崔丹瑜，朱丁季，任昊，林靜麗，賴偉男，黃琴，趙進(jìn)軍，楊敏

（南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科，廣東 廣州 510515）

循環(huán)型microRNA-26a及其靶基因PTEN與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究

崔丹瑜，朱丁季，任昊，林靜麗，賴偉男，黃琴，趙進(jìn)軍，楊敏

（南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科，廣東 廣州 510515）

目的 探討循環(huán)型microRNA-26a（miR-26a）及靶基因PTEN在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的表達(dá)，以及在SLE發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮的作用。方法 選取36例SLE和10例健康體檢者血液標(biāo)本，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)血清miR-26a、外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中PTEN的表達(dá)，統(tǒng)計(jì)分析miR-26a、PTEN與SLE臨床資料的相關(guān)性，利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證PTEN是否為miR-26a的靶基因。結(jié)果 SLE患者血清miR-26a mRNA的表達(dá)高于健康人群（P＜0.05），PBMC中PTEN mRNA的表達(dá)低于健康人群（P＜0.05）。SLE患者miR-26a、PTEN的表達(dá)水平與C3、抗ds-DNA、紅細(xì)胞沉降率、狼瘡活動(dòng)指數(shù)相關(guān)。miR-26a轉(zhuǎn)染BaF3細(xì)胞后，PTEN表達(dá)下調(diào)，PI3K表達(dá)上調(diào)，轉(zhuǎn)染組熒光素酶活性下降（P＜0.05）。結(jié)論 SLE患者血清中過(guò)表達(dá)的miR-26a可能通過(guò)下調(diào)靶基因PTEN，上調(diào)PI3K/AKT信號(hào)通路，參與SLE的發(fā)生、發(fā)展。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡；循環(huán)型microRNA-26a；PTEN；PI3K/AKT

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種累及多個(gè)器官、系統(tǒng)的慢性自身免疫性疾病，目前認(rèn)為SLE與環(huán)境、遺傳背景、感染、雌激素等觸發(fā)的自身免疫反應(yīng)有關(guān)[1-3]。MicroRNAs是一種由20～22個(gè)核苷酸組成的單鏈非編碼RNA，通過(guò)與靶基因mRNA的3’-UTR結(jié)合，調(diào)控基因的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，microRNA與SLE的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[4-5]。研究發(fā)現(xiàn)，循環(huán)型 microRNA-26a（miR-26a）與多種自身免疫疾病密切相關(guān)[6-8]，但對(duì)循環(huán)型miR-26a在SLE中的表達(dá)及作用機(jī)制研究較少。抑癌基因PTEN是雙特異蛋白磷酸酶家族成員，近年來(lái)大量研究證實(shí)PTEN的缺失、突變?cè)谀[瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起決定性作用[9]。有研究表明，PTEN的激活或缺失與多種自身免疫疾病的發(fā)生有關(guān)[10]。本研究通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測(cè) SLE 患者血清miR-26a和外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）中 PTEN 的表達(dá)，分析兩者與臨床資料的相關(guān)性，并利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證PTEN是miR-26a的靶基因。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2014年6月-2015年6月南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院收治的36例SLE患者的血清，所有患者符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)。36例SLE患者平均年齡（35.2±6.47）歲，其中，男性2例，女性34例。采用狼瘡活動(dòng)指數(shù)（systemic lupus erythematosus disease activity Index，SLEDAI）評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估疾病活動(dòng)度，平均（12±4）分。選取同期10例健康體檢者作為對(duì)照組，其中男性2例，女性8例；平均年齡（38.4±6.81）歲，兩組年齡（t=1.369，P=0.1781）、性別（χ2=2.057，P=0.1515）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 主要材料、試劑與儀器

細(xì)胞小鼠原B細(xì)胞株BaF3，購(gòu)自上海賽百慷生物技術(shù)公司。DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清購(gòu)自美國(guó)HyClone公司，Trizol試劑（美國(guó)Invitrogen公司），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、qRT-PCR試劑盒購(gòu)自日本TaKaRa公司，Lipofectamine 2000（美國(guó)Invitrogen公司），雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒（美國(guó)GeneCopoeia公司），RNeasy Micro Kit微量RNA提取試劑盒（德國(guó)QIAGEN公司），兔抗鼠PTEN抗體、兔抗鼠PI3K抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，pMD18-T載體（日本TaKaRa公司），miR-26a、PTEN、PI3K、β-actin 引物序列由上海吉瑪公司合成（見(jiàn)表1）。

表1 PCR引物序列

1.3 方法

1.3.1 qRT-PCR檢測(cè)血清miR-26a mRNA的表達(dá) 收集EDTA抗凝的外周血2 ml，4℃、3 000 r/min離心20 min，收集上清液，按照RNeasy Micro Kit微量RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取血清RNA。取5 μl血清總RNA，以miR-26a引物為模板，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，反應(yīng)條件：42℃預(yù)變性10 min，95℃變性5 min，以cDNA為模板，進(jìn)行qRTPCR；以cel-miR-39為內(nèi)參照進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性 10 min，95℃變性 15 s，55℃退火 30 s，72℃繼續(xù)延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)。通過(guò)qRT-PCR儀ABI Step One Plus檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，根據(jù)公式Folds=2-△△Ct計(jì)算各檢測(cè)miR-26a的相對(duì)表達(dá)量，△△Ct=（CtmiR-26a-Ctcel-miR-39）實(shí)驗(yàn)組-（CtmiR-26a-Ctcel-miR-39）對(duì)照組。

1.3.2 qRT-PCR檢測(cè)PBMC中PTEN mRNA的表達(dá) 取EDTA抗凝的外周血5 ml，室溫條件下1 500 r/min離心10 min，棄上清液，加入2倍體積的PBS緩沖液，將混合液緩慢加入到含3 ml淋巴分離液的EP管中，室溫2 500 r/min離心20 min，棄上清液，3 ml PBS緩沖液洗滌沉淀，再次室溫2 500 r/min離心20 min，棄上清液。使用RNA fast 2000總RNA極速抽提試劑盒提取PBMC總RNA，取5 μl總RNA，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將PTEN mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA為模板，β-actin為內(nèi)參照進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)qRT-PCR儀軟件程序分析檢測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.3 miR-26a轉(zhuǎn)染與雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)將BaF3細(xì)胞置于DMEM高糖培養(yǎng)基+10%胎牛血清中，37℃、5%二氧化碳CO2條件下培養(yǎng)，將細(xì)胞分為轉(zhuǎn)染組（miR-26a mimics）、陰性對(duì)照組（Mimics control）和只加轉(zhuǎn)染試劑的空白對(duì)照組。將BaF3細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)，待細(xì)胞密度約為50%時(shí)，取miR-26a mimics和 Mimics control各100 pmol，分別與Lipofectamine 5 μl充分混勻，室溫孵育 30 min，將轉(zhuǎn)染混合物加入6孔板中，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，提取細(xì)胞內(nèi)總RNA，以β-actin為內(nèi)參照，qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)miR-26a、PTEN及PI3K mRNA的表達(dá)。①Western blot檢測(cè)：取轉(zhuǎn)染48 h后的3組細(xì)胞，RIPA裂解細(xì)胞，提取細(xì)胞總蛋白，SDS-PAGE電泳分離、轉(zhuǎn)膜后，加入兔抗鼠PTEN抗體（1∶300）、兔抗鼠PI3K抗體（1∶400），4℃過(guò)夜，加HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG（1∶4000），顯色劑顯色，應(yīng)用Gene Tools軟件分析PTEN、PI3K蛋白的表達(dá)；②雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)：設(shè)計(jì)PTEN基因雙向引物序列，并在兩端加上XbaⅠ和NotⅠ酶切位點(diǎn)，正向引物：5'-TCTA GACAGTGCTAAAATTC-3'，反向引物：5'-GCGGCCG CTATATATCAATG-3'；擴(kuò)增PTEN基因的 3'-UTR，對(duì)pMD18-T載體和擴(kuò)增序列進(jìn)行XbaⅠ和NotⅠ雙酶切，T4 DNA連接酶切后的pMD18-T和PTEN DNA片段，轉(zhuǎn)化并提取質(zhì)粒，取質(zhì)粒150 ng與miR-26a mimics、Mimics control各3 pmol混合后加入25 μl opti-MEM培養(yǎng)基中，將混合物與含1 μl Lipofectamine的25 μl opti-MEM充分混勻，室溫孵育30 min，加入含BaF3細(xì)胞的6孔板內(nèi)，培養(yǎng)箱中孵育24 h，按照美國(guó)Gene Copoeia公司雙熒光素酶檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，3組間比較用單因素方差分析，在方差分析有意義的基礎(chǔ)上，兩兩比較用SNK-q檢驗(yàn)，相關(guān)分析用Spearman法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLE患者血清 miR-26a、PBMC中 PTEN mRNA的表達(dá)

36例SLE患者血清miR-26a mRNA的相對(duì)表達(dá)量為（2.69±0.47），對(duì)照組為（1.34±0.29），經(jīng) t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.598，P=0.000），SLE 患者血清miR-26a mRNA的相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組。SLE患者PBMC中PTEN mRNA的相對(duì)表達(dá)量為（0.75±0.14），對(duì)照組為（1.82±0.39），經(jīng) t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.85，P=0.000），SLE患者PBMC中PTEN mRNA的相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組。見(jiàn)圖1。

圖1 SLE患者和健康人群血清miR-26a、PBMC中PTEN mRNA的表達(dá) （±s）

2.2 SLE患者miR-26a、PTEN表達(dá)與臨床資料的關(guān)系

分析SLE患者miR-26a、PTEN的表達(dá)與年齡、性別、病情進(jìn)展、臟器受累等指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果顯示，女性、SLEDAI評(píng)分高、臟器受累SLE患者的血清miR-26a的表達(dá)水平高于男性、SLEDAI評(píng)分低、無(wú)臟器受累患者。SLEDAI評(píng)分高、臟器受累SLE患者PBMC中PTEN的表達(dá)水平低于SLEDAI評(píng)分低、無(wú)臟器受累SLE患者（見(jiàn)表2）。Spearman法分析miR-26a、PTEN與SLE臨床檢測(cè)指標(biāo)C3、抗ds-DNA、紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）、SLEDAI的相關(guān)性，結(jié)果顯示，miR-26a與C3、抗ds-DNA、ESR、SLEDAI呈正相關(guān)（r=0.735、0.504、0.562和 0.662，P=0.000、0.002、0.000 和 0.000）（見(jiàn)圖 2）。PTEN與C3、抗ds-DNA、ESR、SLEDAI呈負(fù)相關(guān)（r=-0.585，-0.469，-0.588 和 -0.521，P=0.000、0.004、0.000和0.001）（見(jiàn)圖3）。線性回歸分析結(jié)果顯示，PTEN 與 miR-26a呈負(fù)相關(guān)（b=42.271，P=0.001），以PTEN為因變量，miR-26a為自變量，兩者符合Y（PTEN）=-0.448×X（miR-26a）+2.093（t=-6.502，P=0.000）（見(jiàn)圖 4）。

表2 SLE患者臨床資料與miR-26a、PTEN表達(dá)的關(guān)系

圖2 miR-26a與C3、抗ds-DNA、ESR、SLEDAI的相關(guān)性分析

2.3 miR-26a轉(zhuǎn)染后PTEN、PI3K的表達(dá)

miR-26a mimics轉(zhuǎn)染BaF3后，細(xì)胞中miR-26a mRNA表達(dá)增加，與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=159.308，P=0.000）；兩兩比較經(jīng)SNK-q檢驗(yàn)，轉(zhuǎn)染組miR-26a mRNA高于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組（q=19.337和22.076，均P=0.000），表明miR-26a已成功轉(zhuǎn)染至細(xì)胞內(nèi)。轉(zhuǎn)染后，PTEN mRNA表達(dá)減少，與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=162.311，P=0.000）；兩兩比較經(jīng)SNK-q檢驗(yàn)，轉(zhuǎn)染組PTEN mRNA表達(dá)少于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組（q=36.251和23.753，均P=0.000）。轉(zhuǎn)染后PI3K mRNA表達(dá)增加，與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=28.120，P=0.000）；兩兩比較經(jīng) SNK-q 檢驗(yàn)，轉(zhuǎn)染組PI3K mRNA表達(dá)高于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組（q=26.854 和 53.900，均 P=0.000）。Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后 PTEN 蛋白表達(dá)減少（F=8.354，P=0.0036）；兩兩比較經(jīng)SNK-q檢驗(yàn)，轉(zhuǎn)染組PTEN蛋白表達(dá)少于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組（q=31.769和87.954，均P=0.000）。而Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后PI3K蛋白表達(dá)增加（F=27.904，P=0.000）；兩兩比較經(jīng) SNK-q檢驗(yàn)，轉(zhuǎn)染組PI3K蛋白表達(dá)高于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組（q=45.856 和 39.251，均 P=0.000）。見(jiàn)圖 5、6。

圖3 PTEN與C3、抗ds-DNA、ESR、SLEDAI的相關(guān)性分析

圖4 miR-26a與PTEN的相關(guān)性分析

圖5 miR-26a mimics轉(zhuǎn)染后3組PTEN、PI3K的表達(dá)比較 （±s）

圖6 miR-26a mimics轉(zhuǎn)染后PTEN、PI3K蛋白的變化

2.4 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果

miR-26a mimics轉(zhuǎn)染BaF3后，熒光素酶活性下降（0.36±0.08），與陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=59.630，P=0.000）；兩兩比較經(jīng)SNK-q檢驗(yàn)，轉(zhuǎn)染組熒光素酶活性低于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組（q=45.159和 61.132，均 P=0.000）。表明miR-26a通過(guò)靶向PTEN的3’-UTR，負(fù)向調(diào)控PTEN的表達(dá)。見(jiàn)圖7。

圖7 miR-26a mimics轉(zhuǎn)染后熒光強(qiáng)度的變化 （±s）

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道我國(guó)SLE患病率約為70～100/10萬(wàn)人，男、女比例為1∶10[11]。SLE患者體內(nèi)存在抗DSDNA等多種自身抗體，導(dǎo)致細(xì)胞和體液免疫功能紊亂，同時(shí)累及腎臟、皮膚、關(guān)節(jié)等多個(gè)器官和組織損傷。目前尚不清楚SLE具體的發(fā)病機(jī)制，免疫細(xì)胞、DNA甲基化、組蛋白修飾、環(huán)境等因素被認(rèn)為是SLE主要病因。近年來(lái)，microRNA的生物學(xué)功能研究引起廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，microRNA參與腫瘤、自身免疫疾病等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展[12-14]。國(guó)內(nèi)學(xué)者發(fā)現(xiàn)miR-155、miR-125a、miR-146a，以及循環(huán)型 miR-189、miR-31等參與SLE發(fā)生、發(fā)展[15]。血清、血漿、尿液等體液中存在一類耐RNA酶的細(xì)胞外游離型microRNA，稱循環(huán)型microRNA，疾病特異性的循環(huán)型miRNA表達(dá)譜對(duì)疾病的診斷、預(yù)后評(píng)估有著非常重要的價(jià)值[16]。

miR-26a（NC_005107.4）是 miR-26 家族成員之一，女性表達(dá)量高于男性[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，SLE患者血清miR-26a表達(dá)水平高于健康人群，而且女性SLE患者血清miR-26a表達(dá)水平高于男性，活動(dòng)期和病變累及臟器的SLE患者的miR-26a表達(dá)水平高于穩(wěn)定期、無(wú)臟器受累的SLE患者，表明血清miR-26a上調(diào)可能與SLE的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。為進(jìn)一步明確血清miR-26a與SLE疾病活動(dòng)度的關(guān)系，本研究對(duì)miR-26a與 C3、抗 ds-DNA、ESR、SLEDAI進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示miR-26a與C3、抗ds-DNA、ESR、SLEDAI存在相關(guān)性，進(jìn)一步說(shuō)明血清miR-26a的過(guò)表達(dá)與SLE的發(fā)展相關(guān)。既往研究發(fā)現(xiàn)，miR-26a在不同疾病的發(fā)病過(guò)程中扮演迥異的雙重角色，在“抑制疾病”、“促進(jìn)疾病”2種角色間的轉(zhuǎn)換，表明miR-26a可能通過(guò)靶向不同的基因從而參與疾病的發(fā)生或轉(zhuǎn)歸。miR-26a通過(guò)靶向 EZH2、CDK6、PLAP-1等基因參與肝癌、NK/T細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)病過(guò)程，然而，對(duì)miR-26a通過(guò)何種靶基因參與SLE發(fā)病過(guò)程的研究卻鮮有報(bào)道。

PTEN基因定位于10q23.3，是雙特異蛋白磷酸酶家族成員之一，PTEN磷酸酶區(qū)域的突變導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。microRNA、乙酰化、泛素化等調(diào)控PTEN的表達(dá)。通過(guò)TARGETSCAN、MIRANDA等microRNA數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)PTEN可能是miR-26a的靶基因，本研究通過(guò)miR-26a mimics、雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)加以驗(yàn)證，結(jié)果顯示，miR-26a mimics轉(zhuǎn)染BaF3后，PTEN mRNA和蛋白表達(dá)降低，熒光素酶活性下降，表明miR-26a通過(guò)與PTEN的3’-UTR序列結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)向調(diào)控PTEN的表達(dá)。通過(guò)線性回歸分析PTEN、miR-26a的相關(guān)性，結(jié)果顯示，PTEN與miR-26a呈負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)PTEN是miR-26a的靶基因，而SLE患者PBMC中PTEN的表達(dá)水平低于健康人群的原因，可能與血清miR-26a在兩組人群的表達(dá)差異有關(guān)。PTEN是天然的PI3K/Akt信號(hào)通路負(fù)向調(diào)控因子，PTEN通過(guò)磷酸化PIP3，下調(diào)PI3K/Akt參與免疫功能的調(diào)節(jié)。吳湘妮等[21]研究發(fā)現(xiàn)，miR-7、miR-21、miR-22 表達(dá)增加，導(dǎo)致PTEN表達(dá)降低，通過(guò)上調(diào)PI3K/Akt信號(hào)通路導(dǎo)致SLE患者B細(xì)胞的高反應(yīng)性，而且PTEN的下降程度與SLE的活動(dòng)度、嚴(yán)重程度相關(guān)。本研究結(jié)果也證實(shí)該點(diǎn)，SLE患者PBMC中PTEN的表達(dá)水平與 C3、抗 ds-DNA、ESR、SLEDAI有關(guān)，病變累及臟器的SLE患者PTEN的表達(dá)水平低于未累及臟器患者。miR-26a mimics轉(zhuǎn)染BaF3后，通過(guò)與PTEN的3’-UTR序列結(jié)合，抑制PTEN的表達(dá)，導(dǎo)致PI3K/Akt信號(hào)通路失去PTEN這個(gè)關(guān)鍵的負(fù)向調(diào)控因子，因此PI3K表達(dá)上調(diào)，而上調(diào)的PI3K通過(guò)何種途徑對(duì)免疫細(xì)胞產(chǎn)生影響，仍有待進(jìn)一步的研究。

本研究結(jié)果顯示，SLE患者血清miR-26a呈高表達(dá)狀態(tài)，miR-26a表達(dá)水平與SLE的活動(dòng)度、嚴(yán)重程度存有相關(guān)性，雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)結(jié)果表明，PTEN是miR-26a的靶基因，miR-26a可能通過(guò)與PTEN的3’-UTR序列結(jié)合，抑制PTEN的表達(dá)，從而上調(diào)PI3K/AKT信號(hào)通路參與SLE的發(fā)生、發(fā)展。

[1]RAHMAN A,ISENBERG D A.Systemic lupus erythematosus[J].New England Journal of Medicine,2008,358(9):929-939.

[2]MURPHY G,LISNEVSKAIA L,ISENBERG D.Systemic lupus erythematosus and other autoimmune rheumatic diseases:challenges to treatment[J].Lancet,2013,382(9894):809-818.

[3]LIU A,LA C A.Epigenetic dysregulation in systemic lupus erythematosus[J].Autoimmunity,2014,47(4):215-219.

[4]CERIBELLI A,YAO B,DOMINGUEZ-GUTIERREZ P R,et al.MicroRNAs in systemic rheumatic diseases[J].Arthritis Research Therapy,2011,13(4):1-10.

[5]QU B,SHEN N.miRNAs in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus[J].Netherlands Journal of Medicine,2015,16(5):9557-9572.

[6]ICHII O,OTSUKA-KANAZAWA S,HORINO T,et al.Decreased miR-26a expression correlates with the progression of podocyte injury in autoimmune glomerulonephritis[J].PLoS One,1932,9(10):DOI:10.1371/journal.pone.0110383.

[7]MURATA K,FURU M,YOSHITOMI H,et al.Comprehensive microRNA analysis identifies miR-24 and miR-125a-5p as plasma biomarkers for rheumatoid arthritis[J].PLoS One,2013,8(7):295-298.

[8]HONARDOOST M A,KIANI-ESFAHANI A,GHAEDI K,et al.miR-326 and miR-26a,two potential markers for diagnosis of relapse and remission phases in patient with relapsing-remitting multiple sclerosis[J].Gene,2014,544(544):128-133.

[9]LONGACRE M,SNYDER N A,HOUSMAN G,et al.A Comparative analysis of genetic and epigenetic events of breast and ovarian cancer related to tumorigenesis[J].International Journal of Molecular Sciences,2016,17(5):759.

[10]BLüML S,SAHIN E,SAFERDING V,et al.Phosphatase and tensin homolog(PTEN)in antigen-presenting cells controls Th17-mediated autoimmune arthritis[J].Arthritis Research Therapy,2015,17(1):1-11.

[11]ZHANG S,SU J,LI X,et al.Chinese SLE treatment and research group (CSTAR)registry:V gender impact on Chinese patients with systemic lupus erythematosus[J].Lupus,2015,24(12):1267.

[12]辛倩.MiR-155通過(guò)調(diào)控S1pr1參與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)生、發(fā)展的作用機(jī)制研究[D].濟(jì)南:山東大學(xué),2015.

[13]劉佳婧,江峰,付朝偉,等.miRNA-146a基因多態(tài)性與長(zhǎng)江以南女性漢族人群系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的病例對(duì)照研究[J].復(fù)旦學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2014,41(6):747-754.

[14]范薇,唐元家,曲波,等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血細(xì)胞miR-31的表達(dá)[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2011,31(1):39-42.

[15]陳士偉.循環(huán)miR-189對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的臨床診斷價(jià)值和意義[D].上海:第二軍醫(yī)大學(xué),2011.

[16]GRIFFITHS-JONES S,SAINI H K,VAN D S,et al.miRBase:tools for microRNA genomics[J].Nucleic Acids Research,2008,36(1):154-158.

[17]JI J,SHI J,BUDHU A,et al.MicroRNA expression,survival,and response to interferon in liver cancer[J].New England Journal of Medicine,2009,361(15):1437-1447.

Association of circulating miR-26a and its target genePTEN with systemic lupus erythematosus

Dan-yu Cui,Ding-ji Zhu,Hao Ren,Jing-li Lin,Wei-nan Lai,Qin Huang,Jin-jun Zhao,Min Yang
(Department of Rheumatology and Immunology,the Affiliated South Hospital of Southern Medical University,Guangzhou,Guangdong 510515,China)

Objective To explore the expressions of circulating miR-26a and its target genePTENin systemic lupus erythematosus (SLE)and their possible roles in the occurrence and development of SLE.Methods The expressions of circulating miR-26a andPTENin peripheral blood mononuclear cells(PBMCs)were detected by qRT-PCR after blood samples were collected from 36 cases of SLE and 10 healthy people.The correlations between miR-26a,PTENand clinical data of SLE were statistically analyzed.Dual luciferase reporter system was used to test whetherPTENwas the target gene of miR-26a.Results The expression of miR-26a mRNA in the serum of the SLE patients was higher than that in the healthy people (P＜0.05),and the expression ofPTENmRNA in the PBMCs of the SLE patients was lower than that in the PBMCs of the healthy people (P＜0.05).The expression levels of miR-26a andPTENin the patients with SLE were correlated with C3,anti-dsDNA,ESR and SLEDAI.After miR-26a was transfected to BaF3 cells,the expression ofPTENwas down-regulated,and the expression of PI3K was up-regulated,and the luciferase activity of the transfected group was decreased (P＜0.05).Conclusions The over-expression of circulating miR-26a may participate in the occurrence and development of SLE through down-regulation of its target genePTENand up-regulation of PI3K/AKT signaling pathway.

systemic lupus erythematosus;circulating miR-26a;PTEN;PI3K/AKT

R593.2

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.26.009

1005-8982（2017）26-0045-07

2016-06-02

楊敏，E-mail：minyanggz@yahoo.com；Tel：13802911770

（童穎丹 編輯）