黃小霏，林業(yè)輝，江潤昌，周 杏，李國偉，高豆豆

重癥肺炎支原體肺炎患兒支氣管肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ水平及臨床意義

黃小霏，林業(yè)輝，江潤昌，周 杏，李國偉，高豆豆

重癥肺炎支原體肺炎；肺泡灌洗液；細胞因子；兒童

肺炎支原體（mycoplasma pneumonia，MP）感染作為小兒下呼吸道感染的一個不可忽視的問題，已受到臨床越來越多的重視。MP感染可引起重癥肺炎，如壞死性肺炎，肺大葉實變，中至大量胸腔積液，合并閉塞性支氣管炎等表現(xiàn)［1］。目前認為，MP 感染除了對機體細胞直接產(chǎn)生損害外，其所引起的免疫反應在肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）的發(fā)生、發(fā)展過程中起重要作用。該研究通過檢測重癥MPP患者支氣管肺泡灌洗液（BALF）中的白細胞介素-4（IL-4）及干擾素-γ（IFN-γ），研究Th1/Th2細胞免疫應答的狀況及其臨床意義，以期為MPP的診治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 觀察組 （重癥MPP組）：2014年8月—2016年6月筆者所在醫(yī)院住院治療的重癥MPP患者 30例，年齡 1～11歲，平均 4.4歲；男 11例，女19例；均符合《諸福堂實用兒科學》MPP的診斷標準［2］并符合以下 1 條或以上［1］：（1）壞死性肺炎改變；（2）肺大葉實變伴中至大量胸腔積液；（3）影響呼吸功能或合并其他系統(tǒng)功能障礙；（4）合并閉塞性支氣管炎；（5）合并全身炎癥反應綜合征；（6）起病急、癥狀重、肺大葉實變，對單一大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療反應不佳。以非MPP和支氣管異物患者作為對照組：（1）非MPP組。30例均符合《諸福棠實用兒科學》肺炎診斷標準［2］，影像學提示有肺大葉實變，但病原學為非肺炎支原體；年齡10月至9歲，平均4.25歲；男17例，女13例。（2）支氣管異物組。同期收治的確診為支氣管異物患者20例；年齡1.1～8歲，平均3.6歲；男 11例，女9例；病程在2 d以內(nèi)；無發(fā)熱，外周血白細胞計數(shù)及C反應蛋白均正常，并排除過敏性疾病及免疫相關(guān)性疾病。重癥MPP組與非MPP組及支氣管異物組年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義。所有患者均未使用過腎上腺皮質(zhì)激素及人血免疫球蛋白、胸腺素等免疫抑制藥和免疫調(diào)節(jié)藥?；颊呒覍倬橥?，并報該院倫理委員會批準。

1.2 研究方法

1.2 ．1 標本的采集 （1）BALF的采集。所有患者行纖維支氣管鏡檢查（治療）。支氣管肺泡灌洗按照中華醫(yī)學會呼吸病學分會支氣管肺泡灌洗液細胞學檢測技術(shù)規(guī)范（草案）［3］中操作方法進行。用37℃滅菌生理鹽水10～15 ml分3次灌洗患側(cè)支氣管肺段（觀察組、對照組）或一側(cè)支氣管（對照組），收集肺泡灌洗液5 ml，將回收的灌洗液立即用雙層無菌紗布過濾除去黏液，后裝入塑料離心管內(nèi)，在4℃下以1200 r/min離心10 min，取上清液－70℃儲存，用作可溶性成分的檢測。（2）血樣的采集。所有病例均于入院第2天清晨采取空腹靜脈血2 ml；重癥MPP組及非MPP組患者于住院第7天清晨再次采血2 ml，以2500 r/min的速度離心5 min取血清，置－30℃保存待測。

1．2．2 IL－4 及 IFN－γ 的測定 采用雙抗體夾心ELISA方法檢測患者BALF和血清中IL－4及IFN－γ的濃度。人細胞因子ELISA試劑盒由美國ADL公司生產(chǎn)，具體步驟嚴格按試劑盒中的說明書進行。根據(jù)吸光度 （A）值及標準曲線方程算出IL－4和IFN－γ的含量。

1．3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 13．0軟件包進行統(tǒng)計學分析。實驗結(jié)果采用均值±標準差（x±s）表示，多組間均數(shù)的比較采用方差分析 （兩兩比較采用LSD），獨立樣本兩組均數(shù)的比較采用配對t檢驗，用直線相關(guān)分析計算相關(guān)系數(shù)，判定各測定值之間的相關(guān)程度，p＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2．1 重癥MPP組、非MMP組和支氣管異物組BALF中IL-4及IFN-γ濃度比較 重癥MPP及非MMP組患者BALF中IL－4和IFN－γ濃度及IL－4/IFN－γ比值明顯高于支氣管異物組，差異有統(tǒng)計學意義（p＜0．01 或 0．05）。 重癥 MPP 組與非 MMP 組患者 BALF中 IL－4和 IFN－γ濃度及 IL－4/IFN－γ比值比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。 見表1。

2．2 三組急性期血清中IL-4及IFN-γ濃度比較急性期重癥MPP及非MMP組患者血清中 IL－4和IFN－γ濃度明顯高于支氣管異物組，差異有統(tǒng)計學意義 （p＜0．01 或 0．05）； 重癥 MPP 血清中 IL－4 和IFN－γ濃度及IL－4/IFN－γ比值與非MPP組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。 見表2。

2.3 三組恢復期血清中IL-4及IFN-γ濃度比較恢復期重癥MPP組患者血清中IL－4明顯高于非MMP組及支氣管異物組，差異有統(tǒng)計學意義 （p＜0．01 或 0．05）；重癥 MPP 組患者血清中 IFN－γ 濃度及IL－4/IFN－γ比值與非MPP組及支氣管異物組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。 見表3。

表1 三組BALF中IL-4及IFN-γ濃度比較（x±s）

表2 三組急性期血清中IL-4及IFN-γ濃度比較（x±s）

表3 三組恢復期血清中IL-4及IFN-γ濃度比較（x±s）

2.4 重癥MPP患者BALF和血清中IL-4及IFN-γ濃度比較 重癥MPP患者BALF中IL-4和IFN-γ水平高于血清標本，差異有統(tǒng)計學意義（p＜0.01）。 見表4。

表4 重癥MPP患者BALF和血清中IL-4及IFN-γ濃度比較（x±s）

2.5 重癥MPP患者BALF和血清中各檢測指標的相關(guān)性分析 BALF與血清中IL-4和IFN-γ檢測結(jié)果呈正相關(guān)，r分別為 0．56、0.61（p＜0．01）。

3 討論

目前認為免疫學發(fā)病機制在MPP中起著重要作用，并以適應性免疫為主導。適應性免疫反應的擾亂即表現(xiàn)為免疫失衡，可能與疾病嚴重程度和肺外癥狀相關(guān)［4］。

IL-4和IFN-γ是多效的細胞因子，在細胞的固有免疫和適應性免疫方面具有強大的調(diào)節(jié)功能。IFN-γ主要由活化T細胞、NK細胞產(chǎn)生，其主要功能是激活巨噬細胞，抗病毒，促進MHC分子表達和抗原提呈，誘導Th1細胞分化，抑制Th2細胞分化［5，6］。 IL-4 由 Th2 細胞、嗜堿性粒細胞等產(chǎn)生，它能刺激B細胞增殖，參與Th2細胞分化，促進嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、肥大細胞發(fā)育，促進IgE生成。有研究顯示MPP患者血清中IL-4水平明顯升高，間接證實在兒童肺炎支原體肺炎急性期，存在Th2細胞占優(yōu)勢的情況［7］。由于Th1型細胞因子主要為炎癥性細胞因子，而Th2型細胞因子則具有抗炎效應，Th0細胞極化Th2細胞并產(chǎn)生Th2類細胞因子具有保護作用。因此這種改變在一定程度上可能為機體的自身防御反應，以減輕MP所致的炎癥反應，有利于機體清除抗原。但也有研究表明［8］MPP急性期患者血液IFN-γ表達水平明顯升高，而IL-4水平無明顯變化，表明MPP急性期免疫反應以Th1細胞介導的細胞免疫為主。研究結(jié)果不同，可能是試驗方法導致不同，或者是樣本數(shù)量偏小導致不同，這都有待進一步深入研究。

該研究顯示急性期重癥MPP患者BALF和血清中IL-4及IFN-γ水平較支氣管異物組明顯增高，提示有較強烈的免疫應答；而IL-4/IFN-γ比值＞1，提示存在Th1/Th2失衡，以Th2反應占優(yōu)勢。韓曉華等［9］認為在重癥MPP患者誘導痰中IL-4含量及IL-4/IFN-γ比值高于輕癥MPP組，病情越重，增高越明顯，提示MPP患者存在Thl/Th2失衡，Th2反應占優(yōu)勢。Woolard等［10］研究發(fā)現(xiàn)敲除IFN-γ的小鼠感染MP后發(fā)生嚴重肺損傷，進一步表明機體從Th1/Th2免疫應答平衡發(fā)展為Th2應答優(yōu)勢而導致肺損害加重。該研究顯示非MPP組患者BALF和血清中IL-4和IFN-γ濃度也明顯高于支氣管異物組，差異有統(tǒng)計學意義，可能與感染病例相對于非感染病例整體上有較強烈的免疫應答有關(guān)。在恢復期，重癥MPP組及非MPP組患者血清中IL-4和IFN-γ濃度較急性期均有下降，但重癥MPP組患者血清中IL-4水平仍明顯高于非MMP組及支氣管異物組，差異有統(tǒng)計學意義，提示肺炎支原體感染機體后導致的以Th2反應占優(yōu)勢的免疫失衡，需要更長時間才得以恢復。

以上結(jié)論提示，在治療MPP時，適當使用免疫調(diào)節(jié)劑，如IFN-γ、抗IL-4單抗等進行干預，可能為促進疾病恢復起到積極作用。

該研究發(fā)現(xiàn)重癥MPP患者BALF與血清中IL-4及IFN-γ水平呈正相關(guān)，且BALF中濃度高于血清，提示BALF中細胞因子的檢測更為敏感，更能反映局部免疫失衡的變化。既往的研究大多局限于對MPP患者外周血中T淋巴細胞亞群的檢測［11］，對BALF中細胞因子等的研究國內(nèi)報道很少。BALF由于直接來自下呼吸道，能直觀地反映肺局部的生理及病理生理信息，因此，對重癥MPP患者 BALF成分的檢測，有助于理解疾病的發(fā)生機制、預測疾病的發(fā)展，并對今后的治療提供新的手段和理論依據(jù)。

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R725.6

B

10.14172/j.issn1671-4008.2017.09.012

528000廣東佛山，佛山市婦幼保健院兒科（黃小霏，林業(yè)輝，周杏，李國偉，高豆豆），檢驗科（江潤昌）

［2017－01－22 收稿，2017－02－20 修回］ ［本文編輯：吳 蓉］