徐俊杰 劉秀美 張利紅 魏緒霞 杜慶霞

山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院/濟(jì)南市兒童醫(yī)院1.消化科，2.病理科（山東濟(jì)南 250022）

嬰幼兒過敏性結(jié)腸炎臨床特點(diǎn)及其腸黏膜中嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白的表達(dá)

徐俊杰1劉秀美2張利紅2魏緒霞1杜慶霞1

山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院/濟(jì)南市兒童醫(yī)院1.消化科，2.病理科（山東濟(jì)南 250022）

目的研究嬰幼兒過敏性結(jié)腸炎的臨床特征及其腸黏膜組織中嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白（ECP）的表達(dá)。方法回顧分析2011年9月—2014年2月收治的24例過敏性結(jié)腸炎患兒的臨床資料；采用免疫組織化學(xué)染色法檢測和比較24例過敏性結(jié)腸炎患兒腸黏膜及16例幽門螺桿菌感染患兒的胃和十二指腸黏膜組織，以及18例先天性巨結(jié)腸患兒腸切除術(shù)后近端正常的腸黏膜中ECP表達(dá)的差異。結(jié)果24例過敏性結(jié)腸炎中男15例、女8例，嬰兒23例，＜6月齡20例；臨床表現(xiàn)均有血便，其次為腹瀉15例。1例有濕疹，3例有藥物過敏。內(nèi)鏡下病變主要累及乙狀結(jié)腸（12例）及直腸（11例），最常表現(xiàn)為黏膜紅斑（21例）、痘疹樣結(jié)節(jié)（18例）、糜爛（3例）及潰瘍（3例）等；組織病理學(xué)表現(xiàn)為黏膜嗜酸性粒細(xì)胞浸潤。過敏性結(jié)腸炎患兒腸黏膜ECP陽性嗜酸性粒細(xì)胞個數(shù)為42（30～60），幽門螺桿菌感染患兒為18（15～23），先天性巨結(jié)腸患兒為25.5（14～35），三組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（H=28.14，P＜0.001）。結(jié)論兒童過敏性結(jié)腸炎以嬰幼兒多見，內(nèi)鏡下主要表現(xiàn)為黏膜紅斑及痘疹樣結(jié)節(jié)。腸黏膜組織中ECP陽性嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)增加是過敏性結(jié)腸炎的特征性表現(xiàn)。

過敏性結(jié)腸炎； 嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白； 兒童

過敏性結(jié)腸炎（eosinophilic/allergic colitis）又稱食物蛋白性直腸結(jié)腸炎（food protein-induced proctocolitis，F(xiàn)PIPC）是非IgE途徑介導(dǎo)的食物過敏性胃腸疾病的一種，是以直腸、結(jié)腸炎性改變?yōu)橹饕攸c(diǎn)的一類疾病[1]。臨床以嬰幼兒多見，常表現(xiàn)為腹瀉、便血，大多發(fā)生于純母乳喂養(yǎng)的嬰兒，以生后6個月以內(nèi)的嬰兒發(fā)病最常見[2,3]。臨床常被誤診為感染性腹瀉，被反復(fù)給予抗生素治療。隨著過敏性結(jié)腸炎的發(fā)病率逐漸增高，近年來逐漸受到重視。

目前對于食物蛋白性直腸結(jié)腸炎的診斷尚無非侵入性的特異性的檢查手段，現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室檢查方法的靈敏度和特異度均不高。診斷主要依靠病史詢問、可疑食物的回避和引入后相同癥狀再發(fā)等判斷。嗜酸性粒細(xì)胞的激活在過敏性結(jié)腸炎發(fā)病過程中發(fā)揮重要的作用，其激活后可釋放出多種毒性蛋白，嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白（eosinophil cationic protein，ECP）是其中的一種，被認(rèn)為是嗜酸性粒細(xì)胞活化的標(biāo)志[4]。因此，檢測腸黏膜組織中ECP的表達(dá)情況對于食物蛋白性直腸結(jié)腸炎的診斷可能有一定的參考價值。

本研究通過對確診的24例嬰幼兒過敏性結(jié)腸炎患兒的臨床資料的回顧性分析來探討過敏性結(jié)腸炎的臨床特點(diǎn)。采用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測24例患兒腸黏膜組織中ECP的表達(dá)情況，并與16例幽門螺桿菌感染患兒的胃黏膜組織中ECP的表達(dá)及18例先天性巨結(jié)腸患兒腸切除術(shù)后近端正常的腸黏膜組織中ECP的表達(dá)進(jìn)行比較，以探討過敏性結(jié)腸炎患兒腸黏膜組織中ECP的表達(dá)。

1 臨床資料

選取濟(jì)南市兒童醫(yī)院2011年9月—2014年2月收治的24例過敏性結(jié)腸炎患兒，男18例、女6例。過敏性結(jié)腸炎診斷依據(jù)2011年美國專家組提出的最新指南[5]及Odze等[6]提出的病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，并參考國內(nèi)既往研究的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，所有入選患兒均經(jīng)臨床和/或結(jié)腸鏡及病理檢查證實(shí)；發(fā)病年齡1個月3天～6歲，中位年齡2個月28天，其中6月齡以內(nèi)嬰兒20例。選取同期收治的16例幽門螺桿菌感染的患兒，男7例、女9例，中位年齡7歲6個月；獲得這部分患兒的胃黏膜組織。選取同期收治的18例先天性巨結(jié)腸患兒，男12例、女6例，中位年齡2個月11天；獲得這部分患兒腸切除術(shù)后近端正常的腸黏膜組織。

所有患兒均在全身麻醉下行電子結(jié)腸鏡及胃鏡檢查（Olympus-GIF260），并獲取胃腸黏膜組織送病理檢查及行ECP免疫組化染色并進(jìn)行比較。

過敏性結(jié)腸炎以1歲以下嬰幼兒多見，共23例（95.8%），其中6個月以下20例（83.3%）。23例中13例患兒為純母乳喂養(yǎng)，5例患兒為混合喂養(yǎng)。24例患兒均有血便（100%），表現(xiàn)為鮮紅色血絲、暗紅色血塊或者血水樣便；其次表現(xiàn)為腹瀉15例（62.5%），為稀糊狀或稀水樣，每日大便數(shù)次至十余次不等。部分患兒有特應(yīng)性體質(zhì)病史，其中濕疹1例，藥物過敏3例。

24例過敏性結(jié)腸炎患兒的內(nèi)鏡下病變主要累及乙狀結(jié)腸（12例）及直腸（11例），最常見的表現(xiàn)為黏膜紅斑（21例）、痘疹樣結(jié)節(jié)（18例）、糜爛（3例）及潰瘍（3例）等，少數(shù)患兒鏡下黏膜正常（1例），見圖1。

圖1 結(jié)腸鏡下黏膜改變

ECP免疫組織化學(xué)染色采用二步法。免疫組織化學(xué)檢測試劑盒購自中杉金橋。腸黏膜病理標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋、切片、脫蠟、水化組織切片后用枸櫞酸鈉進(jìn)行熱修復(fù)，3%的H2O2去離子水孵育10 min，磷酸鹽緩沖鹽水(PBS0.01 mol/L，pH值7.2～7.4)漂洗3次，每次2 min；向玻片滴加約100 μL一抗ECP（購自英國Abcam公司，1∶125）25℃孵育2 h，PBS漂洗3次，每次2 min；滴加試劑1（聚合物增強(qiáng)劑）25℃孵育20 min，PBS漂洗3次，每次2 min；滴加試劑2（酶標(biāo)抗兔IgG聚合物）25℃孵育20 min，PBS漂洗3次，每次2 min；3,3-二氨基聯(lián)苯胺顯色、蘇木素-伊紅（HE）復(fù)染后鏡下觀察。組織病理學(xué)表現(xiàn)為黏膜不同部位嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤，同時以嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤（≥60個/10HP或≥20個/HP）為病理組織學(xué)判定標(biāo)準(zhǔn)。見圖2。

圖2 過敏性結(jié)腸炎患兒的組織病理改變(×400)

過敏性結(jié)腸炎患兒ECP陽性的嗜酸性粒細(xì)胞個數(shù)為42（30～60），幽門螺桿菌感染患兒為18（15～23），先天性巨結(jié)腸患兒為25.5（14～35）；經(jīng)Kruskal-Wallis檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，三組患兒ECP陽性的嗜酸性粒細(xì)胞個數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（H=28.14，P＜0.001），過敏性結(jié)腸炎患兒嗜酸性粒細(xì)胞個數(shù)最多。各組ECP免疫組化染色結(jié)果見圖3。

2 討論

圖3 ECP免疫組化染色（×400）

過敏性結(jié)腸炎是嬰兒食物蛋白過敏的常見表現(xiàn)，大約一半的患兒為純母乳喂養(yǎng)的嬰兒[8]。1982年，Lake等[9]首次報道6例以便血為主要癥狀的過敏性結(jié)腸炎患兒，隨后相關(guān)報道逐漸增多，但其具體發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚。目前公認(rèn)的是食物蛋白攝入導(dǎo)致機(jī)體的免疫反應(yīng)，引起結(jié)腸與直腸繼發(fā)性的炎癥改變[10]，是非IgE介導(dǎo)的食物過敏性疾病之一。

本組24例嬰幼兒過敏性結(jié)腸炎患兒的發(fā)病年齡以1歲以下多見，共23例，其中6個月以下20例，這可能與嬰幼兒胃腸道功能發(fā)育尚不完善有關(guān)，其胃腸道屏障及黏膜的免疫機(jī)制尚未完善。這些患兒臨床表現(xiàn)以腹瀉及血便最常見，部分患兒有特應(yīng)性體質(zhì)病史，其中濕疹1例，藥物過敏3例，與文獻(xiàn)報道相一致[7]。這些癥狀不具有特異性，需與兒童腸炎鑒別，避免反復(fù)使用抗生素。

本組24例過敏性結(jié)腸炎患兒鏡下主要表現(xiàn)為腸黏膜痘疹樣結(jié)節(jié)、黏膜紅斑、糜爛及潰瘍等，只有1例患兒鏡下黏膜正常，主要累及直腸及乙狀結(jié)腸；組織病理表現(xiàn)為固有層嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤。因ECP染色能同時顯示未完全脫顆粒的嗜酸粒細(xì)胞和脫顆粒后失去正常細(xì)胞形態(tài)的嗜酸粒細(xì)胞，故與普通HE染色的組織相比能更靈敏地區(qū)分嗜酸粒細(xì)胞，并可以通過觀察嗜酸粒細(xì)胞脫顆粒時周圍組織變化幫助區(qū)分嗜酸粒細(xì)胞是否參與炎癥反應(yīng)。過敏性結(jié)腸炎組ECP陽性的嗜酸性粒細(xì)胞個數(shù)高于幽門螺桿菌感染組及先天性巨結(jié)腸組。因此，腸黏膜組織中ECP表達(dá)增加是過敏性結(jié)腸炎不同于一般感染的一個特征性表現(xiàn)，對于過敏性結(jié)腸炎的診斷有一定的參考價值。ECP參與過敏性結(jié)腸炎的具體機(jī)制目前尚不明確，作為嗜酸性粒細(xì)胞脫顆粒產(chǎn)生的毒性蛋白之一，可能參與破壞腸黏膜的屏障功能及通透性。

[1]Sicherer SH.Clinical aspects of gastrointestinal food allergy in childhood [J].Pediatrics, 2003, 111(6 Pt 3): 1609-1616.

[2]Lozinsky AC, de Morais MB.Eosinophilic colitis in infants[J].J Pediatr (Rio J), 2014, 90(1): 16-21.

[3]Pumberger W, Pomberger G, Geissler W.Proctocolitis in breast fed infants: a contribution to differential diagnosis of haematochezia in early childhood [J].Postgrad Med J, 2001,77(906): 252-254.

[4]Bystrom J, Amin K, Bishop-Bailey D.Analysing the eosinophil cationic protein--a clue to the function of the eosinophil granulocyte [J].Respir Res, 2011, 12:10.

[5]Boyce JA, Assa'ad A, Burks AW, et al.Guidelines for the diagnosis and management of food allergy in the United States: summary of the NIAID-sponsored expert panel report[J].Nutr Res, 2011, 31(1): 61-75.

[6]Odze RD, Wershil BK, Leichtner AM, et al.Allergic colitis in infants [J].J Pediatr, 1995, 126(2): 163-170.

[7]李中躍, 馬 嗚, 陳 潔.兒童過敏性結(jié)腸炎33例診治分析[J].臨床兒科雜志 , 2006, 24(11)∶790-793.

[8]Hwang JB, Park MH, Kang YN, et al.Advanced criteria for clinicopathological diagnosis of food protein-induced Proctocolitis [J].J Korean Med Sci, 2007, 22(2):213-217.

[9]Lake AM, Whitington PF, Hamilton SR.Dietary proteininduced colitis in breast-fed infants [J].J Pediatr, 1982,101(6): 906-910.

[10]Bone J, Claver A, Guallar I, et al.Allergic proctocolitis, foodinduced enterocolitis: immune mechanisms, diagnosis and treatment [J].Allergol Immunopathol (Madr), 2009, 37(1):36-42.

Clinical characteristics of allergic colitis and the expression of eosinophil cationic protein in intestinal mucosa in infants

XU Junjie1, LIU Xiumei2, ZHANG Lihong2, WEI Xuxia1, DU Qingxia1
(1.Department of Gastroenterology, 2.Department of Pathology, Qilu Pediatric Hospital of Shandong University, Jinan 250022, Shangdong, China)

Objectives To explore the clinical features of allergic colitis and the expression of eosinophil cationic protein(ECP) in intestinal mucosa in infant and young children.MethodsThe clinical data of 24 cases of allergic colitis treated from September 2011 to February 2014 were analyzed retrospectively.Immunohistochemical staining was used to detect expressions of ECP in intestinal mucosa in 24 cases of allergic colitis, gastric and duodenal mucosa in 16 cases of helicobacter pylori infection and proximal normal intestinal mucosa in 18 cases of postoperative resection of congenital megacolon, and the results were compared.ResultsIn the 24 subjects (15 males and 8 females) with allergic colitis,.they were infants except for 1 subject,and 20 subjects were ＜6 months old.All of them had bloody stool, in which there were 15 cases of diarrhea, 1 case of eczema and 3 cases of drug allergy.The endoscopic lesions were mainly showed in the sigmoid colon (12 cases) and the rectum (11 cases).The most common manifestations were mucosal erythema (21 cases), pox like nodules (18 cases), erosions (3 cases), and ulcers(3 cases).Histopathological findings were eosinophilic infiltration of the mucosa.The number of eosinophils in intestinal mucosa was 42 (30～60) in patients with allergic colitis whose ECP was positive, 18 (15～23) in patients withHelicobacter pyloriinfection and 25.5 (14～35) in patients with congenital megacolon children, and the differences are statistically significant mong three groups (H=28.14，P＜0.001).ConclusionsAllergic colitis is more common in infants and young children.The main endoscopic findings are mucosal erythema and eruption like nodules.In addition, the increase of ECP positive eosinophils in intestinal mucosa is the characteristic manifestation of allergic colitis.

allergic colitis; eosinophil cationic protein; child

doi∶10.3969/j.issn.1000-3606.2017.10.006

2016-12-13)

(本文編輯：鄒 強(qiáng))