張曉鳳，梁建登

（1.中山大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2.廣東藥科大學(xué)， 廣東 廣州 510006）

用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖片中有關(guān)物質(zhì)的結(jié)果

張曉鳳1，梁建登2

（1.中山大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2.廣東藥科大學(xué)， 廣東 廣州 510006）

目的：探討用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖片中有關(guān)物質(zhì)的結(jié)果。方法 ：用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖片中的有關(guān)物質(zhì)，即以Inertsil NH2(250 mm×4.6 mm, 5μm)為色譜柱，以0.02mmol/L磷酸銨溶液（磷酸調(diào)PH值至7.0）—乙腈（30：70）為流動(dòng)相，將流速設(shè)為1.0ml/min，將柱溫 設(shè)為35℃，將檢測(cè)的波長(zhǎng)設(shè)為195nm，將進(jìn)樣的體積 設(shè)為20μl。結(jié)果：鹽酸氨基葡萄糖的主峰與雜質(zhì)峰的分離度均良好，并檢測(cè)到3個(gè)雜質(zhì)。結(jié)論：用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖片中有關(guān)物質(zhì)的準(zhǔn)確度高，可很好地檢測(cè)出其中的雜質(zhì)。且此檢測(cè)方法的操作簡(jiǎn)單、快速。

高效液相色譜法；鹽酸氨基葡萄糖片；有關(guān)物質(zhì)

氨基葡萄糖類藥物主要用于治療骨性關(guān)節(jié)炎。常用的氨基酸葡萄糖類藥物包括硫酸氨基葡萄糖膠囊、鹽酸氨基葡萄糖片等。在英國(guó)藥典[1]中，對(duì)氨基葡萄糖中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了研究。而在我國(guó)關(guān)于氨基葡萄糖中有關(guān)物質(zhì)的研究則較少。為了進(jìn)一步探討對(duì)鹽酸氨基葡萄糖片中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)的最佳方法，筆者在英國(guó)藥典中相關(guān)研究的基礎(chǔ)上，并參考大量的文獻(xiàn)[2-4]后，采用高效液相色譜法 對(duì)鹽酸氨基葡萄糖片中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè)，取得了很好的效果。

1 儀器、試劑及樣品

1）本次研究使用的儀器為：島津LC-15C高效液相色譜儀和紫外檢測(cè)器。2）本次研究使用的試劑為：乙腈為色譜純，磷酸和磷酸銨為分析純。3）本次研究使用的樣品為：（1）鹽酸氨基葡萄糖片，市售，由四川綠葉寶光藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。（2）D- 鹽酸氨基葡萄糖，由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。（3）果糖嗪 和2,5-脫氧果糖嗪，由加拿大TLC公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

1）色譜柱：Inertsil NH2（250×4.6mm，5μm）。2）流動(dòng)相：0.02mmol/L 磷酸銨溶液（PH7.0）：乙腈=30：70。3）流速：1.0ml/min。4）柱溫：35℃。5）檢測(cè)波長(zhǎng)：195nm。5）進(jìn)樣體積：20μl。6）稀釋液：濃度為65%的乙腈溶液。

2.2 溶液制備

1）取1.0mg的果糖嗪對(duì)照品，精密稱定，加入稀釋液配制成濃度為50μg/ml的對(duì)照溶液。2）取1.0mg 的2,5-脫氧果糖嗪對(duì)照溶品，精密稱定，加入稀釋液配制成濃度為50μg/ml的對(duì)照溶液。3）取鹽酸氨基葡萄糖片，研磨成粉末，精密稱量適量（約相當(dāng)于40mg的鹽酸氨基葡萄糖），置于10ml的容量瓶中，加入適量的稀釋液溶液進(jìn)行超聲溶解并定容，搖勻，作為供試品溶液。4）精密量取1.0ml的供試品溶液，置于100ml的量瓶中，加稀釋液進(jìn)行定容，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性考察

1）分離度試驗(yàn)：精密量取2.2項(xiàng)下的對(duì)照溶液各20μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。2）結(jié)果：各雜質(zhì)峰與主峰的分離度均能夠達(dá)到有效分離；主峰與2,5-脫氧果糖嗪的相對(duì)保留時(shí)間為0.40；與果糖嗪的相對(duì)保留時(shí)間為0.47；理論塔板數(shù)不小于2000。結(jié)果見圖1。

圖1 雜質(zhì)和鹽酸氨基葡萄糖片溶液圖（2,5-脫氧果糖嗪；果糖嗪；鹽酸氨基葡萄糖片）

2.4 專屬性實(shí)驗(yàn)

1）取鹽酸氨基葡萄糖片研磨成粉末，取適量（約相當(dāng)于40mg的鹽酸氨基葡萄糖），精密稱定，置于10ml的容量瓶中，共計(jì)6份。按照以下條件進(jìn)行試驗(yàn)：（1）未破壞實(shí)驗(yàn)：加入稀釋液進(jìn)行超聲溶解并定容。（2）酸破壞實(shí)驗(yàn)：加入2ml的 0.1N鹽酸溶液進(jìn)行超聲溶解，在室溫中放置2個(gè)小時(shí)，再加入0.1N氫氧化鈉溶液進(jìn)行中和，然后加入稀釋液進(jìn)行定容。（3）堿破壞實(shí)驗(yàn)：加入2ml的0.1N氫氧化鈉溶液進(jìn)行超聲溶解，在室溫中放置2個(gè)小時(shí)，再加入0.1N鹽酸溶液進(jìn)行中和，然后加入稀釋液進(jìn)行定容。（4）高溫破壞實(shí)驗(yàn)：加入 稀釋液進(jìn)行超聲溶解并定容，搖勻，在100℃的水浴中加熱2個(gè)小時(shí)。（5）光照破壞實(shí)驗(yàn)：加入稀釋液進(jìn)行超聲溶解并定容，搖勻，在4500XL光照2天。（6）氧化破壞實(shí)驗(yàn)：加入2ml 濃度為3%的H2O2溶液，放置2個(gè)小時(shí)，然后加入稀釋液進(jìn)行定容，搖勻。將上述溶液均取適量進(jìn)行過(guò)濾，然后取上清液。2）結(jié)果：在進(jìn)行酸、堿、高溫、光照等破壞實(shí)驗(yàn)時(shí)，鹽酸氨基葡萄糖均產(chǎn)生新雜質(zhì)，進(jìn)行氧化破壞實(shí)驗(yàn)時(shí)其未產(chǎn)生新雜質(zhì)；各種條件下雜質(zhì)峰之間的分離度均大于1.2，雜質(zhì)峰與主峰之間的分離度均大于2.0，表明擬定的色譜條件專屬性強(qiáng)。結(jié)果見圖2。

圖2 專屬性試驗(yàn)圖（由左往右為：未破壞；酸破壞；堿破壞；高溫破壞；光照破壞；氧化破壞）

2.5 線性實(shí)驗(yàn)

2.5.1 2,5-脫氧果糖嗪線性實(shí)驗(yàn) 精密稱量1.0mg的對(duì)照品，加入稀釋液配制成濃度為2.0ug/ml、9.0ug/ml、18.0ug/ml、36.0ug/ml、45.0ug/ml和54.0ug/ml的對(duì)照溶液。各取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算線性方程。線性曲線是：Y=17052.2+4453.7，r=0.9996。結(jié)果表明：2,5-脫氧果糖嗪對(duì)照溶液在2.3ug/ml～54.0ug/ml的范圍內(nèi)呈線性。

2.5.2 果糖嗪線性實(shí)驗(yàn)

精密稱量1.0mg的對(duì)照品，加入稀釋液配制成濃度為0.25ug/ml、2.0ug/ml、8.0ug/ml、16.0ug/ml、20.0ug/ml和24ug/ml的對(duì)照溶液。各取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算線性方程。線性曲線是：Y=22953.0781+546.7419，r=0.9995。結(jié)果表明：果糖嗪對(duì)照溶液在0.255ug/ml～24ug/ml的范圍內(nèi)呈線性。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

1）按照2.2的方法配制供試品溶液。精密量取20μl注入液相色譜儀中，分別進(jìn)樣6針，以自身對(duì)照法計(jì)算。2）結(jié)果：鹽酸氨基葡萄糖片溶 液主要雜質(zhì)及總雜質(zhì)的RSD分別為，2,5脫氧果糖嗪為1.46%，果糖嗪為1.56%，總雜質(zhì)為1.26%。這說(shuō)明，精密度符合要求。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

1）按照2.2的方法配制6份供試品溶液。精密量取上述溶液各2 0μl注入液相色譜儀中。2）結(jié)果：在鹽酸氨基葡萄糖片溶液中，2,5脫氧果糖嗪RSD為1.35%，果糖嗪為1.89%，總雜質(zhì)的RSD為1.87%。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

1）取重復(fù)性項(xiàng)下的供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8小時(shí)，各取 20μl的供試品溶液注入液相色譜儀中。2）結(jié)果：2,5脫氧果糖嗪RSD為1.23%，果糖嗪為1.75%，總雜質(zhì)的RSD為0.67%。這說(shuō)明，供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)

1）按照2.2的方法制備2,5-脫氧果糖嗪和果糖嗪對(duì)照溶液。取鹽酸氨基葡萄糖片，研磨成粉末，稱量約相當(dāng)于40mg的鹽酸氨基葡萄糖粉末，分別加入3.0ml、3.5ml、4.0ml上述對(duì)照溶液配制成濃度為80%、100%和120%的溶液，按照2.2的方法配制供試品溶液。精密量取上述溶液各20μl注入液相色 譜儀中，計(jì)算果糖嗪和2,5-脫氧果糖嗪的含量。取上述對(duì)照溶液按照100%的濃度配制成對(duì)照混合溶液。2）結(jié)果：2,5-脫氧果糖嗪和果糖嗪的平均回收率分別為：98.3%和98.6%，RSD分別是0.29%和0.22%。

3 討論

鹽酸氨基葡萄糖的吸 收波長(zhǎng)為195nm，且干擾的因素很多，如在流動(dòng)相中使用磷酸鹽會(huì)干擾檢測(cè)，醋酸鹽會(huì)使峰形歪斜，而磷酸銨對(duì)檢測(cè)則無(wú)干擾，因此應(yīng)選擇磷酸銨作為流動(dòng)相的水相。高效液相色譜法具有快速、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，此檢測(cè)方法的專屬性強(qiáng)、線性范圍廣，且精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性及回收率均符合要求，表明此方法不僅適 用于對(duì)鹽酸氨基葡萄的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，也適用于對(duì)鹽酸氨基葡萄的含量進(jìn)行檢測(cè)。

[1] EUROPEAN PHARMACOPOEIA 8.0[S]：2338～2340.

[2 ] 湖北愛(ài)普注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)[S]：YBH08072009.

[3] 王培,黃哲蘇,李海生.鹽酸氨基葡萄糖膠囊含量測(cè)定條件的改進(jìn).天津藥學(xué)[J].2008,20 (3):13-14

[4] 楊華良,雷勇勝.HPLC 法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖顆粒中鹽酸氨基葡萄糖的含量.天津藥學(xué)[J].2011,23(6):17-19.

Study result of high performance liquid chromatography for measure related substance of glucosamine hydrochloride tablets

Zhang Xiaofeng1 Liang jiandeng2
(1 School of Pharmaceutical,Sun Yat-sen University 2 Guangdong Pharmaceutical University)

∶ Objective To study high performance liquid chromatography for measure related substance of glucosamine hydrochloride tablets. Method Use Inertsil NH2(250 mm × 4.6 mm, 5μm)as chromato bar, use 10mmol/L ammonium phosphate solution PH7.0–Acetonitrile (30：70 ) for Mobile phase ,set flow rate in 1.0ml/min,set column temperature as 35℃, set detection wavelength as 190nm,set injection as 20μl.Result The peaks of Glucosamine Hydrochloride Tablet and impurities are well separated,3 kinds impurities was be measured. Conclusion High performance liquid chromatography for measure related substance of glucosamine hydrochloride tablets has a high accuracy and it can measure impurities in tablets well. This method is simple and quick.

∶ RP-HPLC; Glucosamine Hydrochloride; related substance.

R917

A

2095-7629-（2017）7-0028-02