王三躍

摘 要 針對山羊呼吸系統(tǒng)疾病的防控難題，結(jié)合實(shí)例對山羊呼吸系統(tǒng)疾病病原展開了研究。通過研究發(fā)現(xiàn)，支原體病毒、寄生蟲和細(xì)菌都有可能引發(fā)該疾病，所以還要確定引發(fā)疾病的真正病原，然后結(jié)合實(shí)際情況正確用藥，以確保疾病的防治能夠取得較好的效果。

關(guān)鍵詞 山羊；呼吸系統(tǒng)疾病；病原

中圖分類號：S858.27 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2017.27.048

在山羊養(yǎng)殖中，呼吸系統(tǒng)疾病為常見疾病，未得到及時(shí)控制會(huì)給養(yǎng)殖者帶來較大損失。在目前羊業(yè)健康發(fā)展方面，該疾病已經(jīng)成為阻礙羊業(yè)發(fā)展的重要疾病。所以在該疾病發(fā)生后，還要盡快完成病原分析，而并非是盲目用藥。根據(jù)分析結(jié)果，則能提出合理的綜合防控措施，進(jìn)而使病情得到及時(shí)有效控制。因此，還應(yīng)加強(qiáng)山羊呼吸系統(tǒng)疾病病原研究，以便為山羊養(yǎng)殖提供更多的保障。

1 山羊呼吸系統(tǒng)疾病的臨床癥狀

某山羊養(yǎng)殖場發(fā)生了一場30多只羊發(fā)病、死亡的疾病，患病羊出現(xiàn)了咳嗽喘氣、發(fā)熱、呼吸困難、流膿涕或漿液性鼻涕等呼吸系統(tǒng)疾病的癥狀，少數(shù)患病羊出現(xiàn)了拉稀、呼吸衰竭等癥狀，最終致死15只羊。從發(fā)病經(jīng)過來看，放牧人于15日發(fā)現(xiàn)三四只羊出現(xiàn)精神欠佳和體溫升高的情況，主要病癥為流淚、流涕，個(gè)別出現(xiàn)拉稀情況。2 d后發(fā)現(xiàn)病羊數(shù)量上升，且1只已經(jīng)死亡。使用恩諾沙星配合氟苯尼考進(jìn)行治療后，并未取得效果，最終發(fā)病羊數(shù)量上升至30只，死亡15只。

2 山羊呼吸系統(tǒng)疾病的病原

2.1 材料及試劑

為分析病死羊疾病病原，需對病死羊的肺臟、直腸、肝臟以及糞便進(jìn)行無菌采集，并使用絲狀支原體山羊亞種分離株、綿陽肺炎支原體作為實(shí)驗(yàn)材料。實(shí)驗(yàn)采用的試劑有兔血瓊脂平板、PPLO肉湯、細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒、TSA、TSB、微量生化反應(yīng)管及藥敏試紙等。

2.2 方法與設(shè)備

在研究病原時(shí)，需完成死羊解剖，觀察和記錄各臟器病變情況。在支原體檢測上，需完成肺臟組織采集和剪碎處理，經(jīng)過研磨、離心和過濾等環(huán)節(jié)后，利用PPLO支原體培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。在5～7 d后，連傳3代，注意培養(yǎng)液是否發(fā)生了顏色變化，取上清液完成支原體PCR特性檢測[1]。為檢測死羊是否感染流感病毒，取肺臟進(jìn)行勻漿、凍融、離心處理，然后取上清液，利用基因提取試劑盒進(jìn)行病毒RNA提取，通過反轉(zhuǎn)錄、PCR擴(kuò)增后利用瓊脂糖凝膠電泳檢測。為檢測死羊是否存在寄生蟲，取糞便進(jìn)行寄生蟲檢查。為實(shí)現(xiàn)細(xì)菌分離鑒定，將肝臟、肺臟進(jìn)行觸片處理，經(jīng)固定、染色后利用顯微鏡觀察。通過無菌采集后，利用TSA、兔血瓊脂等平板對肝臟、肺臟進(jìn)行接種培養(yǎng)。在24～48 h后觀察細(xì)菌生長情況，并取菌落鑒定。在實(shí)驗(yàn)檢測、鑒定的過程中，需采用Beckman公司生產(chǎn)的低溫離心機(jī)，Life Tech公司生產(chǎn)的Pro Flex PCR System，北京六一儀器廠生產(chǎn)的電泳儀，Thermo Forma公司生產(chǎn)的CO2培養(yǎng)箱等多種設(shè)備。

2.3 病理變化情況

從病死羊的病理情況來看，肉眼可見的多數(shù)臟器無明顯病理變化，但眼球出現(xiàn)了下陷、眼結(jié)膜潮紅等現(xiàn)象，且肺部兩側(cè)出現(xiàn)了血點(diǎn)或血斑，肝臟出現(xiàn)腫脹，膽囊萎縮，小腸年末出血，腸系膜淋巴結(jié)切面濕潤。通過病理分析，可確認(rèn)病死羊患有呼吸系統(tǒng)疾病。

2.4 病原鑒定結(jié)果

2.4.1 支原體及流感病毒檢測結(jié)果

從支原體檢測結(jié)果來看，經(jīng)過連傳3代培養(yǎng)，未發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液出現(xiàn)顏色變化。對肺臟上清液進(jìn)行檢測后發(fā)現(xiàn)，MO3、Mmc和Mccp均為陰性，因此可以說明病死羊未感染該三種支原體。從流感病毒檢測結(jié)果來看，檢測結(jié)果總體呈陰性，因此可以認(rèn)為病死羊?yàn)楦腥玖鞲胁《尽?/p>

2.4.2 寄生蟲檢查結(jié)果

從糞便檢查情況來看，先后使用沉淀法和漂浮法，都未發(fā)現(xiàn)存在有吸蟲卵和隱孢子蟲卵囊，但是發(fā)現(xiàn)了少數(shù)球蟲和線蟲的卵囊，屬于正常飼養(yǎng)情況。因此，可以判斷出病死羊的拉稀與感染寄生蟲無關(guān)。

2.4.3 細(xì)菌鑒定結(jié)果

對各組織進(jìn)行細(xì)菌鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)，肺臟中存在革蘭氏陰性桿菌，數(shù)量較少，未出現(xiàn)在肝臟中。經(jīng)過分離后，肝臟組織并未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌，肺臟則發(fā)現(xiàn)一種細(xì)菌，分別形成紅色和灰黃色兩種菌落，前一種均為大菌落，后一種大小不等，表面均光滑、濕潤，且為圓形隆起狀態(tài)。經(jīng)過24 h培養(yǎng)后，菌落中間出現(xiàn)紅色色素，且開始變渾濁，底部有絮狀沉淀產(chǎn)生。經(jīng)純化分析可以發(fā)現(xiàn)，兩種菌落為不同革蘭氏陰性桿菌株，紅色的為MS1，灰黃色為MS2。對兩個(gè)菌株進(jìn)行鑒定發(fā)現(xiàn)，MS1由尿素、葡萄糖和蔗糖等構(gòu)成，擁有黏質(zhì)沙雷氏菌的生化特性，MS2由多糖、發(fā)酵乳糖等構(gòu)成，擁有大腸桿菌生化特性。對兩株細(xì)菌進(jìn)行基因擴(kuò)增，可以得到1 400 bp目的片段。通過測序可以發(fā)現(xiàn)，MS1擁有與黏質(zhì)沙雷氏菌相似的核苷酸序列，同源性在99.4%～99.9%。MS2擁有與大腸桿菌相似的核苷酸序列，同源性超出了99%。針對這兩種細(xì)菌，為研究能夠有效殺死細(xì)菌的藥物，分別開展了藥物敏感性試驗(yàn)。從結(jié)果來看，采用新霉素、狀觀霉素、卡那霉素等藥物可以獲得更好的殺菌效果。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，對患病羊肌肉注射卡那霉素和地塞米松，持續(xù)5～7 d。針對未患病羊，注射卡那霉素進(jìn)行預(yù)防，持續(xù)3～5 d[2]。通過7 d的治療，未出現(xiàn)新患病羊，之前患病的山羊病情得到了穩(wěn)定控制。

3 結(jié)論

通過分析可以發(fā)現(xiàn)，山羊呼吸系統(tǒng)疾病，可能是由支原體病毒、寄生蟲、細(xì)菌等多種病原引起的。為確認(rèn)真正的病原，還要結(jié)合實(shí)際情況進(jìn)行病理分析和檢測鑒定，以排除其他致病因素的干擾，從而實(shí)現(xiàn)合理正確用藥，以加強(qiáng)疾病的治療和預(yù)防。

參考文獻(xiàn)

[1]石海云，辛英霞，閆振富.羊肺絲蟲病與羊鼻蠅的區(qū)別及防治[J].北方牧業(yè)，2013（13）：25.

[2]李文良，毛立，程素平，等.山羊源副流感病毒3型的分離與分子鑒定[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2015，46（2）：344-348.

（責(zé)任編輯：劉昀）endprint