吳煒霖，林德偉，陳曲波，何敏，黃嫵姣

(1.廣東省中醫(yī)院生物資源中心，廣東 廣州 510006；2.廣州軍區(qū)總醫(yī)院生殖中心，廣東 廣州 510010；3.廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510120)

抗核抗體間接免疫熒光法檢測(cè)試劑的比對(duì)分析

吳煒霖1，林德偉2，陳曲波1，何敏3，黃嫵姣3

(1.廣東省中醫(yī)院生物資源中心，廣東 廣州 510006；2.廣州軍區(qū)總醫(yī)院生殖中心，廣東 廣州 510010；3.廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510120)

目的 通過AESKU試劑和歐蒙試劑對(duì)164例抗核抗體核型結(jié)果的比對(duì)分析，評(píng)價(jià)AESKU試劑間接免疫熒光法抗核抗體檢測(cè)試劑的性能。方法 從2015年1～12月廣東省中醫(yī)院門診及住院患者中選取164例樣本，分為AID患者組(n=115)和健康對(duì)照組(n=49)，同時(shí)采用AESKU試劑與歐蒙試劑對(duì)抗核抗體核型進(jìn)行雙盲、平行檢測(cè)，不一致結(jié)果采用第三方試劑復(fù)核。計(jì)算兩種試劑的陽性符合率、陰性符合率、總符合率、Kappa系數(shù)，并進(jìn)行Kappa一致性檢驗(yàn)和配對(duì)χ2檢驗(yàn)。結(jié)果 AESKU試劑與歐蒙試劑的總體陽性符合率為94.78%，陰性符合率為93.88%，總符合率為94.51%；Kappa=0.871，P＜0.05，兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果高度一致，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 AESKU試劑與歐蒙試劑具有等效性和很高的符合率，操作簡(jiǎn)便快速、結(jié)果清晰易讀，適合臨床廣泛應(yīng)用。

抗核抗體；間接免疫熒光法；AESKU試劑；歐蒙試劑；比對(duì)

抗核抗體(ANA)是自身免疫性疾病(AID)實(shí)驗(yàn)室檢查和輔助診斷的重要指標(biāo)之一[1]。ANA的檢測(cè)對(duì)于自身免疫性疾病的診斷、活動(dòng)度監(jiān)測(cè)、療效評(píng)估等都具有重要的臨床意義[2]。間接免疫熒光法(IIF)是檢測(cè)血清ANA廣泛而常用的方法，其優(yōu)勢(shì)是可以檢測(cè)到整個(gè)細(xì)胞的熒光模型，特異性強(qiáng)，已成為AID的經(jīng)典篩選方法[3-4]。目前國內(nèi)已批準(zhǔn)上市的有歐蒙公司和海瑞祥天公司的ANA間接免疫熒光法檢測(cè)試劑盒，但價(jià)格昂貴，制約了對(duì)ANA篩查項(xiàng)目的普及，為驗(yàn)證同類型其他品牌試劑對(duì)ANA檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，本文對(duì)ANA間接免疫熒光法檢測(cè)試劑進(jìn)行了比對(duì)分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1～12月來自廣東省中醫(yī)院門診及住院的確診115例AID患者(包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性血管炎、干燥綜合征、硬皮病等)為觀察對(duì)象，其中男性20例，女性95例，年齡(38.3±5.8)歲。因AID中會(huì)出現(xiàn)ANA陰性，健康對(duì)照中也可能會(huì)出現(xiàn)ANA陽性，因此另選取同時(shí)期排除各種基礎(chǔ)疾病及自身免疫性疾病的健康體檢者49例入組，其中男性11例，女性38例，年齡(36.5±6.1)歲。

1.2 試劑方法 共164例樣本，包括AID患者和健康對(duì)照，按照臨床出現(xiàn)頻率將ANA結(jié)果分為均質(zhì)型、顆粒型、胞漿顆粒型、胞漿纖維型、其他型等幾種核型，采用AESKU公司生產(chǎn)的抗核抗體間接免疫熒光法檢測(cè)試劑盒(以下簡(jiǎn)稱AESKU試劑)與歐蒙(杭州)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司的抗核抗體間接免疫熒光法檢測(cè)試劑盒(以下簡(jiǎn)稱歐蒙試劑)對(duì)以上核型的陰陽性及數(shù)量進(jìn)行雙盲、平行試驗(yàn)。為避免因手工誤差干擾結(jié)果的判讀，實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按照Helmed全自動(dòng)間接免疫熒光分析儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作。封片后即日內(nèi)完成兩種試劑熒光片的判讀，并對(duì)樣本結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，對(duì)符合率未達(dá)到100%的樣本全部采用北京海瑞祥天生物科技有限公司的抗核抗體間接免疫熒光法檢測(cè)試劑盒(以下簡(jiǎn)稱海瑞祥天試劑)作為第三方復(fù)核試劑。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算陽性符合率、陰性符合率、總符合率、Kappa系數(shù)，并進(jìn)行Kappa一致性檢驗(yàn)和配對(duì)χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩種試劑對(duì)ANA均質(zhì)型檢測(cè)結(jié)果的比較 164例樣本中，歐蒙試劑檢測(cè)出均質(zhì)型21例，其中有20例AESKU試劑檢測(cè)結(jié)果與歐蒙試劑相符，陽性符合率為95.24%(20/21)，陰性符合率為100.00%(143/143)，兩種試劑對(duì)于均質(zhì)型檢測(cè)結(jié)果的總符合率為99.39%(163/164)，見表1。

表1 兩種試劑對(duì)ANA均質(zhì)型檢測(cè)結(jié)果的比較(例)

2.2 兩種試劑對(duì)ANA顆粒型檢測(cè)結(jié)果的比較 164例樣本中，歐蒙試劑檢測(cè)出顆粒型23例，其中有21例AESKU試劑檢測(cè)結(jié)果與歐蒙試劑相符，陽性符合率為91.30%(21/23)，陰性符合率為98.58%(139/141)，兩種試劑對(duì)于顆粒型檢測(cè)結(jié)果的總符合率為97.56%(160/164)，見表2。

表2 兩種試劑對(duì)ANA顆粒型檢測(cè)結(jié)果的比較(例)

2.3 兩種試劑對(duì)ANA胞漿顆粒型檢測(cè)結(jié)果的比較 164例樣本中，歐蒙試劑檢測(cè)出胞漿顆粒型20例，AESKU試劑與歐蒙試劑檢測(cè)結(jié)果完全一致，陽性符合率為100.00%(20/20)，陰性符合率為100.00%(144/144)，兩種試劑對(duì)于胞漿顆粒型檢測(cè)結(jié)果的總符合率為100.00%(164/164)，見表3。

表3 兩種試劑對(duì)ANA胞漿顆粒型檢測(cè)結(jié)果的比較(例)

2.4 兩種試劑對(duì)ANA胞漿纖維型檢測(cè)結(jié)果的比較 164例樣本中，歐蒙試劑檢測(cè)出胞漿纖維型20例，AESKU試劑與歐蒙試劑檢測(cè)結(jié)果完全一致，陽性符合率為100.00%(20/20)，陰性符合率為100.00%(144/144)，兩種試劑對(duì)于胞漿纖維型檢測(cè)結(jié)果的總符合率為100.00%(164/164)，見表4。

表4 兩種試劑對(duì)ANA胞漿纖維型檢測(cè)結(jié)果的比較(例)

2.5 兩種試劑對(duì)ANA其他型檢測(cè)結(jié)果的比較 164例樣本中，歐蒙試劑檢測(cè)出其他核型共31例，其中有28例AESKU試劑檢測(cè)結(jié)果與歐蒙試劑相符，陽性符合率為90.32%(28/31)，陰性符合率為98.50%(131/133)，兩種試劑對(duì)其他型檢測(cè)結(jié)果的總符合率為96.95%(139/164)，見表5。

表5 兩種試劑對(duì)ANA其他型檢測(cè)結(jié)果的比較(例)

2.6 兩種試劑對(duì)ANA總體檢測(cè)結(jié)果的比較 164例樣本中，歐蒙試劑檢測(cè)出各種核型陽性共115例，其中有109例AESKU試劑檢測(cè)結(jié)果與歐蒙試劑相符，陽性符合率為94.78%(109/115)，陰性符合率為93.88%(46/49)，兩種試劑對(duì)ANA各種核型檢測(cè)結(jié)果的總符合率為94.51%(155/164)，見表6。

表6 兩種試劑對(duì)ANA總體檢測(cè)結(jié)果的比較(例)

2.7 試劑盒一致性評(píng)價(jià) 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，Kappa一致性檢驗(yàn)：Kappa=0.871，P＜0.05，可認(rèn)為兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果具有良好的一致，兩種試劑測(cè)定結(jié)果的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.625，P＞0.05)。

2.8 對(duì)可能產(chǎn)生干擾因素的樣本的檢測(cè)結(jié)果分析 溶血、脂血、黃疸等可能對(duì)臨床檢測(cè)產(chǎn)生干擾的樣本，AESKU試劑和歐蒙試劑檢測(cè)結(jié)果的陰陽性和核型符合率均達(dá)到100%，兩者具有高度一致性，提示AESKU試劑具有良好的抗干擾性能，見表7。

表7 對(duì)可能產(chǎn)生干擾因素的樣本的檢測(cè)結(jié)果(例)

3 討 論

自身免疫性疾病通常伴隨著各種自身抗體的出現(xiàn)，ANA是細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱，可見于多種AID，是自身免疫性疾病診斷、鑒別診斷和病情判讀的重要依據(jù)[5]。檢測(cè)ANA的方法有很多，其中以真核細(xì)胞如Hep-2為檢測(cè)基質(zhì)的IIF可以檢測(cè)到整個(gè)細(xì)胞的熒光模型，操作簡(jiǎn)單，特異性高，一直被美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)認(rèn)為ANA檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)[6-7]。ANA的核型包括很多種，衛(wèi)生部臨檢中心將其劃分為均質(zhì)型、顆粒型、核仁型、核膜型、著絲點(diǎn)型、胞漿顆粒型及胞漿纖維型等核型[8]。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)ANA核型的臨床檢出頻率，選取顆粒型、均質(zhì)型、胞漿顆粒型、胞漿纖維型陽性樣本各20例左右。為方便統(tǒng)計(jì)，我們將核仁型、核膜型、著絲點(diǎn)型和紡錘體型等出現(xiàn)比例較低的核型都?xì)w入其他核型。

本文選取的164例臨床樣本，其中ANA陽性標(biāo)本115例，包括常見的多種自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性血管炎、干燥綜合征、硬皮病等。ANA陰性標(biāo)本49例，比例為30%，均為排除各種基礎(chǔ)疾病及自身免疫性疾病的健康體檢者。對(duì)于以上164例標(biāo)本采用AESKU試劑和歐蒙試劑進(jìn)行雙盲、平行檢測(cè)，同時(shí)進(jìn)行各種核型的陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，結(jié)果判讀以最優(yōu)勢(shì)核型作為唯一判讀結(jié)果。各種核型的比對(duì)結(jié)果顯示，對(duì)于臨床各種常見核型的檢測(cè)，AESKU試劑和歐蒙試劑的陽性符合率、陰性符合率、總符合率均達(dá)90%以上；綜合各種核型的總體檢測(cè)結(jié)果顯示，AESKU試劑和歐蒙試劑的陽性符合率為94.78%，陰性符合率為93.88%，總符合率為94.51%。

為研究干擾因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，本研究選取溶血樣本3例，脂血樣本3例，黃疸樣本3例，采用AESKU試劑和歐蒙試劑無論是在結(jié)果的陰陽性還是在核型判讀方面，符合率均達(dá)100%，研究結(jié)果提示AESKU試劑的抗干擾性能與歐蒙試劑高度一致。由于本研究選取的干擾樣本數(shù)量有限，更準(zhǔn)確的結(jié)論仍需要更大量數(shù)據(jù)結(jié)果的進(jìn)一步支持。

對(duì)于兩種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本，采用海瑞祥天試劑作為第三方復(fù)核試劑之后的結(jié)果顯示，AESKU試劑與海瑞祥天試劑有3例一致，3例不一致；歐蒙試劑與海瑞祥天試劑有4例一致，2例不一致。不同品牌試劑針對(duì)同一份樣本出現(xiàn)不同的檢測(cè)結(jié)果，原因有多種：不同品牌試劑由于Hep-2細(xì)胞包被的形態(tài)數(shù)量、包被技術(shù)、試劑配比等的差異都可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的差異[9]。另外，對(duì)于臨床檢測(cè)樣本來說，AID患者經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)多種核型的混雜，甚至同一個(gè)患者在疾病的不同時(shí)期核型表現(xiàn)也會(huì)有所不同，這些也會(huì)在一定程度上影響結(jié)果的判讀[10-11]。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，這種差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

目前，國內(nèi)市場(chǎng)上已先后出現(xiàn)了多種商品化自身抗體檢測(cè)試劑盒，其中比較有代表性的有歐蒙公司和海瑞祥天的間接免疫熒光法ANA檢測(cè)試劑，但因試劑昂貴或者操作不便而制約了ANA檢測(cè)的普及和推廣。為了使ANA篩查在臨床疾病診斷或鑒別診斷中的重要作用得以充分發(fā)揮，我們需要積極探尋其他物美價(jià)廉、結(jié)果準(zhǔn)確，易于普及的檢測(cè)試劑[12]。AESKU試劑同樣是以Hep-2細(xì)胞為基質(zhì)的間接免疫熒光定性試劑，本研究比對(duì)結(jié)果顯示，AESKU試劑和國內(nèi)認(rèn)可度較高的歐蒙試劑對(duì)于ANA的檢測(cè)結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.625，P＞0.05)，經(jīng)Kappa一致性分析表明兩種試劑檢測(cè)結(jié)果具有良好的一致性(Kappa=0.871，P＜0.05)。根據(jù)臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，兩種試劑質(zhì)量相似，產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)到臨床應(yīng)用的要求。AESKU試劑具有操作簡(jiǎn)便快速、結(jié)果清晰、易于判讀、質(zhì)優(yōu)價(jià)廉的特點(diǎn)，可作為基層醫(yī)院推廣或ANA篩查時(shí)的廣泛應(yīng)用。

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Comparative analysis of indirect immunofluorescence reagents for detecting antinuclear antibody.

WU Wei-lin1,LIN De-wei2,CHEN Qu-bo1,HE Min3,HUANG Wu-jiao3.1.Biological Resource Center,Guangdong Provincial Traditional Chinese Medical Hospital,Guangzhou 510006,Guangdong,CHINA;2.Reproductive Center of Guangzhou General Hospital of Guangzhou Command,PLA,Guangzhou 510010,Guangdong,CHINA;3.Clinical Laboratory of Guangdong Provincial Traditional Chinese Medical Hospital,Guangzhou 510120,Guangdong,CHINA

Objective To evaluate the performance of AESKU reagent antinuclear antibody detection kit(indirect immunofluorescence)by comparative analysis of 164ANAresults between the two kinds ofAESKU kit and Euroimmun kit.Methods From January 2015 to December 2015,the samples of 164 outpatients and inpatients in Guangdong Provincial Traditional Chinese Medical Hospital were divided into AID group(n=115)and healthy control group(n=49).The patterns of antinuclear antibodies were detected by double blind parallel testing by 2 systems with AESKU kit and Euroimmun kit.Inconsistent results were reviewed by the third reagent.The positive coincidence rate,negative coincidence rate,total coincidence rate and Kappa coefficient were calculated,and the Kappa consistency test and paired chi-square test were evaluated by the two kits.Results The positive coincidence rate between AESKU kit and Euroimmun kit was 94.78%,the negative coincidence rate was 93.88%,and the total coincidence rate was 94.51%.The testing results of the two kits were highly consistent(Kappa=0.871,P＜0.05).The paired chi-square test showed no statistically significant difference(P＞0.05).Conclusion AESKU kit and Euroimmun kit were equivalent and highly coincident.AESKU kit was easy to operate and clear to read the result.So it's suitable for wide clinical application.

Antinuclear antibody;Indirect immunofluorescence;AESKU kit;Euroimmun kit;Comparison

R446.61

A

1003—6350（2017）21—3503—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.21.021

廣東省中醫(yī)藥局課題（編號(hào)：20141094）；廣州中醫(yī)藥大學(xué)優(yōu)秀青年基金（編號(hào)：2013KT1479）

吳煒霖。E-mail：15800001461@163.com

2017-03-08)