湯俊峰，余喜然，鄭水娥，朱虹

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明市第一醫(yī)院檢驗科，福建 三明36500)

外周血異型淋巴細胞及EBV DNA聯(lián)合檢測在兒童傳染性單核細胞增多癥中的臨床應(yīng)用價值

湯俊峰，余喜然，鄭水娥，朱虹

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明市第一醫(yī)院檢驗科，福建 三明36500)

目的 研究外周血異型淋巴細胞及EBV DNA聯(lián)合檢測在兒童傳染性單核細胞增多癥患者中臨床診斷價值。方法從2015年8月-2017年1月，選擇我院兒科208例發(fā)熱患者，其中確診傳染性單核細胞增多癥42例作為觀察組，其他發(fā)熱病人166例對照組。對兩組使用外周血異型淋巴細胞及EBV DNA聯(lián)合檢測，對比兩組不同檢測方式的效果。結(jié)果 觀察組的單核細胞%（M%）以及異型淋巴細胞%、EBV DNA顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。各項指標的靈敏度：M%＞異型淋巴細胞%＞EBV DNA，特異度：EBV DNA＞異型淋巴細胞%＞M%。聯(lián)合檢測的靈敏度以及特異度均大于各個單項檢測。結(jié)論 外周血異型淋巴細胞及EBV DNA聯(lián)合檢測在兒童傳染性單核細胞增多癥患者具有十分重要的意義，靈敏度以及特異度較高。

外周血異型淋巴細胞；EBV DNA；傳染性單核細胞增多癥

小兒傳染性單核細胞增多癥(infectious mononucleosis)，是一種單核-巨噬細胞系統(tǒng)急性增生性傳染病，主要由EBV病毒引起的，以侵犯淋巴系統(tǒng)為主的急性感染性疾病，患者的病程常具有一定的自限性[1-3]。臨床表現(xiàn)變化多端，除了臨床上常見有發(fā)熱、咽峽炎、淋巴結(jié)及肝脾腫大外，實驗室檢測時可發(fā)現(xiàn)外周血液單核細胞明顯增多，出現(xiàn)異常淋巴細胞，嗜異性凝集試驗以及抗EBV病毒的抗體陽性。因此，實驗室檢查對傳染性單核細胞增多癥的診斷十分重要。鑒于此，本文特此研究外周血異型淋巴細胞及EBV DNA聯(lián)合檢測在兒童傳染性單核細胞增多癥中臨床價值，得到了一些結(jié)論，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 從2015年8月-2017年1月，選取福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明市第一醫(yī)院兒科208例發(fā)熱患者作為研究對象。其中確診傳染性單核細胞增多癥42例作為觀察組，符合中華醫(yī)學(xué)會關(guān)于發(fā)熱、傳染性單核細胞增多癥的診斷標準[4]；排除先天畸形、嚴重臟器功能不全及惡性腫瘤者；排除臨床資料不完整及不能配合研究者。其中男性29例，女性13例；年齡在5～16歲之間，平均年齡為（8.1±3.2）歲。其他發(fā)熱病人166例作為對照組。其中男性101例，女性65例；年齡在6～15歲；平均年齡為（7.9±3.2）歲。具體診斷為：上呼吸道感染93例，支氣管肺炎50例，其他診斷共23例。兩組患者性別、年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)院倫理委員會批準，并均簽署知情同意書。

1.2 檢測方法單核細胞百分比檢測在日本Sysmex1000i全自動血細胞分析儀器上進行，使用抗凝管 EDTA-K2，對患者采取血量 1.5～2.5ml，將其顛倒混合搖勻3～5次，10min到1h之間將檢測完成。采用配套的試劑以及原廠家質(zhì)控品，所有操作按照規(guī)范要求進行。EBV DNA載量檢測選取實時定量PCR技術(shù)（RT-PCR），具體操作為：先抽取患兒靜脈血4ml置于枸櫞酸鈉抗凝管中，應(yīng)用Taq-Man熒光標記探針基因擴增技術(shù)進行檢測，探針序列為 FPEEBV5’-XC-CTCGGA-CAGCTCCTAAGAAGG-CACC-Y-3’，26bp。 PCR 擴增條件：將各反應(yīng)管放入實時熒光PCR檢測儀DA7600，按下列條件擴增：取PCR反應(yīng)管若干，分別加入處理后的樣品上清液2μl，8000r/min離心數(shù)秒放入熒光定量PCR檢測儀樣品槽。按對應(yīng)順序設(shè)置陰性質(zhì)控品、陽性定量參考品及待測標本。在93℃環(huán)境下進行預(yù)變性2min后，再在93℃環(huán)境變性45s后轉(zhuǎn)入55℃環(huán)境下變性60s，往復(fù)10個循環(huán)，最后在93℃環(huán)境變性30s后轉(zhuǎn)55℃下變性45s，往復(fù)30個循環(huán)。試劑選購中山大學(xué)達安基因股份有限公司，具體操作按說明書進行。采患兒末梢血推片進行端氏染色，在高倍顯微鏡下計數(shù)異常淋巴細胞及比例。

1.3 觀察指標比較兩組的檢測結(jié)果，以及各項檢測項目在診斷傳染性單核細胞增多癥中的價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理通過SPSS 21.0統(tǒng)計軟件分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組檢測結(jié)果比較結(jié)果表明，觀察組的EBV DNA(copies/ml)、M%以及異型淋巴細胞%顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01），見表1。

表1 兩組檢測結(jié)果比較（例，x±s）

2.2 各項檢測結(jié)果對比各項指標的靈敏度：M%＞異型淋巴細胞%＞EBV DNA(copies/ml)，特異度：EBV DNA(copies/ml)＞異型淋巴細胞%＞M%，陽性預(yù)測值：M%＞異型淋巴細胞%＞EBV DNA(copies/ml)，陰性預(yù)測值：EBV DNA(copies/ml)＞異型淋巴細胞%＞M%。聯(lián)合檢測的靈敏度以及特異度均大于各個單項檢測。

表2 各項檢測項目診斷傳染性單核細胞增多癥的價值對比（%）

3 討論

傳染性單核細胞增多癥是由EBV病毒導(dǎo)致的一種急性或者是亞急性的淋巴細胞良性增生的傳染病癥，常發(fā)生在兒童時期以及青少年時期，在成年人、老年群體以及嬰兒中較為少見，成為兒科的常見病癥。此病癥的臨床癥狀十分復(fù)雜，特征缺乏典型性，少數(shù)患者會發(fā)展為EBV病毒相關(guān)性質(zhì)的嗜血細胞綜合征，或者是自發(fā)性的脾破裂，進而威脅患者的生命[5，6]。在醫(yī)院對患者進行檢查時，診斷傳染性單核細胞增多癥必不可缺的輔助方式，每項都有方法學(xué)的限制，聯(lián)合檢測是現(xiàn)如今臨床對病癥進行診斷的發(fā)展趨勢。

本文結(jié)果顯示，觀察組的EBV DNA、M%以及異型淋巴細胞%顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。這是因為患者在出現(xiàn)感染之后，自身機體的淋巴細胞過度上升導(dǎo)致的。從觀察結(jié)果表明，M%指標水平在靈敏度上優(yōu)于其他的單項檢測指標，這說明M%對于傳染性單核細胞增多癥檢測具有十分重要的意義[7-9]。單核細胞的百分比上升是因為異型淋巴細胞的增加導(dǎo)致的，分析儀器將異型淋巴細胞錯誤認成了單核細胞，因此導(dǎo)致單核細胞的數(shù)量上升[10]。除此之外，單核細胞的上升伴隨白細胞的數(shù)量上升，要防止發(fā)生白血病的可能性。因此要實施血涂片對細胞的形態(tài)進行檢測。異型淋巴細胞成為診斷傳染性單核細胞增多癥較為可靠的指標[11]。異型淋巴細胞一般情況下，在發(fā)病之后的第3d發(fā)生，在第一周漸漸加多，能夠達到10%以上，在第2～3周最多可以達到40%以上，之后漸漸減小，持續(xù)在5～7周。需要重視的是，異型淋巴細胞在一些其他的病毒感染病癥中也會找到，例如巨細胞病毒等，因此需要其他項目來輔助小兒傳染性單核細胞增多癥的診斷[12，13]。

隨著實時熒光定量PCR檢測技術(shù)應(yīng)用的越來越成熟，開展EBV DNA的定量檢測成為越來越多臨床實驗室的選擇。通過我們的實驗可以看出觀察組與對照的EBV DNA的表達量有明顯的差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義，具有較高的特異度。EBV DNA的定量檢測作為EBV感染的分子生物學(xué)標記，有快速、簡便、特異性強的特點，且PCR技術(shù)可以高效擴增，具有高特異性和高精確性的優(yōu)點，這在臨床診療中，可以幫助臨床醫(yī)師迅速確診EBV病毒感染的患兒，并使其抗病毒療效的判斷可以很客觀地從病毒核酸的量上反映出來。同時，PCR用于病原體感染的血液篩查，可以檢出抗原抗體尚未出現(xiàn)的“窗口期”內(nèi)的感染，從而避免經(jīng)輸血引發(fā)的感染性疾病的傳播。因此，熒光定量PCR技術(shù)對于急性發(fā)熱患兒是否為EBV感染的診斷和治療療效的觀察都具有重要的指導(dǎo)意義[14，15]。

從表2中可以看出聯(lián)合檢測能明顯提高檢測的靈敏度與特異度。因此，外周血異型淋巴細胞及EBV DNA聯(lián)合檢測在傳染性單核細胞增多癥患者具有十分重要的意義，值得臨床推薦使用。

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R446.11+1，Q523，R512.7

A

1674-1129(2017)05-0722-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.05.031

2017-05-09；

2017-08-08)