查 琳 易 霞 周天予

(四川省內(nèi)江市農(nóng)業(yè)科學(xué)院,四川內(nèi)江 641000)

靈芝多糖對(duì)接種PRRSV弱毒苗生長育肥內(nèi)江豬抗氧化能力的影響

查 琳 易 霞 周天予

(四川省內(nèi)江市農(nóng)業(yè)科學(xué)院,四川內(nèi)江 641000)

為了探討了飼糧中添加靈芝多糖對(duì)接種PRRSV弱毒苗生長育肥內(nèi)江豬抗氧化能力的影響,本試驗(yàn)選擇50頭生長育肥內(nèi)江豬(分為2組,每組40頭)為研究對(duì)象。試驗(yàn)按照2×2的因子設(shè)計(jì):因子一設(shè)接種PRRSV弱毒苗和不接種兩種處理;因子二為靈芝多糖添加水平,設(shè)0,50mg/kg兩個(gè)水平。在試驗(yàn)的第1d和29d接種弱毒苗。結(jié)果顯示:接種疫苗組的抗氧化能力下降。與對(duì)照組比,接種疫苗組在第7d和第14d這一時(shí)段中,血清中總抗氧化能力下降顯著(p＜0.05),在第1d血清丙二醇(MDA)含量上升。GLP組在第14d血清中的MDA顯著下降(p＜0.01)。飼糧中添加靈芝多糖能提高機(jī)體抗氧化能力。

靈芝多糖;PRRSV;抗氧化能力;內(nèi)江豬

靈芝是一種珍貴的食藥兩用的真菌，研究表明靈芝之所以具有益壽延年，補(bǔ)中增智，益心補(bǔ)氣等滋補(bǔ)功效，源自于其含有多種活性物質(zhì)，其中靈芝多糖是主要的活性成分。研究表明，靈芝多糖具有一定的抗衰老的生物學(xué)功能[1-2]。

PRRSV是一種感染豬的病毒。PRRS是由PRRSV引起的一種傳染病，它只感染豬，以厭食、懷孕母豬早產(chǎn)、死胎、木乃伊胎，仔豬呼吸困難為主要病理特征，感染本病后容易引起免疫抑制而繼發(fā)其他疾病?，F(xiàn)在用的PRRSV疫苗主要是弱毒活疫苗、滅活疫苗。其中弱毒活疫苗的效果最好。PRRSV弱毒苗被廣泛使用，但其安全性和有效性存在不一致的結(jié)果，在某些條件下注射弱毒苗還存在毒力返強(qiáng)的情況，用PRRS弱毒苗注射豬還存在向非疫苗豬傳播PRRSV致病性的情況[3]。為探討在飼糧中添加靈芝多糖對(duì)接種PRRSV弱毒苗生長育肥內(nèi)江黑豬抗氧化能力的影響，我們開展了本試驗(yàn)。

1 材料與方法

（1）試驗(yàn)材料：試驗(yàn)豬：60kg左右的內(nèi)江豬，源自四川省內(nèi)江市農(nóng)科院畜牧研究所豬場；飼養(yǎng)方為自由飲水、自由采食，確保舍內(nèi)溫度適宜、清潔、空氣流通，并定期對(duì)圈舍進(jìn)行清洗消毒；靈芝多糖，購買于上海康舟真菌多糖有限公司；PRRSV弱毒苗：北美ATCC VR-2332 PRRS株活疫苗（Ingelvac?PRRSV MLV，每頭分含TCID50為104.8）。主要儀器設(shè)備：各種規(guī)格移液器，普通離心機(jī)等。

（2）試驗(yàn)分組及處理：試驗(yàn)期為42d。試驗(yàn)按照2×2的因子設(shè)計(jì)：因子一為接種PRRSV弱毒苗和不接種兩種處理；因子二為靈芝多糖添加水平，設(shè)0，50mg/kg兩個(gè)水平（表示為CON和GLP）。試驗(yàn)共4個(gè)處理，每個(gè)處理組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4頭豬，共80頭豬。

表1 試驗(yàn)動(dòng)物分組

（3）檢測指標(biāo)及方法：每個(gè)組隨機(jī)選取一頭豬，在試驗(yàn)的7d、14d、21d、28d、35d、42d靜脈采血5ml，收集血清，-70℃冰箱保存待測。用分光光度計(jì)測定血清中的測定T-AOC值，用硫代巴比妥酸法測定血清中MDA的含量。試驗(yàn)結(jié)束的豬屠宰后，迅速分別取其肝臟部、肌肉部3g，每個(gè)樣取3份。將取出的肉樣用經(jīng)DEPC處理的生理鹽水迅速?zèng)_洗，用液氮速凍，-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

（4）統(tǒng)計(jì)分析：用spss進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。p＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

（1）靈芝多糖對(duì)接種PRRSV弱毒苗內(nèi)江豬血清T-AOC的影響 接種疫苗組的豬血清中T-AOC都有所降低，且在接種疫苗后的前14d降低程度較大。接種疫苗組與PBS對(duì)照組相比，在接種疫苗后的第7d和第14d，接種疫苗組的豬的血清中T-AOC 顯著降低（p＜0.05）。此外，在接種疫苗之后的第28d，接種疫苗組豬血清中T-AOC值低于PBS對(duì)照組。就日糧的影響而言，GLP組豬血清中T-AOC的濃度更高，在接種疫苗后的第14d和第35d差異顯著（p＜0.05）。結(jié)果顯示，日糧和免疫交互對(duì)豬血清中T-AOC濃度的影響不顯著（p＞0.05）（表2）。

表2 靈芝多糖對(duì)內(nèi)江黑豬血清中T-AOC影響

（2）靈芝多糖對(duì)接種PRRSV弱毒苗內(nèi)江豬血清MDA的影響接種疫苗組的豬血清中MDA水平有所提高。同時(shí)，在接種疫苗后的第28d，豬血清中MDA趨于正常的水平。接種疫苗組與PBS對(duì)照組相比，在接種疫苗后14d內(nèi)，接種疫苗組的內(nèi)江豬血清MDA濃度不斷升高。就日糧而言，GLP組豬血清中MDA的濃度降低，且在接種疫苗后的第14d達(dá)到顯著差異（p＜0.05）。結(jié)果顯示，日糧和免疫交互對(duì)豬血清MDA濃度的影響不顯著（p＞0.05）（表3）。

（3）靈芝多糖對(duì)接種PRRSV弱毒苗內(nèi)江豬肝臟抗氧化能力的影響 在第二次接種疫苗之后的14d，接種疫苗組肝臟中MDA濃度升高顯著（p＜0.05），肝臟中T-AOC能力降低，但其T-AOC能力的差異不顯著（p＞0.05）。就日糧而言，GLP日糧降低了豬肝臟中MDA的濃度，且有降低趨勢(shì)，豬肝臟中T-AOC能力顯著提高（p＜0.05）。結(jié)果顯示，日糧和免疫對(duì)肝臟中MDA濃度和T-AOC能力的影響不顯著（p＞0.05）（表4）。

（4）靈芝多糖對(duì)接種PRRSV弱毒苗內(nèi)江豬肌肉抗氧化能力的影響 接種疫苗組豬肌肉中MDA水平增加顯著（p＜0.05），加快肝臟脂質(zhì)過氧化，同時(shí)顯著降低了肌肉T-AOC能力（p＜0.05）。就日糧而言，GLP日糧降低了豬肌肉中MDA濃度，提高了豬肌肉中T-AOC能力，但T-AOC能力的差異不顯著（p＞0.05）。結(jié)果顯示，日糧和免疫對(duì)肌肉中MDA濃度和T-AOC能力的影響不顯著（p＞0.05）（表5）。

3 討論

靈芝多糖日糧對(duì)接種PRRSV弱毒苗內(nèi)江豬抗氧化能力的影響：

通常，正常機(jī)體它的抗氧化防御體系是非常完整的。這套完整的防御體系包括了超氧化物歧化酶、CAT以及GSH-Px等。這套完整的防御體系使體內(nèi)的自由基保持動(dòng)態(tài)平衡。然而，當(dāng)這套完整的防御抗氧化系統(tǒng)損壞，就會(huì)引起細(xì)胞損傷。細(xì)胞損傷是由于機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生過量的MDA等脂質(zhì)過氧化物而導(dǎo)致的。靈芝多糖能誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的增殖，促進(jìn)細(xì)胞因子分泌，進(jìn)而使得酶的活力得到提高，清掃自由基，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力。研究顯示，機(jī)體感染病毒后，發(fā)生病變和損壞的細(xì)胞產(chǎn)生的自由基較多，使機(jī)體抗氧化能力的變?nèi)鮗4]，造成機(jī)體氧化應(yīng)激、細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化、DNA片段分裂等。本研究的結(jié)果與上述結(jié)果一致。在接種疫苗之后的第7d和第14d，接種疫苗組血清中T-AOC顯著降低，并且在接種疫苗的第21d直到第28d血清中的T-AOC慢慢的趨于正常的水平。由此可見，在感染PRRSV之后機(jī)體的抗氧化力下降。

研究顯示，病毒對(duì)宿主細(xì)胞能夠通過發(fā)生一定的應(yīng)激反應(yīng)而產(chǎn)生并且釋放大量的自由基。同時(shí)，這些被釋放出來的自由基可以使得病毒的復(fù)制不斷增強(qiáng)。與此同時(shí)，這些被釋放出來的自由基可以引起生物膜的損傷，進(jìn)而會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的抗氧化力變?nèi)酰瑥亩l(fā)疾病。在本研究中，接種疫苗組在接種疫苗之后其內(nèi)江豬的血清中MDA水平有所提高。然而，在接種疫苗的第14d種疫苗組血清MDA濃度才慢慢開始升高，而除此之外的天數(shù)差異不顯著。

在本研究中，接種疫苗組肝臟中MDA水平極顯著增加（p＜0.01），肝臟脂質(zhì)過氧化的速度加快，同時(shí)降低了肝臟T-AOC能力，引起肝臟的氧化損傷。

多項(xiàng)研究表明，靈芝多糖對(duì)抗氧化、減緩氧化應(yīng)激有一定的作用。王君巧等[5]報(bào)道灌服黑靈芝多糖可使脾臟組織中的SOD、CAT、T-AOC的含量較模型對(duì)照組顯著提高而MDA含量較模型對(duì)照組顯著下降。在本研究中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在接種疫苗之后14d肝臟MDA水平增加，靈芝多糖日糧可以降低肝臟脂質(zhì)過氧化。靈芝多糖能提高小鼠的抗氧化能力。通過給免疫抑制小鼠服用靈芝多糖，發(fā)現(xiàn)小鼠血清中IL-2、INF-α的含量都能明顯上升，并使谷胱甘肽過氧化物酶、SOD、T-AOC、CAT水平提高，使MDA含量降低[6]。

表3 靈芝多糖對(duì)內(nèi)江豬血清MDA的影響

表4 靈芝多糖對(duì)內(nèi)江豬肝臟抗氧化能力的影響

表5 靈芝多糖對(duì)內(nèi)江豬肌肉T-AOC和MDA的影響

在本研究中，內(nèi)江黑豬在接種疫苗之后的免疫應(yīng)激期間，其機(jī)體的抗氧化能力下降，而靈芝多糖日糧組在接種疫苗后第14d和第35d內(nèi)江黑豬血清中T-AOC濃度顯著升高了；接種疫苗后的14d內(nèi)江黑豬血清中和肝臟MDA濃度降低了。結(jié)果表明，在接種疫苗之后的兩周內(nèi)，靈芝多糖能夠減輕疫苗引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)，并且能夠提高內(nèi)江豬機(jī)體的抗氧化力，進(jìn)而提高生產(chǎn)性能。

4 結(jié)論

在接種PRRSV弱毒苗的情況下，飼糧中添加靈芝多糖能夠提高機(jī)體抗氧化能力，從而提高機(jī)體免疫力。

[1]趙巖，張瑩，初樂，等.靈芝多糖的研究進(jìn)展[J].中國果蔬，2014，（32）：27-30.

[2]毛健，馬海樂.靈芝多糖的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2010，（31）：295-298.

[3]王俊文.飼糧添加白藜蘆醇對(duì)接種藍(lán)耳病弱毒苗育肥豬生產(chǎn)性能和免疫功能及肉品質(zhì)的影響[D].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[4]Krishnan V，Zeichner SL. Host cell gene expression during human immunodeficiency virus type 1 latency and reactivation and effects of targetinggenes that are differentially expressed in viral latency. Journal of Virology，2004，78（17）：9458-9473.

[5]王君巧，聶少平，余強(qiáng)，等.黑靈芝多糖對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)和抗氧化作用[J].食品科學(xué)，2012，33（23）：274-277.

[6]鄒佳妤，石廣亮，姜曉文.赤靈芝多糖對(duì)機(jī)體抗氧化作用及免疫功能的影響研究[J].中國獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2012，（2）：56-60.

查琳（1989—），女，四川內(nèi)江人，碩士研究生，主要從事內(nèi)江豬及家禽遺傳育種研究工作。