MAYan,DINGXiang-ping

(VaginoscopyRoom,DepartmentofOncology,JiangxiMaternalandChildHealthCareHospital,Nanchang330006,China)

ObjectiveTo detect the expression of P16 and Ki-67 in different grades of cervical intraepithelial neoplasia(CIN),and to investigate their clinical significance in CIN grading.MethodsThe expression of P16 and Ki-67 in cervical epithelium was measured by immunohistochemistry in 513 patients with different grades of CIN(263 cases of CINⅠ,131 cases of CINⅡ,119 cases of CINⅢ).ResultsThe levels of both P16 and Ki-67 expression were positively with the grade of CIN(r=0.621 andr=0.702,respectively;P<0.01).There was a consistency in the expression of P16 and Ki-67(r=0.834,P<0.01).ConclusionThe expression of P16 and Ki-67 provides a reference for CIN classification.The combined detection of P16 and Ki-67 expression is helpful for the consistency of CIN diagnosis.

P16; Ki-67; immunohistochemistry; cervical intraepithelial neoplasia; grading

2017-06-11

馬艷(1982—)，女，學(xué)士，主治醫(yī)師，主要從事婦幼保健學(xué)的研究。

R737.33

A

1009-8194(2017)10-0041-03

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.10.016

鐘榮梅)