盧國(guó)民 韓明寶 陳書(shū)文 尤永君*

（1.天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司，天津 300380；2.河北廊坊康達(dá)畜禽養(yǎng)殖公司，河北廊坊 065000）

12株雛雞大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

盧國(guó)民1韓明寶1陳書(shū)文2尤永君1*

（1.天津瑞普生物技術(shù)股份有限公司，天津 300380；2.河北廊坊康達(dá)畜禽養(yǎng)殖公司，河北廊坊 065000）

本文通過(guò)對(duì)河北某大型孵化場(chǎng)雛雞卵黃囊進(jìn)行病料采集，利用病原分離、培養(yǎng)特性、染色特性、生化試驗(yàn)等對(duì)病原進(jìn)行了分離鑒定，結(jié)果表明，分離出的大腸桿菌對(duì)大多數(shù)抗菌藥物敏感。

雛雞；大腸桿菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

早期雛雞檢測(cè)對(duì)早期雛雞細(xì)菌性疾病具有重要意義，本文對(duì)河北某孵化場(chǎng)60只雛雞進(jìn)行卵黃囊細(xì)菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)，為開(kāi)口藥及細(xì)菌病的預(yù)防提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病料來(lái)源

病料采自河北某孵化場(chǎng)雛雞。

1.2 主要試劑

普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂、三糖鐵瓊脂（TSI）均購(gòu)自北京路橋技術(shù)有限公司；大腸桿菌顯色培養(yǎng)基為青島海博生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；葡萄糖蛋白胨水、糖發(fā)酵管、西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂、藥敏紙片均購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.3 細(xì)菌的分離

無(wú)菌取雛雞的卵黃囊，分別劃線接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)24h，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況及菌落特征。劃線接種于麥康凱培養(yǎng)基及大腸桿菌顯色培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24h，挑取一環(huán)細(xì)菌的純培養(yǎng)，進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。

1.4 生化鑒定

挑取純培養(yǎng)物，接種糖發(fā)酵管、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。

挑取典型菌落進(jìn)行吲哚試驗(yàn)、MR試驗(yàn)、VP試驗(yàn)及檸檬酸鹽利用試驗(yàn)。

1.5 紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)

將濃度為108CFU/mL的新鮮菌液涂布普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，放置5min后，將10種藥敏紙片貼于平板表面，37℃培養(yǎng)18h后觀察結(jié)果，根據(jù)CLSL標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行藥物敏感性評(píng)價(jià)。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)結(jié)果

60只雛雞共分離出15株細(xì)菌。分離菌在普通瓊脂培養(yǎng)基上為圓形隆起、表面光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、半透明的灰白色菌落；其中12株分離菌在麥康凱培養(yǎng)基上形成桃紅色、光滑、中等大小的菌落。在大腸桿菌顯色培養(yǎng)基上形成藍(lán)綠色菌落。

2.2 形態(tài)及生化鑒定

各分離菌革蘭氏染色鏡檢，可看到淡紅色、短小的桿狀細(xì)菌。各分離菌均可以分解葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，60%的菌株還利用蔗糖；三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基上斜面和底層均產(chǎn)酸，變黃，產(chǎn)氣，不產(chǎn)生硫化氫；IMViC試驗(yàn)結(jié)果為“+ + --”。根據(jù)伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)，上述分離菌均符合大腸桿菌的特性，因此可以確定其為大腸桿菌。

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)CLSI標(biāo)準(zhǔn)，12株大腸桿菌對(duì)不同藥物的藥敏紙片的抑菌情況如下表。

表1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

由表1可以看出，從雛雞卵黃囊中分離的大腸桿菌對(duì)頭孢喹肟、恩諾沙星、新霉素、安普霉素最為敏感，對(duì)林可霉素、替米考星、卡那霉素耐藥。12株大腸桿菌均為多耐菌株，其中3個(gè)2耐菌株，4個(gè)3耐菌株，1個(gè)4耐菌株，1個(gè)5耐菌株，2個(gè)6耐菌株，1個(gè)7耐菌株。

3 討論

本次分離的12株雛雞大腸桿菌對(duì)頭孢喹肟、恩諾沙星、新霉素、安普霉素4種抗菌藥物敏感率為超過(guò)60%，可根據(jù)此結(jié)果進(jìn)行雛雞的開(kāi)口用藥及1日齡與油苗混合注射的抗生素的篩選，在12株大腸桿菌中有多株多重耐藥菌，有3株細(xì)菌對(duì)6種以上細(xì)菌耐藥。多重耐藥現(xiàn)象的出現(xiàn)可能與種雞濫用抗生素有關(guān)，許多養(yǎng)殖戶(hù)濫投抗生素，或在飼料及飲水中長(zhǎng)期添加抗菌藥物進(jìn)行疾病預(yù)防，都會(huì)造成耐藥性提高。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，應(yīng)對(duì)雛雞卵黃囊進(jìn)行分離細(xì)菌，應(yīng)盡可能通過(guò)藥敏試驗(yàn)篩選敏感藥物，為開(kāi)口藥提供依據(jù)。

[1] 胡桂學(xué).獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2006：47-60.

盧國(guó)民（1990—），男，碩士生，山東濰坊人，主要從事獸醫(yī)微生物與免疫學(xué)方面的研究工作。

尤永君，博士，主要從事動(dòng)物臨床診斷。