楊金鳳 江 軍 王秋生 馬世文 宋玉青

胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶HER2表達(dá)的臨床意義

楊金鳳 江 軍 王秋生 馬世文 宋玉青

目的觀察HER2在胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)及其臨床意義。方法選取胃癌患者140例，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移94例。采集胃癌患者的原發(fā)灶、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶及癌旁組織，采用免疫組織化學(xué)法(Elivision)方法檢測3種組織中HER2蛋白表達(dá)情況。結(jié)果140例胃癌原發(fā)灶組織中HER2蛋白陽性表達(dá)與胃癌TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與患者性別、年齡和分化程度無關(guān)(P>0.05)，癌旁組織中HER2表達(dá)與性別、年齡、分化程度、TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)(P>0.05)；HER2蛋白在胃癌原發(fā)灶、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)水平均高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而94例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶和對應(yīng)的胃癌原發(fā)灶中HER2表達(dá)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；94例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶與原發(fā)灶HER2表達(dá)一致率為89.4%，兩類標(biāo)本HER2表達(dá)狀態(tài)具有一致性(Z=6.386，P<0.001)。結(jié)論胃癌HER2蛋白的陽性表達(dá)與胃癌TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示HER2的表達(dá)與胃癌的浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)；胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶HER2的表達(dá)具有較好的一致性，患者在不能獲取原發(fā)病灶的情況下，檢測轉(zhuǎn)移灶中HER-2可能為靶向治療的選擇提供依據(jù)，為晚期胃癌患者帶來希望。

HER2；胃癌原發(fā)灶；免疫組織化學(xué)法；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶；臨床意義

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1570～1573)

胃癌是臨床上常見的惡性腫瘤，目前我國胃癌的發(fā)病率和死亡率均高于全球水平[1]。2010年發(fā)表的ToGA實(shí)驗(yàn)研究[2]證實(shí)采用曲妥珠單抗聯(lián)合化療治療提高了人類表皮生長因子受體2(HER2)陽性的晚期胃癌和胃食管連接部腺癌患者的生存期，為晚期胃癌患者的治療帶來了新的希望，如何檢測HER2狀態(tài)使其從靶向治療中受益具有重要的臨床意義。本研究選取2012年至2015年醫(yī)院診治的胃癌患者140例，運(yùn)用免疫組織化學(xué)法(Elivision)方法探討HER-2在胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)及臨床意義，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2012年至2015年醫(yī)院收治的胃癌患者140例，所有患者行開腹或腹腔鏡手術(shù)并經(jīng)病理科確診為腺癌，術(shù)前均未接受任何化療、放療或免疫等治療，其中140例胃癌原發(fā)灶組織、對應(yīng)的140例癌旁組織及對應(yīng)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶組織94例。140例胃癌患者，男性98例，女性42例；年齡23～83歲，中位年齡65歲；按WHO國際分類標(biāo)準(zhǔn)，高中分化型腺癌74例，低分化型腺癌66例；按照國際抗癌聯(lián)盟/美國癌癥聯(lián)合委員會(UICC/AJCC)公布的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)(2010年，第七版)：Ⅰ～Ⅱ期67例，Ⅲ～Ⅳ期73例，T1～T238例，T3～T4102例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移94例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例。

1.2 方法

按照2011版《胃癌HER2檢測指南》[3]，采用免疫組化Elivision方法，檢測3種組織HER2蛋白表達(dá)方法：將采集的胃癌原發(fā)灶、癌旁組織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶蠟塊進(jìn)行切片，60 ℃烤片1 h，脫蠟水化，PBS沖洗3 min×3次。pH 6.0檸檬酸鹽緩沖液煮沸熱修復(fù)，自然冷卻至室溫，PBS沖洗2 min×2次。滴加3%的過氧化氫室溫下孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS沖洗3 min×3次。滴加一抗室溫下孵育60 min，PBS沖洗3 min×3次。滴加聚合物增強(qiáng)劑(試劑A)，室溫下孵育20 min，PBS沖洗3 min×3次，滴加酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物(試劑B)室溫下孵育30 min，PBS沖洗3 min×3次，DAB顯色，顯微鏡下進(jìn)行3～5 min觀察，自來水沖洗，常規(guī)蘇木精復(fù)染，1%HCl分化，自來水沖洗，藍(lán)化，梯度酒精脫水，透明封片，顯微鏡下觀察。

1.3 免疫組化判斷方法

應(yīng)用修訂后HercepTest評分標(biāo)準(zhǔn)[4]進(jìn)行結(jié)果判定：0：無反應(yīng)或<10% 腫瘤細(xì)胞膜染色；1+：≥10% 腫瘤細(xì)胞微弱或隱約可見膜染色；僅有部分細(xì)胞膜染色；2+：≥10% 腫瘤細(xì)胞有弱到中度的基底側(cè)膜、側(cè)膜或完全性染色；3+：≥10% 腫瘤細(xì)胞基底側(cè)膜、側(cè)膜或完全性膜強(qiáng)染色。本研究將0與+視為陰性表達(dá)，2+與3+視為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用SPSS 17.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料組間比較行χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法，一致性比較采用Kappa檢驗(yàn)，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HER2蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系

在140例胃癌原發(fā)灶中HER2蛋白陽性表達(dá)與胃癌TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，與胃癌臨床病理特征性別、年齡、分化程度無關(guān)(P>0.05)；在140例對應(yīng)的癌旁組織中HER2蛋白陽性表達(dá)與胃癌臨床特征性別、年齡、分化程度、TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)，見表1。

2.2 HER2蛋白表達(dá)在胃癌不同病變組織中的表達(dá)

胃癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中HER2蛋白陽性表達(dá)在光學(xué)顯微鏡下顯示為包膜棕黃色著色。140例胃癌病例中，胃癌原發(fā)灶中有23例HER蛋白表達(dá)陽性，陽性率為16.4%(23/140)，明顯高于癌旁組織的陽性表達(dá)率[1.4%(2/140)]，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

94例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中，14例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶HER2蛋白表達(dá)陽性，陽性率為14.9%，對應(yīng)的原發(fā)灶中有20例表達(dá)陽性，陽性率為21.3%，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中HER2蛋白陽性表達(dá)率稍低于對應(yīng)的原發(fā)灶，但兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；HER2蛋白在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)率明顯高于對應(yīng)的癌旁組織，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

2.3 HER2蛋白在胃癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)情況比較

94例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中，20例胃癌原發(fā)灶HER2表達(dá)陽性，14例轉(zhuǎn)移灶表達(dá)陽性，兩者HER2均陽性表達(dá)為12例，均陰性表達(dá)72例，一致率為89.4%，經(jīng)Kappa檢驗(yàn)，胃癌原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中HER2表達(dá)狀態(tài)具有一致性(Z=6.386，P<0.001)，見表4。

3 討論

人類表皮生長因子受體-2 (human epidermal growth factor receptor-2,HER2)基因定位于染色體17q21，編碼產(chǎn)物為1種相對分子質(zhì)量為185kD的單鏈跨膜糖蛋白(又稱為p185蛋白)，是表皮生長因子受體家族成員之一，其結(jié)構(gòu)上由胞外配體結(jié)合區(qū)，跨膜區(qū)和胞內(nèi)蛋白酪氨酸激酶區(qū)3個(gè)部分組成[5]。在正常情況下該基因處于非激活狀態(tài)，當(dāng)受到體內(nèi)外因素作用后，其結(jié)構(gòu)或表達(dá)調(diào)控失常，激活酪氨酸激酶區(qū)，引發(fā)如Ras/MAPK，PI3P/Akt等一系列的細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)而從多個(gè)途徑影響腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、粘附、遷移等生物活動(dòng)[6-7]。目前研究發(fā)現(xiàn)HER2在乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、胃癌等多種惡性腫瘤中存在不同程度的基因擴(kuò)增和/或蛋白過表達(dá)[8]，提示HER2在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要意義。

表1 HER2蛋白陽性表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系/例

注：*為Fisher確切概率法。

表2 HER2蛋白在140例胃癌原發(fā)灶及癌旁組織中的表達(dá)情況(例，%)

表3 HER2蛋白在94例不同胃癌組織中的表達(dá)情況(例，%)

表4 HER2蛋白在胃癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)(例，%)

HER2蛋白在胃癌中過表達(dá)是在1986年由Sakai等首次報(bào)道[9]，隨著分子靶向研究的不斷深入，針對HER2陽性的靶向抗體在臨床上得到應(yīng)用。2010年發(fā)表的由24個(gè)國家參與的ToGA實(shí)驗(yàn)研究[2]證實(shí)采用曲妥珠單抗聯(lián)合化療治療能提高HER2陽性的晚期胃癌和胃食管連接部腺癌患者的生存期。在該研究入組階段，運(yùn)用免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry，IHC)和熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)方法篩查了3803例胃癌標(biāo)本，結(jié)果顯示，胃癌HER2陽性(IHC 2+/FISH陽性或IHC 3+)所占比例為16.6%[10]。本研究按照2011版《胃癌HER2檢測指南》推薦的檢測流程，運(yùn)用免疫組織化學(xué)法(Elivision)方法檢測HER2蛋白在胃癌中的陽性率為16.4%，明顯高于癌旁組織中的陽性表達(dá)率，提示HER2蛋白可能在胃癌發(fā)生中起到重要作用。

國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，HER2在胃癌中的表達(dá)率不盡相同，而且與胃癌的臨床病理特征之間關(guān)系亦無統(tǒng)一的結(jié)論。Bǎdescu等[11]研究表明，HER2表達(dá)與Lauren分型、腫瘤分化程度和腫瘤分期有關(guān)，裴波等[12]研究認(rèn)為HER2表達(dá)還與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和發(fā)病的年齡有關(guān)。Aoyama等研究結(jié)果表明[13]，HER2過表達(dá)與腫瘤分化程度、 Lauren分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、靜脈浸潤和淋巴管浸潤有關(guān)，它與腫瘤大小、浸潤深度和腫瘤分期無相關(guān)性。然而有學(xué)者[14]報(bào)道HER2表達(dá)與胃癌的臨床病理特征之間無明顯相關(guān)性。本研究中，HER2蛋白陽性表達(dá)與胃癌臨床病理體征中性別、年齡、分化程度等差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，HER2蛋白陽性表達(dá)與胃癌TNM分期、浸潤程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切(P<0.05)，提示：HER2蛋白在胃癌的發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要的作用，能作為判斷胃癌預(yù)后的重要指標(biāo)之一。

在本研究的94例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶與對應(yīng)的原發(fā)病灶中HER2表達(dá)一致率為89.4%，兩類組織中HER2表達(dá)狀態(tài)具有一致性(P<0.001)。關(guān)于胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中HER2狀態(tài)的比較中，有研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的HER2的狀態(tài)具有較高的一致性[15-16]，由此看出：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶對原發(fā)灶的參考價(jià)值較大，當(dāng)進(jìn)展期胃癌患者失去手術(shù)機(jī)會或復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，無法獲得原發(fā)灶標(biāo)本時(shí)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的HER2表達(dá)檢測結(jié)果具有一定的參考價(jià)值。

綜上所述，胃癌HER2蛋白的陽性表達(dá)與胃癌TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示HER2的表達(dá)與胃癌的浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)；胃癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶HER2的表達(dá)具有較好的一致性，患者在不能獲取原發(fā)病灶的情況下，檢測轉(zhuǎn)移灶中HER2可能為靶向治療的選擇提供依據(jù)，為晚期胃癌患者帶來希望。

[1] Ferlay J,Soerjomataram I,Dikshit R,et al.Cancer inciden-

ce and mortality worldwide:sources,methods and major patterns in GLOBOCAN 2012〔J〕.Int J Cancer,2015,136(5):E359-E386.

[2] Bang YJ,Van Cutsem E,Feyereislova A,et al.Trastuzumab in combination with chemotherapy versus chemotherapy alone for treatment of HER2-positive advanced gastric or gastro-oesophageal junction cancer(ToGA):A phase 3,open-label,randomised controlled trial〔J〕.Lancet,2010,376(9742):687-697.

[3] 胃癌HER2檢測指南編寫組.胃癌HER2檢測指南〔J〕.中華病理學(xué)雜志,2011,40(8),553-557.

[4] Hofmann M,Stoss O,Shi D,et al.Assessment of a HER2 scoring system for gastric cancer:results from a validation study〔J〕.Histopathology,2008,52(7):797-805.

[5] Stern DF,Heffernan PA,Weinberg RA.P185,a product of the neu proto-oncogene,is a receptorlike protein associated with tyrosine kinase activity〔J〕.Mol Cell Biol,1986,6(5),1729-1740.

[6] Sukawa Y,Yamamoto H,Nosho K,et al.Her-2 expression and PI3K-Akt pathway alternation in gastric cancer〔J〕.Digestion,2014,89(1):12-17.

[7] Zheng L,Ren JQ,Zhang L,et al.Overexpression of HER2/neu downregulates wild p53 protein expression via PI3K and Ras/Raf/MEK/ERK pathways in human breast cancer cells〔J〕.Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi,2004,33(4):358-362.

[8] Yan M,Schwaederle M,Arguello D,et al.HER2 expression status in diverse cancers:review of results from 37,992 patients〔J〕.Cancer Metastasis Rev,2015,34(1):157-164.

[9] Sakai K,Mori S,Kawamoto T,et al.Expression of epidermal growth factor receptors on normal human gastric epithelia and gastric carcinoma〔J〕.J Natl Cancer Inst,1986,77(5):1047-1052.

[10] Van Cutsem E,Bang YJ,Feng-Yi F,et al.HER2 screening data from ToGA:targeting HER2 in gastric and gastroesophageal junction cancer〔J〕.Gastric Cancer,2015,18(3)：476-484.

[11] Bǎdescu A,Georgescu CV,Vere CC,et al.Correlations between Her2 oncoprotein,VEGF expression,MVD and clinicopathological parameters in gastric cancer〔J〕.Rom J Morphol Embryol,2012,53(4):997-1005.

[12] 裴 波，寸英麗，查 勇，等.胃癌組織HER-2表達(dá)預(yù)后意義分析〔J〕.中華腫瘤防治雜志,2015,22(5):359-362.

[13] Aoyama T,Hayashi T,Fujikawa H,et al.Clinical significa-

nce of the human epidermal growth factor receptor 2(HER2) in patients with recurrent gastric cancer who received S-1 adjuvant chemotherapy〔J〕.Gan To Kagaku Ryoho,2013,40(12):1647-1649.

[14] García I,Vizoso F,Martín A,et al.Clinical significance of the epidermal growth factor receptor and HER2 receptor in resectable gastric cancer〔J〕.Ann Surg Oncol,2003,10(3):234-241.

[15] Bozzetti C,Negri FV,Lagrasta CA,et al.Comparison of H-

ER2 status in primary and paired metastatic sites of gastric cacinoma〔J〕.Br J Cancer,2011,104(9):1372-1376.

[16] Kochi M,Fujii M,Masuda S,et al.Differing deregulation of HER2 in primary gastric cancer and synchronous related metastatic lymph nodes〔J〕.Diagn Pathol,2013,8(21):191.

ClinicalSignificanceofHER2ExpressioninPrimaryGastricCancerandLymphNodeMetastasis

YANGJinfeng,JIANGJun,WANGQiusheng,etal.

AnqingHospital,Anqing,246003

ObjectiveTo investigate the expression of HER2 in primary gastric carcinoma and lymph node metastasis and its clinical significance.Methods140 patients with gastric cancer,including 94 cases of lymph node metastasis,were selected.The primary foci,lymph node metastasis and adjacent tissues of gastric cancer patients were collected.The expression of HER2 protein in 3 tissues was detected by immunohistochemistry(Elivision).Results140 cases of primary gastric cancer tissues,the positive expression of HER2 protein was related with TNM staging,depth of invasion and lymph node metastasis(P<0.05),but not with gender,age and degree of differentiation(P>0.05),paracancerous tissue HER2 expression was not related with gender,age,degree of differentiation,TNM stage,invasion depth and lymph node metastasis(P>0.05);the expression of HER2 protein in primary gastric carcinoma and metastatic lymph nodes in level were higher than the adjacent tissues,the difference was statistically significant,and 94 cases of gastric cancer,lymph node metastasis and corresponding primary foci of HER2 expression difference was statistically significant;94 cases with lymph node node metastasis node metastasis and primary tumor HER2 expression rate was 89.4%,the 2 tissues were consistent with the expression of HER2(Z=6.386,P<0.001).ConclusionThe positive expression of HER2 protein in gastric cancer is related with TNM staging,depth of invasion and lymph node metastasis,suggesting that HER2 expression is related with invasion and metastasis of gastric cancer;expression of primary tumor and lymph node metastasis of HER2 have good consistency,the patients obtain primary lesions in the case of not detecting metastases HER-2 may provide the basis for targeted treatment of choice,and hope for patients with advanced gastric cancer.

HER2 protein;Primary gastric cancer;Immunohistochemistry;Lymph node metastases;Clinical Significance

246003 海軍安慶醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.10.002

R735.2

A

1001-5930(2017)10-1570-04

2016-09-22

2017-05-23)

(編輯吳小紅)