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        白及糖漿的抑菌效力測(cè)定

        2017-11-06 09:39:22李東嫻杜春華徐怡曹紅云湯秀梅游燕
        云南中醫(yī)中藥雜志 2017年10期
        關(guān)鍵詞:苯甲酸鈉

        李東嫻+杜春華+徐怡+曹紅云+湯秀梅+游燕

        摘要: 目的 評(píng)價(jià)苯甲酸鈉作為白及糖漿抑菌劑的抑菌效力。方法 按《中國(guó)藥典》2015 年版通則1121進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果 苯甲酸鈉對(duì)白及糖漿中的細(xì)菌和真菌均具有良好的抑菌效果,其抑菌效力符合2015版中國(guó)藥典對(duì)于抑菌效力的規(guī)定。結(jié)論 苯甲酸鈉可以作為白及糖漿的抑菌劑添加。

        關(guān)鍵詞:抑菌效力;白及糖漿;苯甲酸鈉

        中圖分類號(hào):R2855 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號(hào):1007-2349(2017)10-0077-02

        白及為蘭科植物白及Bletille striata(Thunb)Reichbf的干燥塊莖。具有收斂止血,消腫生肌的作用。用于咯血,吐血,外傷出血,癰瘍腫毒,皮膚皸裂等癥[1]。白及糖漿是以白及作為主要成分制成的糖漿劑,主治功能為收斂,止血,補(bǔ)肺。用于長(zhǎng)年咳嗽,肺痿咯血,肺結(jié)核,慢性氣管炎,百日咳,肺氣腫,久咳傷肺,咯血吐血[2]。而現(xiàn)在市面上該種糖漿通常為多劑量包裝,且該制劑的主要成分白及并未見明顯抑菌性報(bào)道,因此使用過程中易被微生物污染,為保證該產(chǎn)品的微生物安全性,需加入抑菌劑[3]。

        2015版中國(guó)藥典第四部制劑通則的0116項(xiàng)糖漿劑中有如下規(guī)定“三、根據(jù)需要可加入適宜的附加劑,如需加入抑菌劑,除另有規(guī)定外,在制劑確定處方時(shí),該處方的抑菌效力應(yīng)符合抑菌效力檢查法(通則1121)的規(guī)定?!盵4]因此對(duì)加入抑菌劑的白及糖漿進(jìn)行抑菌效力的檢測(cè),是工藝研究過程中不可或缺的一環(huán)。

        本研究對(duì)白及糖漿(02%苯甲酸鈉),白及糖漿(03%苯甲酸鈉)分別進(jìn)行了抑菌效力的檢測(cè),以探討白及糖漿抑菌劑添加的合理性。

        1 實(shí)驗(yàn)材料

        11 樣品 白及糖漿(02%苯甲酸鈉)和白及糖漿(03%苯甲酸鈉)由云南省藥物研究所制劑研究室提供,批號(hào):20160523,包裝均為100 mL/瓶。

        12 稀釋劑及培養(yǎng)基 pH70氯化鈉-蛋白胨緩沖液、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基,均由廣東環(huán)凱生物科技有限公司提供,并經(jīng)過培養(yǎng)基適應(yīng)性驗(yàn)證。

        13 菌種 金黃色葡萄球菌〔CMCC(B)26 003 第3代〕、大腸埃希菌〔CMCC(B)44 102 第4代〕、銅綠假單胞菌〔CMCC(B)10 104 第3代〕和白色念珠菌〔CMCC(F)10 123 第3代〕均由云南省食品藥品檢驗(yàn)所提供,黑曲霉〔CMCC(B)98 003 第3代〕,由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。

        2 實(shí)驗(yàn)方法

        參照《中國(guó)藥典》2015年版第四部抑菌效力檢查法(1121)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),簡(jiǎn)述如下:

        21 菌液制備 接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基,30~35℃培養(yǎng)24 h。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基,20~25℃培養(yǎng)2 d。取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物用09%無菌氯化鈉溶液制成濃度為107-108 cfu/mL的菌懸液。取接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基,20~25℃培養(yǎng)14 d產(chǎn)生豐富孢子后,加入3~5 mL含005%(mL/mL)聚山梨酯80的09%無菌氯化鈉溶液,將孢子洗脫,之后用含005%(mL/mL)聚山梨酯80的09%無菌氯化鈉溶液將孢子懸液稀釋成濃度為107-108 cfu/mL的黑曲霉孢子懸液。取上述菌(孢子)懸液,稀釋至100-1000 cfu/mL,待用。

        22 方法適應(yīng)性驗(yàn)證

        221 供試液的制備 取3種白及糖漿各10 mL,加pH70氯化鈉-蛋白胨緩沖液90 mL,制成1:10供試液。依次稀釋為1:50,1:100稀釋液。

        222 試驗(yàn)組 取1:10,1:50,1:100供試液99 mL于滅菌試管中,加入100-1000 cfu/mL金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌01 mL,混勻后從試管中吸取1 mL注入滅菌平皿中,立刻傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基,待其凝固后,倒置于恒溫培養(yǎng)箱中30~35℃培養(yǎng)3 d。取1:10,1:50,1:100供試液99 mL于滅菌試管中,加入白色念珠菌、黑曲霉菌液01 mL,混勻從試管中吸取1 mL注入滅菌平皿中,立刻傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基,待其凝固后,倒置于恒溫培養(yǎng)箱中20~25℃培養(yǎng)5 d。每個(gè)菌種平行制備2個(gè)平皿,測(cè)定試驗(yàn)組的菌落數(shù)。

        223 供試品對(duì)照組 取1:10,1:50,1:100,供試液99 mL于滅菌試管中,加pH70氯化鈉-蛋白胨緩沖液01 mL,其余按試驗(yàn)組操作。

        224 菌液對(duì)照組 取pH70氯化鈉-蛋白胨緩沖液99 mL于滅菌試管中,加入制備好的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉菌液01 mL,其余按試驗(yàn)組操作。

        23 抑菌效力實(shí)驗(yàn)

        231 供試品接種 取2種白及糖漿各5瓶(100 mL/瓶),分別加入金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌和黑曲霉107-108 cfu/mL的菌(孢子)懸液1mL,使接種后染菌量為105-106 cfu/mL,充分混勻,使供試品中的實(shí)驗(yàn)菌均勻分布。

        232 存活菌數(shù)測(cè)定 將231中接種后的供試品,按22中合適方法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。完成后將供試品置20~25攝氏度避光貯存,于14 d、28 d,再次進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

        3 結(jié)果

        31 方法適應(yīng)性驗(yàn)證結(jié)果 回收率計(jì)算公式:[(試驗(yàn)組平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組平均菌落數(shù))/菌液對(duì)照組平均菌落數(shù)]計(jì)算回收率,見表1。

        32 存活菌落數(shù)測(cè)定結(jié)果

        321 白及糖漿(02%苯甲酸鈉)的菌落數(shù)測(cè)定結(jié)果 見表2。

        322 白及糖漿(03%苯甲酸鈉)的菌落數(shù)測(cè)定結(jié)果 見表3。endprint

        4 討論

        2015版中國(guó)藥典中抑菌效力檢查法項(xiàng)下規(guī)定,用于存活菌數(shù)測(cè)定的方法,其方法適應(yīng)性驗(yàn)證試驗(yàn)菌的回收率不得低于70%[4],而2種不同抑菌劑濃度的白及糖漿方法適應(yīng)性驗(yàn)證的結(jié)果如表1所示,金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率在各稀釋級(jí)中均大于70%,故1:10稀釋液可以使用平皿法對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),而更高的稀釋濃度中抑菌劑含量更低,故也可以使用平皿法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

        按2015版中國(guó)藥典第四部制劑通則的0116項(xiàng)糖漿劑中的規(guī)定加入抑菌劑時(shí)“山梨酸和苯甲酸的用量不得超過03%(其鉀鹽、鈉鹽的用量分別按酸計(jì))”[1],即白及糖漿種的苯甲酸鈉的含量不得超過03%。本實(shí)驗(yàn)選用了03%和02%苯甲酸鈉的白及糖漿,結(jié)果顯示,兩個(gè)抑菌劑濃度的白及糖漿,在第14d時(shí)所有加入菌種的計(jì)數(shù)均已<10 cfu/mL,且在28 d時(shí)仍保持<10 cfu/mL的菌落計(jì)數(shù),可見苯甲酸鈉可以作為白及糖漿的抑菌劑使用。

        而苯甲酸鈉作為我國(guó)常用的防腐劑和抑菌劑之一,雖然一直以來都被認(rèn)為是安全的,但近年來有報(bào)道苯甲酸鈉也具有一定毒性。雖然報(bào)道中抑制生長(zhǎng)[5]、損害神經(jīng)系統(tǒng)[6]、肝臟損害[7]等的劑量都要高于藥典規(guī)定的03%,但也有01%苯甲酸鈉飼料飼養(yǎng)的小鼠體重高于對(duì)照組的報(bào)道[5]。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)存活菌數(shù)測(cè)定的結(jié)果,兩種含不同濃度苯甲酸鈉的白及糖漿,其抑菌效力均達(dá)到藥典要求,因此建議選擇使用02%作為白及糖漿中苯甲酸鈉的濃度。

        參考文獻(xiàn):

        [1]國(guó)家藥典委員會(huì)中國(guó)藥典[S].一部北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:103

        [2]中國(guó)成方制劑(衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn))[S]北京:人民衛(wèi)生出版社,Z11-49

        [3]中國(guó)藥典2015版抑菌效力檢查法解讀[J].中國(guó)藥師,2016,19(9):1740-1742

        [4]國(guó)家藥典委員會(huì)中國(guó)藥典[S].四部北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:151-153

        [5]陳玲,葛才保苯甲酸鈉對(duì)小鼠體重的影響[J].首都食品與醫(yī)藥,2016,(2):78-79

        [6]梁川苯甲酸鈉對(duì)大鼠神經(jīng)系統(tǒng)損傷的影響[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào),2016,7(9):3810-3814

        [7]李錦玉,李榮欣,李京路,等苯甲酸鈉多次給藥對(duì)大鼠肝腎功能的影響[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)2015,50(1):134-138endprint

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