殷祖進唐琦峰顧成永黃曉晨

1)江蘇昆山市第四人民醫(yī)院外科 昆山215300 2)蘇州明基醫(yī)院麻醉科 蘇州215009 3)蘇州市立醫(yī)院(北區(qū))麻醉科蘇州215008

格拉司瓊為臨床上常用的抗惡心、嘔吐藥物。該藥常與麻醉性鎮(zhèn)痛藥物合用，用于術(shù)后自控鎮(zhèn)痛［1］，但自控鎮(zhèn)痛的用藥時間一般都超過40 h，自控止痛藥液最終能否達到無菌，應(yīng)引起麻醉醫(yī)師關(guān)注。研究表明［2-5］，局麻藥利多卡因、布比卡因均具有一定抑菌作用，本研究對比觀察了不同濃度格拉司瓊對常見菌群生長的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 藥品 鹽酸格拉司瓊注射液(1 mg/mL，蘇州長征-欣凱制藥有限公司，中國)用無菌生理鹽水稀釋至最終濃度分別為0.5、0.25、0.125和0.0625 mg/mL，藥品無防腐劑，對照組采用無菌生理鹽水。本研究采用三種菌株，包括大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、和銅綠假單胞菌。

1.2 菌株 大腸埃希桿菌(ATCC25922)、金黃色葡萄球菌(ATCC25923)和銅綠假單胞菌(ATCC27853)。標準菌株均由江蘇省臨床檢驗中心提供。

1.3 實驗方法 新鮮細菌在大豆酪蛋白胰酶水解物培養(yǎng)基培養(yǎng)18h(達到指數(shù)增長階段終點)后用無菌生理鹽水稀釋，密度為每McFarland單位，相當于初始濃度約3×108集落生成單位(CFU)/mL(標準接種物)。標準接種物測算方法采用精確計數(shù)可培養(yǎng)的細胞數(shù)。每標準接種物采用無菌生理鹽水連續(xù)的10倍的稀釋直至達到10-6。稀釋后的菌株每10-5和10-6取部分(100μL)單獨接種到血瓊脂上，在37℃環(huán)境下培養(yǎng)24 h后計數(shù)。

每20μL標準接種菌大約含5×106CFU，將其分別加入不同濃度980μL的格拉司瓊?cè)芤褐?。對照組采用等量的無菌生理鹽水。接著在37℃環(huán)境下培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后采用稀釋法，即每次用生理鹽水稀釋10倍，即懸濁液每100μL(試驗的藥物和細菌的混合液)加到900μL無菌生理鹽水，連續(xù)稀釋5次。經(jīng)上述稀釋后的懸濁液每100μL再接種于血瓊脂培養(yǎng)基上，在37℃環(huán)境下培養(yǎng)24 h后計數(shù)菌落數(shù)。每個實驗重復(fù)三遍，所有菌株的稀釋的系列測定均進行兩次。平均菌落數(shù)采用對數(shù)log10表示。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用兩變量方差分析，方差齊性時各實驗組培養(yǎng)的細菌平均菌落數(shù)分別與對照組平均菌落數(shù)比較采用PLSD-Fisher檢測方法，方差不齊時，采用2組獨立樣本的Mann-WhitneyU非參數(shù)檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

格拉司瓊對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌均有明顯的抑菌作用，格拉司瓊對大腸埃希菌的抑菌作用隨著格拉司瓊濃度的增加而增加，至0.0625 mg/mL時仍有明顯的抑菌作用(P＜0.05)。格拉司瓊對金黃色葡萄球菌的抑菌作用在格拉司瓊濃度為0.125 mg/mL時消失。格拉司瓊對銅綠假單胞菌的抑菌作用在格拉司瓊濃度為0.125 mg/mL時消失。見表1。

表1 不同濃度的格拉司瓊對細菌菌落數(shù)的影響

3 討論

硬膜外感染的發(fā)生率較低，但自從患者自控鎮(zhèn)痛的應(yīng)用后，硬膜外感染的發(fā)生率有上升趨勢，因此研究鎮(zhèn)痛相關(guān)藥物是否具有抑菌作用具有重要的臨床意義［6］。手術(shù)后患者自控鎮(zhèn)痛常用的藥物為局部麻醉藥和抗惡心、嘔吐藥物［1］。以往的研究表明局部麻醉藥利多卡因、羅哌卡因等均具有抑菌作用，但有關(guān)抗惡心、嘔吐藥物抑菌作用的文獻缺未見報道。因此本研究選用臨床上最常見的抗惡心、嘔吐藥物格拉司瓊作為研究對象。本研究結(jié)果表明，格拉司瓊在體外可以抑制大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的生長。

大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌廣泛存在于人類皮膚表面，常用于院內(nèi)感染監(jiān)測，因此我們選用這三種細菌作為觀察指標［3］。目前臨床上常用的格拉司瓊濃度為0.06 mg/mL至0.1 mg/mL，因此我們選擇的濃度從原液開始至0.0625 mg/mL。結(jié)果表明格拉司瓊在體外可以抑制大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的生長。并且有濃度依賴性，隨著濃度的增加，抑菌作用逐漸增加。在三種細菌中對大腸埃希菌的抑菌作用最強，在0.0625 mg/mL濃度下也有明顯的抑菌作用。

至于格拉司瓊抑菌作用的機制目前還不清楚，已有的研究表明［7］，局麻藥的抑菌作用是干擾了真核生物和原核生物細胞膜，改變了細胞膜的功能。有報道利多卡因能抑制粒細胞的粘附和化學(xué)趨化過程，具有一般的細胞毒性。研究表明［8］，局麻藥抑制大腸桿菌的細胞生長，并導(dǎo)致細胞內(nèi)容物的外流和干擾其呼吸作用。也有研究表明，通過改變細菌細胞外膜的通透性，利多卡因可以引起細菌細胞的去極化。Tanji等用分子生物學(xué)手段研究，發(fā)現(xiàn)局麻藥可抑制細胞內(nèi)ATP生成，同時誘導(dǎo)產(chǎn)生熱休克蛋白［9］。我們推測格拉司瓊抑菌作用的機制可能與局麻藥抑菌機制相同。格拉司瓊對金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌在低濃度時沒有抑制作用，可能由于這兩種細菌可以產(chǎn)生滅活酶及細菌生物被膜使藥物難以滲透到細菌體內(nèi)［10］。

總之，格拉司瓊在體外可以抑制大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的生長。在臨床常用濃度下，格拉司瓊可以明顯抑制大腸埃希菌的生長。格拉司瓊在體外的抑菌作用對于預(yù)防麻醉相關(guān)的感染可能有一定的臨床意義。

［1］Gan TJ.Risk factors for postoperative nausea and vomiting［J］.Anesth Analg，2006，102:1884-98.

［2］Sakuragi T，Ishino H，Dan K.Bactericidal activity of preservative-free bupivacaine on microorganisms in the human skin flora［J］.Acta Anaesthesiol Scand，1998;42:1 096-1 099.

［3］Vo Van JM，Tamanai-Shacoori Z，Shacoori V，et al.Antibacterial activity of tramadol:preliminary study［J］.Eur J Anaesthesiol，2006;23:148.

［4］Silva MT，Sousa JCF，Polonia JJ，et al.Effects of local anesthetics on bacterial calls［J］.J Bacteriol，1979;137:461–468.

［5］Boselli E，Guillier M，F(xiàn)reney J，et al.Antibacterial activity of clonidine and neostigmine in vitro［J］.Anesth Analg，2005;101:121-124

［6］Kindler CH，Seeberger MD，Staender SE.Epidural abscess complicating epidural anesthesia and analgesia:an analysis of the literature［J］.Acta Anaesthesiol Scand，1998;42:614-620.

［7］Ohsuka S，Ohta M，Masuda K，et al.Lidocaine hydrochloride and acetylsalicylate kill bacteria by disrupting the bacterial membrane potential in different ways［J］.Microbiol Immunol，1994;38:429-434.

［8］Lazdunski C，Baty D，Pages JM.Procaine，a local anesthetic interacting with the cell membrane，inhibits the processing of precursor forms of periplasmic proteins in Escherichia coli［J］.Eur J Biochem，1979，96:49-57.

［9］Tanji K，Mizushima T，Nsatori S，et a1.Induction by psyehotroplic durgs and local anesthetics of DnaK and GroEL proteins in Eseheriehia coli［J］.Biochim Biophys Acta，1992，1 129:172-176.

［10］Chandan SS，F(xiàn)aoagali J，Wainwright CE.Sensitivity of respiratory bacteria to lignocaine［J］.Pathology，2005;37:305-307.