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        枇杷清痤膠囊對丙酸桿菌致大鼠痤瘡模型的實驗研究

        2017-11-23 05:46:48李園林景周欣周小圓張一云劉巧
        海南醫(yī)學 2017年21期
        關鍵詞:耳廓睪酮枇杷

        李園,林景,周欣,周小圓,張一云,劉巧

        (1.海南省皮膚性病防治中心,海南 ???570206;2.海南省藥物研究所,海南 ???571000)

        枇杷清痤膠囊對丙酸桿菌致大鼠痤瘡模型的實驗研究

        李園1,林景1,周欣1,周小圓1,張一云2,劉巧1

        (1.海南省皮膚性病防治中心,海南 ???570206;2.海南省藥物研究所,海南 ???571000)

        目的 建立大鼠耳廓痤瘡模型,觀察枇杷清痤膠囊對大鼠耳廓痤瘡模型的治療效果,探討其作用機制。方法 SD大鼠60只,按體重均衡隨機分為正常對照組、模型對照組、陽性對照組(金花消痤丸,1.08 g/kg)及枇杷清痤膠囊高(1.296 g/kg)、中(0.648 g/kg)、低(0.324 g/kg)劑量組,每組10只。大鼠右耳耳廓皮內(nèi)注射痤瘡丙酸桿菌液制造大鼠耳廓痤瘡模型,造模成功后,各組分別灌胃給藥,每日1次,連續(xù)7 d,末次給藥后,測定大鼠耳廓厚度、血清中白細胞介素-1α(IL-1α)、可溶性白細胞介素-2受體(sIL-2R)和睪酮含量。結果 與模型對照組比較,枇杷清痤膠囊高、中劑量組和陽性對照組能顯著降低大鼠耳廓腫脹度,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型對照組比較,枇杷清痤膠囊高劑量組能顯著降低血清中IL-1α含量(P<0.01),枇杷清痤膠囊中、低劑量組及陽性對照組也能降低血清中IL-1α含量,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與正常對照組比較,模型對照組血清中sIL-2R和睪酮含量無明顯變化,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),說明造模不會影響大鼠血清中sIL-2R和睪酮含量。結論 枇杷清痤膠囊對大鼠耳廓痤瘡模型所致炎癥有較好的治療作用,其作用機制可能與抑制和減少IL-1α的產(chǎn)生有關。

        痤瘡;枇杷清痤膠囊;動物模型;白細胞介素-1α

        痤瘡又名“青春痘”,中醫(yī)稱之為“粉刺”、“肺風粉刺”或“面皰”,其發(fā)病率高,90%以上的青年男女可有不同程度的痤瘡發(fā)生,是皮膚科臨床常見及多發(fā)疾病。西醫(yī)治療多用雌性激素或抗雄激素類藥物、維A酸類藥物、抗生素類藥物、維生素類藥物等,近期療效尚可,遠期療效不佳,且副作用較明顯。我院名老中醫(yī)劉巧教授在治療本病中積累了豐富的經(jīng)驗,對痤瘡的病因、病機有充分的認識、對痤瘡的治療擁有獨到的見解,以清肺瀉胃為治療原則,開發(fā)了院內(nèi)制劑枇杷清痤膠囊。組方由枇杷葉、黃芩、桑白皮、生石膏、知母、生地、槐花、金銀花八味藥構成,能清解肺中風熱,清除胃中實火,具有祛風、清熱、解毒之功效。主治痤瘡、脂溢性皮炎、酒渣鼻等,在臨床應用數(shù)年,治療痤瘡的效果顯著。本實驗通過復制大鼠痤瘡模型,觀察枇杷清痤膠囊對痤瘡丙酸桿菌致大鼠痤瘡模型的影響,探討其治療痤瘡的作用機制。

        1 材料與方法

        1.1 試驗材料 (1)藥物:枇杷清痤膠囊(海南省皮膚性病防治中心提供,規(guī)格每粒裝0.3 g,批號20160804),陽性對照金花消痤丸(昆明中藥廠有限公司,批號151103);(2)動物:SPF級SD雄性大鼠60只,180~220 g,雌雄各半,購自長沙天勤生物技術有限公司;(3)試劑與實驗菌:生理鹽水(批號1603163304,石家莊四藥有限公司),痤瘡丙酸桿菌(中國藥品生物制品檢定所,ATCC 6919);ELISA生化試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司,批號201608)。

        1.2 方法

        1.2.1 分組 SD大鼠60只按體重均衡隨機分為6組,每組10只,雌雄各半,分籠飼養(yǎng),分別設為正常對照組、模型對照組、陽性對照組(金花消痤丸)、枇杷清痤膠囊高、中、低劑量組。枇杷清痤膠囊日服用量為3.6 g,依據(jù)體表面積折算方法[1],人用等效劑量作為低劑量,人用等效劑量2倍、4倍分別為中、高劑量組。

        1.2.2 造模及給藥 取復蘇增菌后的痤瘡丙酸桿菌液,離心5 min,將上清培養(yǎng)液棄去,生理鹽水洗滌菌體兩次,離心,將沉淀菌體懸浮至5 mL的生理鹽水中,以生理鹽水調(diào)節(jié)濃度至6×108cfu/mL左右,以微量注射器于麻醉大鼠右耳耳廓皮內(nèi)注射菌液50 μL[2],正常對照組大鼠注射無菌生理鹽水50 μL,接種后第3天從造模各組分別隨機抽取一只,用無菌針頭挑取耳廓腫脹部位,涂皿,厭氧罐中培養(yǎng)48 h,證明為痤瘡丙酸桿菌感染。造模后,各組灌胃給藥:正常對照組、模型對照組給蒸餾水3 mL/200 g,陽性對照組按1.08 g/kg給藥金花消痤丸3 mL/200 g,枇杷清痤膠囊高、中、低劑量組按1.296 g/kg、0.648 g/kg、0.324 g/kg給藥,1次/d,連續(xù)給藥7 d。

        1.2.3 觀測指標與檢測方法 末次給藥24 h后,麻醉大鼠,用千分尺測量大鼠耳廓厚度,計算耳廓腫脹率。同時腹腔主動脈取全血,放置4 h凝固后離心分離血清,分別按照ELISA試劑盒說明書方法檢測血清中白細胞介素-1α(IL-1α)、可溶性白細胞介素-2受體(sIL-2R)和睪酮。耳廓腫脹率(%)=[(注射后耳廓厚度-注射前耳廓厚度)/注射前耳廓厚度]×100%。

        1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS22.0軟件進行數(shù)據(jù)分析,計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差((±s))表示,多組間比較采用單因素方差分析,方差齊用Dunnett-t法,方差不齊用Dunnett-T3,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結 果

        2.1 對大鼠耳廓腫脹的影響 與正常對照組比較,模型對照組大鼠耳廓腫脹明顯,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01),說明造模成功;與模型對照組比較,枇杷清痤膠囊高、中劑量組及陽性對照組能顯著降低大鼠耳廓腫脹率,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01),說明枇杷清痤膠囊高、中劑量組和陽性對照組均能抑制丙酸桿菌引起的大鼠耳廓腫脹,對丙酸桿菌引起的大鼠耳腫脹有較好的治療作用;枇杷清痤膠囊高、中劑量組與陽性對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見表1。

        表1 枇杷清痤膠囊對大鼠耳廓痤瘡模型耳廓腫脹率的影響

        2.2 對大鼠血清中IL-1α、sIL-2R含量的影響 與正常對照組比較,模型對照組大鼠血清中IL-1α的含量明顯升高,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型對照組比較,枇杷清痤膠囊高劑量組能顯著降低大鼠血清IL-1α含量,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01),枇杷清痤膠囊中、低劑量組及陽性對照組也能降低大鼠血清中IL-1α含量,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);枇杷清痤膠囊中、低劑量組與陽性對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與正常對照組比較,模型對照組大鼠血清sIL-2R含量無明顯變化,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),表明該模型并不會影響大鼠血清sIL-2R的表達水平,見表2。

        2.3 對大鼠血清睪酮含量的影響 與正常對照組比較,模型對照組血清睪酮含量無明顯變化(P>0.05),表明該模型不會影響大鼠血清睪酮水平;枇杷清痤膠囊高、中、低三個劑量組均能顯著降低大鼠血清睪酮含量,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表3。

        表2 枇杷清痤膠囊對大鼠血清IL-1α、sIL-2R含量的影響(±s)

        表2 枇杷清痤膠囊對大鼠血清IL-1α、sIL-2R含量的影響(±s)

        注:與正常對照組比較,aP<0.01;與模型對照組比較,bP<0.05;與陽性對照組比較,cP<0.01。

        組別正常對照組模型對照組陽性對照組低劑量組中劑量組高劑量組F值P值例數(shù)10 10 10 10 10 10給藥劑量(g/kg)--1.08 0.324 0.648 1.296 IL-1α(pg/mL)5.85±1.56 35.58±5.83a 25.92±4.80b 24.94±8.22b 27.70±7.00b 13.51±4.04c 9.664 0.000 sIL-2R(pg/mL)9.47±0.49 9.23±0.34 9.23±0.47 9.61±0.89 9.16±0.71 9.56±1.92 0.237 0.943

        表3 枇杷清痤膠囊對血清睪酮含量的影響(±s)

        表3 枇杷清痤膠囊對血清睪酮含量的影響(±s)

        注:與模型對照組比較,aP<0.05。

        組別正常對照組模型對照組陽性對照組低劑量組中劑量組高劑量組F值P值例數(shù)10 10 10 10 10 10給藥劑量(g/kg)--1.08 0.324 0.648 1.296睪酮(nmol/mL)42.65±6.84 44.96±16.24 41.35±7.30 27.18±4.70a 25.21±0.43a 26.35±1.91a 7.926 0.000

        3 討 論

        痤瘡雖然為臨床常見病、多見病,但該疾病發(fā)病機制尚不完全清楚,現(xiàn)代醫(yī)學認為痤瘡的發(fā)生與性激素水平密切相關。中醫(yī)認為痤瘡的病機主要與“熱”、“淤”、“郁”有關,將其辨證分型為肝郁氣滯型、肺胃蘊熱型、痰濕阻滯型、沖任不調(diào)型、胃腸濕熱型等。近年來研究表明,肺胃蘊熱型患者血清睪酮水平升高明顯[3-4],血中睪酮(T)水平升高可導致皮脂腺分泌增加,血液循環(huán)加快,促進血紅素生成而提高血紅蛋白的含量,T值高構成熱證。這些變化符合肺胃蘊熱證的特征,T水平升高是肺胃蘊熱型的微觀物質(zhì)基礎,研究亦報道用枇杷清肺飲治療肺胃蘊熱型患者2個月后,血清睪酮水平基本恢復正常。枇杷清痤膠囊是在枇杷清肺飲基礎上以祛風、清熱、解毒為治則組成的方劑,對肺胃蘊熱型尋常性痤瘡治療效果顯著。本實驗通過觀察枇杷清痤膠囊對丙酸痤瘡致痤瘡模型大鼠血清睪酮含量的影響,發(fā)現(xiàn)枇杷清痤膠囊有降低大鼠血清睪酮作用,推測與中藥有清熱、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的作用有關。方中枇杷葉、桑白皮、黃芩能清解肺中風熱,清除胃中實火,生石膏、知母能清氣分熱盛,除肺胃實火,故能消除熱證;現(xiàn)代藥理研究表明黃芩、知母也具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的作用,知母、黃芩均具有睪酮5α-還原酶抑制作用,有效降低體內(nèi)睪酮的水平[5-7]。

        此外,皮脂及毛囊內(nèi)細菌感染也是痤瘡主要發(fā)病機制,多種炎性細胞因子在痤瘡發(fā)病過程的多個環(huán)節(jié),如皮脂腺導管的角化過度、粉刺形成、炎癥反應中都起到了重要作用。如IL-1α能通過促進血管內(nèi)皮生長因子的表達參與痤瘡的炎癥反應,能通過直接作用于IL-1受體或誘導其他生長因子的釋放引起角質(zhì)形成細胞(KC)的過度角化,導致粉刺的形成[8]。本實驗結果表明,模型對照組大鼠血清IL-1α含量顯著高于正常對照組,提示造模后大鼠體內(nèi)存在明顯的炎癥細胞的活化和聚集。枇杷清痤膠囊能減輕模型大鼠耳廓腫脹、降低大鼠血清IL-1α的含量,可能是方中黃芩、金銀花等清熱解毒的共同作用?,F(xiàn)代藥理學研究表明,黃芩苷對痤瘡丙酸桿菌有抑制的作用,金銀花提取物具有免疫抑制作用,通過抑制促炎細胞因子來抑制或減輕炎癥反應,枇杷葉和桑白皮對炎癥動物模型均有抑制作用。

        本實驗結果提示,枇杷清痤膠囊對大鼠痤瘡模型所致炎癥有較好治療效果,作用機理可能與枇杷清痤膠囊具有清熱解毒功能有關,其抗炎作用機制可能與抑制或減少IL-1α的產(chǎn)生有關。

        [1]徐淑云.藥理學實驗方法學[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:1861.

        [2]耿東升,劉發(fā),楊弟存,等.消痤靈顆??咕捌鋵Ρ釛U菌致大鼠耳廓炎癥痤瘡的防治作用[J].解放軍藥學學報,1999,15(6):6-9.

        [3]張景龍,楊惠敏,白雪,等.女性痤瘡患者黃體期性激素水平與中醫(yī)證型關系研究[J].中國皮膚性病學雜志,2009,23(10):672-674.

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        [5]陶仕英,牛建昭,王繼峰.二仙湯及其組方中藥對幼年大鼠腎上腺雌激素受體表達的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2010,17(5):36-37.

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        Effect of Pipa Qingcuo Capsule on Propionibacterium acnes-induced rat model with acne on the auricle.

        LIYuan1,LIN Jing1,ZHOU Xin1,ZHOU Xiao-yuan1,ZHANG Yi-yun2,LIU Qiao1.1.Hainan Provincial Center for Control of Sexually Transmitted Diseases and Dermatosis,Haikou 570206,Hainan,CHINA;2.Pharmaceutical Institute of Hainan Province,Haikou 571000,Hainan,CHINA

        Objective To establish a rat model of acne on the auricle and evaluate the therapeutic effect of Pipa Qingcuo capsule and its related mechanism of treating acne.Methods Sixty SD rats were randomly divided into normal control group,model control group,positive control group(Jihua Xiaocuo Pill,1.08 g/kg)and groups treated with Pipa Qingcuo Capsule of high(1.296 g/kg),medium(0.648 g/kg)and low(0.324 g/kg)doses,with 10 rats in each group.With the establishment of acne model by intradermal injection of Propionibacterium acnes into inner auricles of rats,each group were administered orally,1 time daily for 7 consecutive days.After the last delivery,rat auricle thickness,serum interleukin-1 alpha(IL-1α)and soluble interleukin-2 receptor(sIL-2R)content and testosterone levels were determined.Results Compared with the model control group,Pipa Qingcuo Capsule group of high and medium doses and positive control group could significantly reduce the rat auricle swelling degree(P<0.01).Compared with the model control group,Pipa Qingcuo Capsule group of high,medium and low doses,positive control group could all reduce the content of serum IL-1αsignificantly(P<0.01 for high dose,andP<0.05 for others).Compared with the normal control group,model control group showed no significant changes in serum sIL-2R content and testosterone level(P>0.05),indicating that model control group did not affect serum sIL-2R content and testosterone level.Conclusion Pipa Qingcuo Capsule provides good therapeutic effect on inflammation caused by rat model with acne on the auricle,and the mechanism of treating acne might involve inhibiting and reducing the content of IL-1α.

        Acne;Pipa Qingcuo Capsule;Animal model;Interleukin-1 alpha(IL-1α)

        R-332

        A

        1003—6350(2017)21—3446—03

        10.3969/j.issn.1003-6350.2017.21.002基金項目:海南省中藥現(xiàn)代專項課題(編號:2015ZY80)通訊作者:劉巧。E-mail:ldrliuqiao@163.com

        2017-06-06)

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