張建坤，單微，張迎春，賈翠英，于磊，耿峰，李春峰（.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，黑龍江齊齊哈爾 6000；.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院心血管二科，黑龍江齊齊哈爾 6000；.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院藥局，黑龍江齊齊哈爾 6000；4.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院心內(nèi)一科，黑龍江齊齊哈爾 6000）

PCI術(shù)前給予替羅非班聯(lián)合阿托伐他汀對急性心肌梗死患者外周血微RNA表達(dá)及血管內(nèi)皮功能的影響Δ

張建坤1＊，單微1，張迎春1，賈翠英1，于磊2，耿峰3，李春峰4#（1.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科，黑龍江齊齊哈爾 161000；2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院心血管二科，黑龍江齊齊哈爾 161000；3.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院藥局，黑龍江齊齊哈爾 161000；4.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院心內(nèi)一科，黑龍江齊齊哈爾 161000）

目的：探討經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)（PCI）術(shù)前給予替羅非班聯(lián)合阿托伐他汀對急性心肌梗死患者外周血微RNA（miRNA）表達(dá)及血管內(nèi)皮功能的影響。方法：選取2015年1月－2016年6月我院收治的急性心肌梗死患者80例作為研究對象，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組和觀察組，各40例。兩組患者均進(jìn)行抗凝治療；對照組患者于PCI術(shù)前30 min口服阿司匹林腸溶片300 mg+硫酸氫氯吡格雷片75 mg+阿托伐他汀鈣片20 mg；觀察組患者在對照組基礎(chǔ)上給予注射用鹽酸替羅非班首次劑量0.5 mg+0.9%氯化鈉注射液100 mL，iv，之后改為0.4 μg/（kg·min）泵注，30 min后改為0.1 μg/（kg·min）泵注，持續(xù)時(shí)間為24 h。觀察兩組患者給藥前和PCI術(shù)后外周血miRNA（miRNA-1、miRNA-133a、miRNA-208b、miRNA-499）表達(dá)水平、肱動(dòng)脈內(nèi)徑及血管內(nèi)皮功能指標(biāo)[血管性假血友病因子（vWF）、內(nèi)皮素1（ET-1）、一氧化氮（NO）]水平，并記錄不良反應(yīng)發(fā)生情況。結(jié)果：治療前，兩組患者上述指標(biāo)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，兩組患者miRNA表達(dá)水平及vWF、ET-1水平均顯著降低，且觀察組顯著低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組患者肱動(dòng)脈內(nèi)徑及NO水平均顯著增加，且觀察組顯著大于或高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組患者治療過程中均未見明顯的不良反應(yīng)發(fā)生。結(jié)論：PCI術(shù)前給予替羅非班聯(lián)合阿托伐他汀治療急性心肌梗死，可降低患者miRNA表達(dá)水平，增大肱動(dòng)脈內(nèi)徑，對血管內(nèi)皮功能具有保護(hù)作用，且安全性較高。

替羅非班；阿托伐他汀；急性心肌梗死；經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)；外周血；微RNA；血管內(nèi)皮功能

急性心肌梗死是臨床較為常見的心血管疾病，主要由冠狀動(dòng)脈內(nèi)的硬化斑塊發(fā)生破裂或血栓形成所致，具有較高的病死率。臨床治療急性心肌梗死的主要方法為經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入術(shù)（Percutancous coronary intervention，PCI），可通過手術(shù)重建冠狀動(dòng)脈血運(yùn)，進(jìn)而改善患者心肌供血及相關(guān)臨床癥狀[1-2]。但研究發(fā)現(xiàn)，PCI術(shù)中應(yīng)用的擴(kuò)張球囊可對患者的冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)皮產(chǎn)生不同程度的損傷，增加了患者PCI術(shù)后急性、亞急性冠狀動(dòng)脈內(nèi)血栓再形成和支架內(nèi)再狹窄的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，影響其臨床療效及遠(yuǎn)期預(yù)后[3]。目前，臨床針對上述問題尚缺乏有效的干預(yù)手段，一般通過應(yīng)用降脂藥物（如阿托伐他汀等）進(jìn)行調(diào)脂、抗血栓和抗血小板等治療，但降脂藥物對血管內(nèi)皮功能的影響尚不明確[4]。鑒于此，本研究探討了PCI術(shù)前給予替羅非班聯(lián)合阿托伐他汀對急性心肌梗死患者外周血微RNA（miRNA）及血管內(nèi)皮功能的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《內(nèi)科學(xué)》中急性心肌梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；（2）符合PCI指征；（3）年齡45～75歲；（4）患者知情同意并簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）惡性腫瘤患者；（2）嚴(yán)重的內(nèi)科疾病患者；（3）嚴(yán)重的肝、腎、肺功能不全者；（4）慢性傳染性疾病患者；（5）精神疾病患者；（6）存在藥物過敏史患者；（7）存在心臟介入術(shù)史患者。

1.2 研究對象

本研究方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過后，選取2015年1月－2016年6月我院收治的急性心肌梗死患者80例作為研究對象，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組和觀察組，各40例。兩組患者的年齡、性別、病程、心肌梗死發(fā)作時(shí)間、靶血管和并發(fā)癥等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，詳見表1。

1.3 治療方法

兩組患者均按照《急性冠狀動(dòng)脈綜合征非血運(yùn)重建患者的抗血小板治療的中國專家共識（修訂案）》[6]進(jìn)行抗凝治療。對照組患者于PCI術(shù)前30 min口服阿司匹林腸溶片（上海信誼百路達(dá)藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H31022475，規(guī)格：25 mg）300 mg+硫酸氫氯吡格雷片（深圳信立泰藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20000542，規(guī)格：25 mg）75 mg+阿托伐他汀鈣片（北京嘉林藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20093819，規(guī)格：20 mg）20 mg；觀察組患者在對照組基礎(chǔ)上給予注射用鹽酸替羅非班[山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20090227，規(guī)格：12.5 mg（以替羅非班計(jì)）]首次劑量0.5 mg+0.9%氯化鈉注射液100 mL，iv后即改為0.4 μg/（kg·min）泵注，30 min后改為0.1 μg/（kg·min）泵注，持續(xù)時(shí)間為24 h。

表1 兩組患者一般資料比較Tab 1 Comparison of general information of patients between 2 groups

1.4 觀察與檢測指標(biāo)

（1）檢測兩組患者給藥前和PCI術(shù)后外周血miRNA（miRNA-1、miRNA-133a、miRNA-208b、miRNA-499）的表達(dá)水平。采集兩組患者清晨空腹外周血5 mL，置于不含抗凝劑的試管中靜置30 min，經(jīng)3 000 r/min（離心半徑8 cm）離心15 min后提取上清液低溫貯存。采用Taq-Man Micro RNA Assays中聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）引物探針混合液（美國賽默飛世爾科技公司）進(jìn)行PCR擴(kuò)增及熒光定量檢測，測定血清中miRNA-1、miRNA-133a、miRNA-208b、miRNA-499的表達(dá)水平；待反應(yīng)結(jié)束后計(jì)算閾值循環(huán)數(shù)（Ct）值，并以倍數(shù)的方式計(jì)算患者平均miRNA表達(dá)水平。試驗(yàn)嚴(yán)格按照miRNA提取試劑盒（哈爾濱北國?；锟萍加邢薰荆┑恼f明書進(jìn)行操作。（2）檢測兩組患者給藥前和PCI術(shù)后肱動(dòng)脈內(nèi)徑及血管內(nèi)皮功能指標(biāo)水平。采用IU22型多普勒超聲診斷儀（荷蘭飛利浦公司）檢測兩組患者肘上2～15 cm處的肱動(dòng)脈內(nèi)徑，選取心室舒張末期測量前后內(nèi)膜之間的垂直距離，取平均值作為肱動(dòng)脈內(nèi)徑；檢測兩組患者血管內(nèi)皮功能指標(biāo)[血管性假血友病因子（vWF）、內(nèi)皮素1（ET-1）、一氧化氮（NO）]水平，其中vWF、ET-1采用酶聯(lián)免疫吸附法測定，NO采用硝酸鹽還原酶法測定。（3）記錄兩組患者治療過程中不良反應(yīng)的發(fā)生情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或率表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后血清miRNA表達(dá)水平比較

治療前，兩組患者 miRNA-1、miRNA-133a、miRNA-208b和miRNA-499表達(dá)水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者上述miRNA表達(dá)水平均顯著降低，且觀察組顯著低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表2。

表2 兩組患者治療前后血清miRNA-1、miRNA-133a、miRNA-208b和miRNA-499表達(dá)水平比較（x±s）Tab 2 Comparison of the expression levels of serum miRNA-1，miRNA-133a，miRNA-208b and miRNA-499 between 2 groups before and after treatment（x±s）

2.2 兩組患者治療前后肱動(dòng)脈內(nèi)徑及血管內(nèi)皮功能指標(biāo)比較

治療前，兩組患者肱動(dòng)脈內(nèi)徑及血管內(nèi)皮功能指標(biāo)（vWF、ET-1、NO）比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；治療后，兩組患者肱動(dòng)脈內(nèi)徑及NO水平均顯著增加，vWF、ET-1水平均顯著降低，且觀察組上述指標(biāo)均顯著優(yōu)于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表3。

表3 兩組患者治療前后肱動(dòng)脈內(nèi)徑及血管內(nèi)皮功能指標(biāo)比較（x±s）Tab 3 Comparison of brachial artery diameter and vascular endothelial function indexes between 2 groups before and after treatment（x±s）

2.3 不良反應(yīng)

兩組患者治療過程中均未見明顯的不良反應(yīng)發(fā)生。

3 討論

阿托伐他汀是臨床常用的降脂藥物，作為一種羥甲基戊二酰輔酶A還原酶的選擇性、競爭性抑制劑，具有良好的降脂效果，其代謝產(chǎn)物還可對C反應(yīng)蛋白、氧化型低密度脂蛋白、細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶系統(tǒng)的活性產(chǎn)生明顯的抑制作用，進(jìn)而達(dá)到激活血管內(nèi)皮NO的目的，發(fā)揮改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能及降低局部血管內(nèi)皮血栓形成的作用[7]。替羅非班為可逆性的血小板表面糖蛋白（GP）Ⅱb/Ⅲa型受體拮抗劑，其藥理活性為通過對纖維蛋白原與GPⅡb/Ⅲa受體結(jié)合的抑制作用，阻滯血小板的交聯(lián)、聚集活動(dòng)，進(jìn)而產(chǎn)生有效的抗凝作用[7]。相關(guān)研究顯示，靜脈注射替羅非班能夠在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生強(qiáng)效的血小板抑制作用，對延長患者的出血時(shí)間及抑制血栓形成具有重要意義[7-8]。

miRNA作為一種長19～23個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼單鏈，通過與靶點(diǎn)信使RNA（mRNA）分子中3′非編碼區(qū)域產(chǎn)生互補(bǔ)配對作用，抑制靶點(diǎn)mRNA翻譯，并對其進(jìn)行特異性切割，從而達(dá)到調(diào)控靶基因的目的[9-10]。臨床研究顯示，miRNA在細(xì)胞的分化和代謝等多種生理過程中具有重要作用，且miRNA的異常變化與機(jī)體的多種疾病形成及進(jìn)展具有一定的相關(guān)性，并已經(jīng)證實(shí)心血管疾病患者在病程早期會(huì)出現(xiàn)miRNA表達(dá)水平的異常變化[9]。動(dòng)脈內(nèi)徑的變化可直接反映機(jī)體血管的健康程度，當(dāng)動(dòng)脈硬度增加時(shí)可導(dǎo)致動(dòng)脈管腔的內(nèi)徑縮小，提示患者可能存在心血管疾病及臨床預(yù)后較差等危險(xiǎn)因素[10]。本研究結(jié)果顯示，兩組患者治療后miRNA-1、miRNA-133a、miRNA-208b和miRNA-499等miRNA的表達(dá)水平均顯著降低，肱動(dòng)脈內(nèi)徑均顯著增加，這與既往臨床研究[3]結(jié)果相一致，提示PCI術(shù)前給予替羅非班聯(lián)合阿托伐他汀可有效降低患者miRNA表達(dá)水平，并增大肱動(dòng)脈的內(nèi)徑。

本研究觀察的血管內(nèi)皮功能指標(biāo)為vWF、ET-1和NO，其中ET-1是一種用于血管內(nèi)皮細(xì)胞合成的縮血管因子，NO則為舒張血管的主要因子。生理狀態(tài)下，當(dāng)機(jī)體的血管內(nèi)皮受到損傷后，可導(dǎo)致外周血中ET-1水平的快速反應(yīng)性升高，但NO水平卻表現(xiàn)出明顯的降低狀態(tài)[11]。近年來的研究顯示，ET-1和NO比例失調(diào)時(shí)可誘發(fā)血管舒張功能發(fā)生障礙[11]。vWF是一種由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成的可直接反映血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度的標(biāo)志物，其水平越高表示患者內(nèi)皮細(xì)胞的損傷程度越嚴(yán)重[11]。因此，通過檢測vWF、ET-1和NO水平對判斷患者是否存在血栓、心血管疾病的預(yù)后結(jié)局具有重要的臨床意義[12-13]。本研究結(jié)果顯示，PCI術(shù)后患者vWF、ET-1水平均顯著降低，且觀察組顯著低于對照組；NO水平則顯著升高，且觀察組顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組患者vWF和ET-1水平均介于正常范圍內(nèi)，但NO水平顯著低于正常值，這可能與患者PCI術(shù)后存在血小板活化急劇增加的現(xiàn)象，同時(shí)內(nèi)皮功能受到不同程度的損傷有關(guān)[14-15]。

綜上所述，PCI術(shù)前給予替羅非班聯(lián)合阿托伐他汀治療急性心肌梗死，可降低患者miRNA表達(dá)水平，增大肱動(dòng)脈內(nèi)徑，對血管內(nèi)皮功能具有保護(hù)作用，且安全性較高。但本研究樣本量相對較小，且未觀察患者的長期療效及心肌梗死的復(fù)發(fā)情況，有待大樣本、多中心臨床研究的進(jìn)一步驗(yàn)證。

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Effects of Tirofiban Combined with Atorvastatin before PCI on miRNA Expression of Peripheral Blood and Vascular Endothelial Function in Acute Myocardial Infarction Patients

ZHANG Jiankun1，SHAN Wei1，ZHANG Yingchun1，JIA Cuiying1，YU Lei2，GENG Feng3，LI Chunfeng4（1.Dept.of Clinical Laboratory，the Second Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University，Heilongjiang Qiqihar 161000，China；2.Dept.Two of Cardiology，the Second Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University，Heilongjiang Qiqihar 161000，China；3.Dept.of Pharmacy，the Second Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University，Heilongjiang Qiqihar 161000，China；4.Dept.One of Cardiology，the Second Affiliated Hospital of Qiqihar Medical University，Heilongjiang Qiqihar 161000，China）

OBJECTIVE：To investigate the effects of tirofiban combined with atorvastation before PCI on the miRNA expression of peripheral blood and vascular endothelial function in acute myocardial infarction（AMI）patients.METHODS：A total of 80 patients with AMI selected from our hospital as reaserch objects during Jan.2015-Jun.2016 were divided into control group and observation group according to random number table，with 40 cases in each group.Both groups

anticoagulant therapy.Control group was given Aspirin enteric-coated tablets 300 mg+Clopidogrel sulfate tablets 75 mg+Atorvastatin calcium tablets 20 mg orally 30 min before PCI.Observation group was additionally given Tirofiban hydrochloride for injection with initial dose of 0.5 mg+0.9%Sodium chloride injection 100 mL，iv，then adjusted to pump injection of 0.4 μg/（kg·min），30 min later adjusted to pump injection of 0.1 μg/（kg·min），for consecutive 24 h.The levels of peripheral miRNA（miRNA-1，miRNA-133a，miRNA-208b，miRNA-499），the levels of brachial artery diameter and vascular endothelial function indexes（vWF，ET-1，NO）were observed in 2 groups before medication and after PCI，and the occurrence of ADR was recorded.RESULTS：Before treatment，there was no statistical significance in above indexes between 2 groups（P＞0.05）.After treatment，miRNA expression，the levels of vWF and ET-1 were decreased significantly in 2 groups，and observation group was significantly lower than control group，with statistical significance（P＜0.05）.The brachial artery diameter and NO levels of 2 groups were increased significantly，and observation group was significantly greater or higher than control group，with statistical significance（P＜0.05）.No obvious ADR was found in 2 groups during treatment.CONCLU-SIONS：For AMI，tirofiban combined with atorvastation before PCI can reduce miRNA expression，increase brachial artery diameter and protect vascular endothelial function with good safety.

Tirofiban；Atorvastatin；Acute myocardial infarction；PCI；Peripheral blood；miRNA；Vascular endothelial function

R972+.6

A

1001-0408（2017）35-4952-04

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.35.15

黑龍江省衛(wèi)生計(jì)生委科研課題（No.2014-185）

＊主治醫(yī)師，碩士。研究方向：心內(nèi)疾病血液指標(biāo)檢測評價(jià)。電話：0452-2736282。E-mail：964985489@qq.com

#通信作者：主任醫(yī)師，碩士。研究方向：心內(nèi)疾病診治。電話：0452-2736556。E-mail：112994779@qq.com

2017-03-03

2017-09-19）

（編輯：陶婷婷）