王魯英 王永紅 葉 瓊 王秋穎

乳腺癌患者中轉(zhuǎn)錄因子特化蛋白1和血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)及臨床意義

王魯英 王永紅 葉 瓊 王秋穎

目的檢測乳腺癌患者中轉(zhuǎn)錄因子特化蛋白-1(Sp-1)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)，分析其臨床意義。方法選取乳腺癌患者60例作為實驗組，乳腺良性腫瘤作為對照組，酶聯(lián)免疫吸附法檢測血液中VEGF、Sp1含量，免疫組織化學(xué)法檢測組織VEGF、Sp1表達(dá)，分析二者水平變化與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果實驗組血清中VEGF、Sp1水平較對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；實驗組癌組織中VEGF、Sp1陽性率較癌旁組織、對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；VEGF、Sp1水平與腫瘤病理類型、分化程度、原發(fā)灶大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、其他臟器遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、放療、化療有關(guān)(P<0.05)，與年齡、PS評分無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論在乳腺癌患者的血清及組織中均存在VEGF、Sp1的高度表達(dá)，二者的水平與乳腺癌病理類型、分化程度、原發(fā)灶大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、其他臟器遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、放療、化療有關(guān)。

乳腺癌；VEGF；Sp1

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1580～1583)

乳腺癌近年來發(fā)患者群逐漸年輕化，死亡率顯著升高[1]。研究證實，轉(zhuǎn)錄因子特化蛋白-1(transcription specificity protein,Sp-1)可與DNA的GC-box區(qū)域結(jié)合，增強基因的轉(zhuǎn)錄，還可能與細(xì)胞內(nèi)DNA損傷及染色體重構(gòu)有關(guān)[2]。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) 可由機體多種細(xì)胞分泌，作用于酪氨酸激酶受體，對新生血管的生成意義重大[3]。本研究通過選取在我院住院治療的乳腺癌患者作為研究對象，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血液中VEGF、Sp1的含量，免疫組織化學(xué)法檢測組織中VEGF、Sp1的表達(dá)，分析其水平的變化與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月至2016年1月在我院住院行手術(shù)治療的乳腺癌患者60例，年齡30～70歲，平均年齡(52.5±4.8)歲，均經(jīng)病理學(xué)診斷確診。選取同期在我院行手術(shù)治療的乳腺良性腫瘤患者標(biāo)本30例作為對照組，年齡35～70歲，平均(52.6±4.2)歲。入組患者在年齡、分期等方面無顯著差異，具有可比性(P>0.05)。

1.2 觀察指標(biāo)及檢測方法

1.2.1 酶聯(lián)免疫吸附法檢測入組患者血液中VEGF、Sp1含量 入組患者抽取空腹靜脈血，離心，取上清，于低溫冰箱中保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血液中VEGF、Sp1含量：計算板孔數(shù)；稀釋標(biāo)準(zhǔn)品；加樣；配液；洗滌；顯色；終止； 450 nm波長測吸光值；計算樣品濃度。

1.2.2 免疫組織化學(xué)法檢測組織中VEGF、Sp1的表達(dá) 福爾馬林固定；脫水、透明、浸蠟、包埋；切片、脫蠟、脫水；熱修復(fù)、阻斷；正常山羊血清封閉；滴加一抗50 μl靜置1 h；滴加二抗靜置10 min；DAB顯色；終止；復(fù)染、分化；封片；計算機圖像系統(tǒng)拍照，每張切片隨機選取5個視野，并記錄。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

VEGF、Sp1陽性[4]以細(xì)胞核不染色，胞膜或胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕色或棕黃色顆粒為陽性，染色細(xì)胞數(shù)：陰性(-)≤10%；弱陽性(+)11%～25%；陽性(++)26%～50%；強陽性(+++)>50%。以(-)為陰性，(+)～(+++)陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料用χ2檢驗，計量資料用方差分析，以(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，多因素分析采用Logistic回歸模型，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 入組患者血清中VEGF、Sp1含量

抽取入組患者外周靜脈血，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清中VEGF、Sp1含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實驗組VEGF為(1.25±0.14) ng/ml，Sp1為(1.07±0.12) ng/ml，較對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 入組患者血液中VEGF、Sp1含量

注：*為與對照組比較，P<0.05。

2.2 免疫組織化學(xué)法檢測VEGF、Sp1的表達(dá)

實驗組癌組織中VEGF強陽性表達(dá)10例，陽性表達(dá)38例，陽性率高達(dá)80%；Sp1強陽性表達(dá)11例，陽性表達(dá)36例，陽性率高達(dá)78.3%，較癌旁組織、對照組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 各組VEGF、Sp1的表達(dá)情況/例

注：*為與癌旁組織比較，P<0.05，#為與對照組比較，P<0.05。

2.3 實驗組VEGF、Sp1水平與臨床病理特征的關(guān)系

VEGF、Sp1水平與腫瘤病理類型、分化程度、原發(fā)灶大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、其他臟器遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、放療、化療有關(guān)(P<0.05)，與年齡、PS評分無關(guān)(P>0.05)；對于腺癌、分化程度低、原發(fā)灶大于3cm、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及器官遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、未行放療、化療的乳腺癌患者，其VEGF、Sp1水平升高越明顯，見表3。

2.4 VEGF、Sp1表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的多因素分析

對單因素分析中病理類型、分化程度、原發(fā)灶大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、其他臟器遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、放療、化療進(jìn)行l(wèi)ogistic多因素分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，病理類型、分化程度、原發(fā)灶大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、器官遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、放療、化療均是獨立危險因素，具體結(jié)果見表4。

3 討論

惡性腫瘤細(xì)胞具有不可控制生長的特點，其侵襲、遷移的能力與新生血管形成密切相關(guān)，是惡性腫瘤得以不斷生長及轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，針對腫瘤新生血管進(jìn)行治療，已經(jīng)成為臨床上腫瘤治療的熱點[5-6]。Sp1是核轉(zhuǎn)錄激活因子，在癌細(xì)胞中，Sp1可通過與ATF7IP形成復(fù)合體，維持端粒酶的活性，Sp1的異常表達(dá)與肝癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌等腫瘤的發(fā)生發(fā)展有很大的關(guān)系[7]。本研究通過檢測VEGF、Sp1在乳腺癌中的表達(dá)，分析其臨床意義。

表3 乳腺癌VEGF、Sp1水平與臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

在本研究中，取患者外周靜脈血檢測血清VEGF、Sp1含量，實驗組VEGF、Sp1水平均較對照組升高。取實驗組癌組織、癌旁組織及對照組乳腺組織檢測，實驗組癌組織中VEGF、Sp1陽性率較癌旁組織、對照組顯著升高。這提示，在乳腺癌患者的血清及組織中均存在VEGF、Sp1的高度表達(dá)。既往研究指出，VEGF在新生血管形成中意義重大，能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂，增加血管通透性，在多種惡性腫瘤中高度表達(dá)[8]。Sp1參與多種惡性腫瘤的增殖、分化、侵襲、遷移過程，通過增強Sp1的DNA 結(jié)合活性，能夠造成腫瘤細(xì)胞增殖、血管生成等惡性表型，最終導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[9-10]。

本研究對實驗組VEGF、Sp1水平與乳腺癌患者的臨床病理特征分析發(fā)現(xiàn)，VEGF、Sp1水平與乳腺癌的病理類型、分化程度、原發(fā)灶大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、其他臟器遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、放療、化療有關(guān)，與年齡、PS評分無關(guān)；對于腺癌、分化程度低、原發(fā)灶大于3 cm、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及器官遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、未行放療、化療的乳腺癌患者，其VEGF、Sp1水平升高越明顯；多因素分析顯示病理類型、分化程度、原發(fā)灶大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、器官遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、放療、化療均是獨立危險因素。對乳腺癌的臨床研究發(fā)現(xiàn)，檢測乳腺癌組織VEGF發(fā)現(xiàn)，VEGF蛋白表達(dá)顯著升高，并且與乳腺癌的新生血管生成、患者出現(xiàn)早期復(fù)發(fā)相關(guān)[11]。VEGF 促進(jìn)微血管的生成，微血管為瘤細(xì)胞提供營養(yǎng)，促進(jìn)瘤細(xì)胞生長，VEGF高表達(dá)與腫瘤的侵襲、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

綜上所述，在乳腺癌患者的血清及組織中均存在VEGF、Sp1的高度表達(dá)，二者的水平與乳腺癌的病理類型、分化程度、原發(fā)灶大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、其他臟器遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、放療、化療有關(guān)。臨床上通過檢測VEGF、Sp1水平的變化情況可能對乳腺癌患者的預(yù)后及治療提供一定的指導(dǎo)，具有重要的臨床意義。

表4 VEGF、Sp1表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的多因素分析

[1] Clemente M，Sanchez-Archidona AR，Sardon D，et al.Different role of COX-2 and angiogenesis in canine inflammatory and noninflammatorymammary cancer〔J〕.Vet J，2013，197(2):427-432.

[2] Zhou C，Ji J，Cai Q，et al.MTA2 promotes gastric cancer cells invasion and is transcriptionally regulated by Sp1〔J〕.Mol cancer,2013,12(1):102-110.

[3] Feng Y,Wang W,Hu J,et al.Expression of VEGF-C and VEGF-D as significant markers for assessment of lymphangiogenesis and lymph mode metastasis in non -small cell lung cancer〔J〕.Anat Rec(Hoboken),2010,293(5):802-812

[4] Angelica JGL,Jesus AL.Multistep Model of Cervical Cancer:Participation of miRNAs and Coding Genes〔J〕.Int J Mol Sci,2014,15(9):15700-15733.

[5] Jimi S,Yasui T,Hotokezaka M,et al.Clinical features and prognostic factors of bone metastases from colorectal cancer〔J〕.Surg Today,2013,43(7):751-756.

[6] Lee M,Celenza G,Boggess B,et al.A potent gelatinase inhibitor with anti-tumar invasive activity and its metabolic disposition〔J〕.Chem Biol Drug Des,2009,73(2):189-202.

[7] Banerjee S,Sangwan V,Mcginn O,et al.Triptolide-induced cell death in pancreatic cancer is mediated by O-GlcNAc modification of transcription factor Sp1〔J〕.J Biol Chem,2013,288(47):33927-33938.

[8] Decoster L,de Marinis F,Syrigos K,et al.Bisphosphonates:prevention of bone metastases in lung cancer〔J〕.Recent Results Cancer Res,2012,192:93-108.

[9] 梁自文，吳惠玲，羅 敏，等.轉(zhuǎn)錄因子Sp1在人內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)脂多糖相關(guān)因子1基因轉(zhuǎn)錄中的作用〔J〕.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2011,33(21):2249-2251.

[10] Lee HS,Park CK,Oh E,et al.The low SP1 expression differentially affects intestinal-type compared with diffuse-type gastric adenocarcinoma〔J〕.Plos One,2013,8(2):e55522.

[11] Zhao M，Sachs PC，Wang X，et al.Mesenchymal stem cells in mammary adipose tissue stimulate progression of breast cancer resembling the basal-type〔J〕.Cancer Biol Ther,2012,13(9):782-792.

ExpressionofTranscriptionFactor-specificProtein1andVascularEndothelialGrowthFactorinBreastCancerPatientsandItsClinicalSignificance

WANGLuying,WANGYonghong,YEQiong,etal.

No92HospitalofPLA,Nanping,353000

ObjectiveTo study the expression of transcription factor-specific protein 1(Sp1) and vascular endothelial growth factor(VEGF) in breast cancer patients and its clinical significance.Methods60 patients with breast cancer was the experimental group,breast benign tumors was the control group,enzyme-linked immunosorbent method was used to detect the contents of VEGF in blood,Sp1,immune histochemical method to detect VEGF,Sp1 expression in the organization,analysis of the level of change and the clinical pathological characteristics of breast cancer.ResultsThe serum level of VEGF,Sp1 in the experimental group was higher than the control group,the difference was statistically significant(P<0.05);Experimental cancer tissue VEGF,Sp1 higher positive rate than tissue adjacent to carcinoma(P<0.05);Level of VEGF,Sp1 and pathological type,differentiation degree,primary focal size,lymph node metastasis,distant metastasis of other organs,radiotherapy,chemotherapy(P<0.05),were not related with age,PS score(P>0.05).ConclusionBreast cancer has high expression of VEGF,Sp1 in serum and tissues,they are related with the pathological type of breast cancer,the degree of differentiation,primary focal size,lymph node metastasis,distant metastasis of other organs,radiotherapy,and chemotherapy.

Breast cancer;VEGF;Sp1

353000 中國人民解放軍第九二醫(yī)院

王永紅

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.10.005

R737.9

A

1001-5930(2017)10-1580-04

2016-09-07

2017-04-25)

(編輯吳小紅)