李小玉，羅一鈞

(贛州市第五人民醫(yī)院，江西 贛州 341000)

鮑曼不動桿菌對耐碳青霉烯類抗生素耐藥機制研究〔1〕

李小玉，羅一鈞

(贛州市第五人民醫(yī)院，江西 贛州 341000)

目的：探討鮑曼不動桿菌(CRAB)耐碳青霉烯類抗生素的機制，為臨床選擇抗生素提供合理意見，同時為新藥開發(fā)提供參考。方法：采用瓊脂紙片擴散法(K-B法)及聚合酶鏈反應(PCR)法從78株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌中篩選出8株僅對多黏菌素敏感、1株全敏感的臨床株。采用PAβN外排泵抑制試驗檢測其外排泵表型。PCR擴增耐藥基因，并對陽性產(chǎn)物進行雙向測序分析，確定其基因型。結(jié)果：CRAB的耐藥性非常嚴重，對12種抗菌藥物中的9種均耐藥(耐藥率>90%)，其中對哌拉西林、頭孢他啶、哌拉西林-他唑巴坦和美洛培南的耐藥率均為100.0%。結(jié)論：鮑曼不動桿菌對碳青霉烯抗生素具有較高的耐藥性，應加強對該類抗菌藥使用的監(jiān)控。

膜蛋白；鮑曼不動桿菌；耐碳青霉烯類抗生素；機制

鮑曼不動桿菌(CRAB)是不動桿菌屬中最常見的一種革蘭陰性球桿菌，該菌廣泛分布于醫(yī)院，是一種重要的機會病原菌，能引起一系列院內(nèi)感染，如菌血癥、尿路感染、繼發(fā)性腦膜炎、手術(shù)部位感染及呼吸機相關(guān)性肺炎等，嚴重威脅患者生命，尤以ICU病房感染率和病死率最高[1]。由于抗生素的廣泛應用，造成對耐藥菌的篩選，使得近年來多重耐藥鮑曼不動桿菌的感染日趨增多，現(xiàn)階段鮑曼不動桿菌碳青霉烯類耐藥正成為臨床微生物領(lǐng)域的研究熱點[2]。旨在探討鮑曼不動桿菌對耐碳青霉烯類抗生素的機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院2014年12月—2016年2月臨床分離的耐亞胺培南鮑曼不動桿菌78株，去除同一患者相同部位重復分離株。

1.2 方法

采用瓊脂紙片擴散法(K-B法)及聚合酶鏈反應(PCR)法從78株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌中篩選出8株僅對多黏菌素敏感、1株全敏感的臨床株。采用PAβN外排泵抑制試驗檢測其外排泵表型。采用聚合酶鏈反應(PCR)擴增耐藥基因blaKPC、blaOXA及ESBLs基因blaTEM、blaCTX-M、blaSHV、blaOXA，DNA模板采用加熱煮沸法制備，并對陽性產(chǎn)物進行雙向測序分析，確定其基因型。

2 結(jié) 果

2.1 藥敏試驗結(jié)果 CRAB的耐藥性非常嚴重，對12種抗菌藥物中的9種均耐藥(耐藥率>90%)，其中對哌拉西林、頭孢他啶、哌拉西林-他唑巴坦和美洛培南的耐藥率均為100.0%，耐藥率最低者為頭孢哌酮-舒巴坦(43.6%)(見表1)。

2.2 PCR檢測結(jié)果

在78株CRAB中隨機選取9株耐藥株(1株adeB基因陰性除外)，以及3株敏感株進行PCR。9株耐藥株和3株敏感株均檢測到adeB基因的預期擴增產(chǎn)物，其灰度值以內(nèi)參基因recA擴增片段為100%對照，經(jīng)凝膠掃描半定量檢測分析，兩者的adeB相對表達水平幾乎沒有差異(見圖1)。

圖1 鮑曼不動桿菌部分菌株ADEB基因的PCR擴增結(jié)果

3 討 論

鮑曼不動桿菌已成為院內(nèi)感染最常見的致病菌種，尤其是在ICU病房內(nèi)常引起與呼吸器有關(guān)的肺炎及菌血癥。由于此菌的抗藥性快速增加，已產(chǎn)生了多重抗藥性菌株及全抗藥性菌株，出現(xiàn)臨床上無藥可用的窘境。本研究旨在探討在沒有抗生素的壓力之下，抗藥性鮑曼不動桿菌是否能改變其抗藥性[3]。

表1 78株CRAB對12種抗菌藥物的耐藥和敏感情況

鮑曼不動桿菌是一種比較容易產(chǎn)生抗藥性傾向的菌種，再加上抗生素的廣泛使用，更易演變成多重抗藥性菌種，成為近年來急速躍升成為院內(nèi)感染最重要的致病菌之一。臨床研究報道，鮑曼不動桿菌耐碳青霉烯類抗生素的主要機制為碳青霉烯類水解酶的產(chǎn)生，多伴隨外膜通道蛋白表達的下調(diào)及細菌膜上主動外排泵過度表達，降低了青霉素與蛋白結(jié)合的親和力。其耐藥最常見機制為產(chǎn)生水解碳青霉烯類β-內(nèi)酰胺酶[4]。耐生存、易抗藥、喜潮濕的特性，使得鮑曼不動桿菌成為ICU病房特別重要的致病菌，且隨著ICU病房侵入性診斷及治療的發(fā)展以及抗生素、免疫抑制劑等藥物的濫用，鮑曼不動桿菌成為院內(nèi)感染性肺炎及菌血癥的主要致病菌[5]。耐藥節(jié)結(jié)化細胞分化家族(RND)在革蘭陰性菌耐藥性中扮演著重要角色，利用位于革蘭陰性菌細胞質(zhì)膜上的質(zhì)子驅(qū)動力作為能量來源，與周質(zhì)間的膜融合蛋白和外膜蛋白作用，形成連續(xù)的三通道，將物質(zhì)直接運出到細胞外。大部分可接合的質(zhì)體都有可確保接受者已沒有相同物質(zhì)的系統(tǒng)。被轉(zhuǎn)移的遺傳信息通常對接受者是有利的，包括抗藥性、其他異物耐受性、或使用新的代謝物的能力。這種有利的質(zhì)體可能被視為細菌的內(nèi)共生體[6]。一個細菌的DNA通過兩細菌間形成的特殊蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，接合菌毛，轉(zhuǎn)移到另一個細菌。當細菌族群在自然環(huán)境中，在有抗生素的壓力之下，含有抗藥基因的細菌容易存活且能傳播抗藥基因，造成抗藥細菌大增?？顾幓虺Ｍㄟ^質(zhì)體或跳躍子夾帶而傳播，可以進入細胞造成抗藥性，或離開細胞而不具抗藥性。細菌的抗藥性族群在感受性菌株存在時會逐漸消失[7]。在抗生素治療停止之后，抗藥菌能持續(xù)一段時間。當感受性菌存在時，它們可能重新繁衍個體。在沒有藥物壓力的情況下，感受性細菌比起抗藥菌有些微弱的存活優(yōu)勢，因為它們不用耗費能量去維持抗藥性基因，一段時間之后，就會擊敗抗藥菌，重新大量繁殖具有敏感性的細菌[8]。

[1]胥松，王小霞，張柏金.重癥監(jiān)護病房多重耐藥鮑曼不動桿菌感染的危險因素分析[J].慢性病學雜志，2016(2)：128-130.

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[3]郭湘，費櫻.耐碳青霉烯酶類抗生素鮑曼不動桿菌的同源性及其對亞胺培南的耐藥機制[J].山東醫(yī)藥，2016(21)：19-21.

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[5]林云萬，梁穎茹，賀征，等.某院ICU多重耐藥鮑曼不動桿菌耐藥性和碳青霉烯酶耐藥基因分析[J].實用預防醫(yī)學，2015(11)：1313-1315.

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2017-03-14

(本文編輯：王作利)

R516

A

1671-8631(2017)12-0941-02

〔1〕本課題為贛州市指導性科技項目(課題編號：GZ2015ZSF333)

李小玉(1981— )，女，江西省贛州市人，學士學位，主管檢驗師，主要從事免疫和微生物檢驗工作。