李心雨，劉亞平，杜新路，嚴(yán)繼舟

(上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院生物系，上海 201306)

四種氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)斑馬魚胚胎發(fā)育和成體組織再生的雙重影響

李心雨，劉亞平，杜新路，嚴(yán)繼舟

(上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院生物系，上海 201306)

篩選小分子化合物促進(jìn)組織再生仍然是再生醫(yī)學(xué)的一個(gè)巨大挑戰(zhàn)。前期研究提示神經(jīng)遞質(zhì)在斑馬魚(Daniorerio)下頜再生過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。本實(shí)驗(yàn)分別剪切Flk-GFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚成體下頜組織和1月齡幼魚尾鰭，然后將其置入四種神經(jīng)遞質(zhì)(?；撬?、谷氨酸、甘氨酸以及γ-氨基丁酸)的濃度梯度環(huán)境中，培養(yǎng)5 d后取成魚下頜制作冰凍切片進(jìn)行觀察檢測(cè)新生血管熒光量，對(duì)幼魚尾鰭再生進(jìn)行長(zhǎng)度測(cè)量。結(jié)果顯示甘氨酸和γ-氨基丁酸對(duì)損傷組織的再生表現(xiàn)出促進(jìn)作用，而?；撬岷凸劝彼岜憩F(xiàn)出在低濃度時(shí)促進(jìn)與高濃度的抑制作用。胚胎培養(yǎng)和早期胚胎細(xì)胞增生的MTT試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)在不同濃度所表現(xiàn)出的細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和毒性作用。結(jié)果提示有必要建立一個(gè)多層面包括從細(xì)胞-胚胎-幼魚和成魚的斑馬魚檢測(cè)系統(tǒng),能有效篩選再生相關(guān)小分子化合物及其合適濃度。

神經(jīng)遞質(zhì)；?；撬?；谷氨酸；甘氨酸；γ-氨基丁酸；斑馬魚(Daniorerio)；組織再生

Abstract：Screening small molecules targeting tissue regeneration remains challenge in regenerative medicine.The previous investigations have indicated that neurotransmitters play important roles in the process of regeneration inDanioreriojaw.Flk-GFP transgenicD.rerioadult jaw and 1-month-old caudal fins were separately cut in this study,and then rear the damaged fishes for 5 days in the presence of four amino acid neurotransmitters (taurine,glutamate,glycine,and γ- aminobutyric acid (GABA)) at gradient concentrations.Their effects on tissue regeneration were compared by measuring GFP intensity of cryosections,or by measuring the caudal fin regeneration length.The results showed that glycine and GABA promote damaged tissue regeneration,while taurine and glutamate exhibit promotion at low concentrations and inhibition at high concentrations.D.rerioembryo culture and MTT assays on embryonic cell proliferation further demonstrate the dosage dependent- cell nutrition and cytotoxicity of the four amino acid neurotransmitters.This experiment suggests that it is necessary to set up a multifacetedD.reriosystem covering cell,embryo,larvae and adult，which can effectively screen the regeneration-related small molecule compounds and their suitable concentrations.

Keywords：neurotransmitter；taurine；glutamate；glycine；GABA；Daniorerio；tissue regeneration

組織再生一直是許多生物研究者所研究的重要課題。再生能力在不同物種間差異很大,與人及高等脊椎動(dòng)物相比,低等脊椎動(dòng)物(如斑馬魚)有著較強(qiáng)的再生能力[1]。低等生物的組織和器官部分或全部損傷后可以完全再生，弄清它們?cè)偕倪^(guò)程與調(diào)控機(jī)制，是現(xiàn)代再生醫(yī)學(xué)所關(guān)注的重要內(nèi)容之一，將為哺乳類和人類的組織再生提供理論依據(jù)。斑馬魚(Daniorerio)作為一種極好的模式生物，具有和人類87%的同源基因，它的鰭、視神經(jīng)、脊髓、心臟等都具有很強(qiáng)的再生能力[2],是很好的脊椎動(dòng)物組織再生的初步模型系統(tǒng)[3]。

小分子神經(jīng)遞質(zhì)不僅能夠作為突觸間的信息連接，也參與到發(fā)育和組織再生的調(diào)控中?？焖俸Y選具有促進(jìn)組織再生的小分子化合物對(duì)于再生醫(yī)學(xué)具有重大研究意義。神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺(dopamine,DA)和γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)在下頜再生和視網(wǎng)膜再生的斑馬魚的腦部和再生局部器官都出現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化[4]。目前尚未有系統(tǒng)比較?；撬帷⒐劝彼?、甘氨酸以及γ-氨基丁酸在胚胎發(fā)育和成體組織再生方面的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)的目的是研究?；撬帷⒐劝彼?、甘氨酸以及γ-氨基丁酸這四種神經(jīng)遞質(zhì)在斑馬魚下頜以及尾鰭組織再生中的作用，以期構(gòu)建一個(gè)活體斑馬魚系統(tǒng)模型，用于快速篩選組織再生相關(guān)的小分子物質(zhì)。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

1.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚

實(shí)驗(yàn)用魚為本實(shí)驗(yàn)室繁殖傳代的AB野生型和Flk1-GFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚，作為血管再生的標(biāo)志[5]。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

牛磺酸、谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、多聚甲醛、MTT試劑盒(以上試劑均購(gòu)自上海生工生物有限公司)、DAPI封片劑(Sigma)

1.2 實(shí)驗(yàn)方法：

1.2.1 組織取材

為了比較氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)組織再生的影響，實(shí)驗(yàn)選取斑馬魚成魚為研究對(duì)象，每組3～5尾，分缸培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)前用0.05%的MS-222對(duì)斑馬魚進(jìn)行短暫麻醉處理，再用手術(shù)剪刀剪除下頜前端約1/3部分，剪切后將魚分別置于牛磺酸、谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸的濃度梯度環(huán)境中，于5 d后再次剪切，制作冰凍切片。

為了說(shuō)明高濃度氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)組織再生有抑制作用，我們比較高濃度氨基酸(1 mmol/L和4 mmol/L)對(duì)尾鰭再生的效果。實(shí)驗(yàn)選取約1月齡斑馬魚為研究對(duì)象，每組3～5尾，分缸培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)前用0.05%的MS-222對(duì)斑馬魚進(jìn)行短暫麻醉處理，再用手術(shù)剪刀從其尾鰭開叉處剪切，剪切后將魚置于牛磺酸、谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸的濃度環(huán)境中，分別于第2天和第5天在體視熒光顯微鏡 (Zeiss Stereo Disccovery v12)下觀察拍照。

1.2.2 冰凍切片的制備

方法詳見參考文獻(xiàn)[6]

1.2.3 細(xì)胞增殖及細(xì)胞活力測(cè)定

根據(jù)濃度梯度預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將剛孵出的胚胎置于四種氨基酸的三種濃度環(huán)境(0.05 mmol/L，0.1 mmol/L，1 mmol/L)中，設(shè)置空白對(duì)照，在恒溫箱中靜置4 h。手工去膜后，再置于MTT試劑中培養(yǎng)4 h，使用酶標(biāo)儀(microplate reader)在570 nm下測(cè)定吸光度值(OD value)。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析和處理

1.2.4.1 圖像數(shù)字化處理

借助Adobe Photoshop CC (64 Bit) 測(cè)定四種藥物各濃度梯度影響后第5天下頜相同大小區(qū)域Flk1-GFP熒光相對(duì)強(qiáng)度平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，然后根據(jù)熒光強(qiáng)度平均值(M)和差異系數(shù)(CV)計(jì)算再生相對(duì)強(qiáng)度(RI)。RI=M/CV。這里M表示血管再生強(qiáng)度，CV表示再生分布的差異。另外也測(cè)量尾鰭再生的長(zhǎng)度，即新生組織距分叉處最大值。圖像數(shù)字化后，借助Graphpad Prism 6進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，做出統(tǒng)計(jì)圖。

1.2.4.2 OD值的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

各組測(cè)得的實(shí)驗(yàn)組吸光度值與空白對(duì)照組比較,所得差值表示活細(xì)胞數(shù)量的增減。利用SPSS Statistics 19 win32統(tǒng)計(jì)軟件，通過(guò)單因素方差分析進(jìn)行差異的顯著性檢驗(yàn)；運(yùn)用Duncan多重比較檢驗(yàn)差異，取P<0.05為差異顯著。比較方法常用標(biāo)字母法，凡有相同字母的平均數(shù)即表示差異不顯著，凡無(wú)相同字母的平均數(shù)即表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 四種氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)成魚下頜組織再生的影響

根據(jù)GFP綠色熒光相對(duì)強(qiáng)度和相對(duì)再生強(qiáng)度的測(cè)定結(jié)果(圖1)，與未剪切組相比，?；撬?Taurine)只在0.1 mmol/L濃度時(shí)有著較好的促進(jìn)效果，血管增生相對(duì)增多。而在0.05 mmol/L及1 mmol/L濃度時(shí)，血管熒光信號(hào)強(qiáng)弱不等，分布不均勻，離散程度大。

圖1 牛磺酸對(duì)血管再生的影響及其相對(duì)再生強(qiáng)度分析Fig.1 The effect of taurine on blood vessel regeneration and analysis of dosage-dependent relative regenerative intensity.(A)未剪切下頜(CK)；(B)-(D)剪切1/3的下頜分別置于?；撬釢舛葹?.05、0.1和1 mmol/L。

由圖2可見，谷氨酸在0.05 mmol/L濃度時(shí)表現(xiàn)出明顯促進(jìn)再生作用，在0.1 mmol/L以及1 mmol/L濃度時(shí)則表現(xiàn)出抑制的作用，整體趨勢(shì)為低濃度促進(jìn)，高濃度抑制。與未剪切組相比，在高濃度(1 mmol/L)時(shí)熒光分布更不均勻，離散程度大。

圖2 谷氨酸對(duì)血管再生的影響及其相對(duì)再生強(qiáng)度分析Fig.2 The effect of Glu on blood vessel regeneration and analysis of dosage-dependent relative regenerative intensity.(A)未剪切下頜(CK)；(B)-(D)剪切1/3的下頜分別置于谷氨酸(Glu)濃度為0.05、0.1和1 mmol/L

甘氨酸表現(xiàn)出對(duì)血管再生有一定的促進(jìn)作用，特別是0.05 mmol/L時(shí)，熒光信號(hào)強(qiáng)，且分布密集。但在1 mmol/L時(shí)能抑制血管的增生(圖3)。與未剪切組相比，三種不同甘氨酸濃度下都呈現(xiàn)熒光均勻分布狀態(tài)。

γ-氨基丁酸對(duì)于下頜再生與谷氨酸表現(xiàn)出相似的作用，即在0.05 mmol/L和0.1 mmol/L濃度下表現(xiàn)出較好的促進(jìn)作用，而在1 mmol/L時(shí)呈現(xiàn)抑制增生的結(jié)果(圖4)。同時(shí)，與未剪切組相比，在1 mmol/L時(shí)熒光分布更不均勻，離散程度大。

總之，四種氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)都具有促進(jìn)組織再生的功能，但促進(jìn)組織再生的合適濃度不盡相同。?；撬帷⒐劝彼?、甘氨酸和γ-氨基丁酸濃度分別為0.1，0.05,0.05和0.1 mmol/L。當(dāng)氨基酸濃度增加到1 mmol/L濃度時(shí)，四種氨基酸都表現(xiàn)為抑制作用。

圖3 甘氨酸對(duì)血管再生的影響及其相對(duì)再生強(qiáng)度分析Fig.3 The effect of Gly on blood vessel regeneration and analysis of dosage-dependent relative regenerative intensity.(A)未剪切下頜(CK)；(B)-(D)剪切1/3的下頜分別置于甘氨酸(Gly)濃度為0.05、0.1和1 mmol/L

圖4 γ-氨基丁酸對(duì)血管再生的影響及其相對(duì)再生強(qiáng)度分析Fig.4 The effect of GABA on blood vessel regeneration and analysis of dosage-dependent relative regenerative intensity.(A)未剪切下頜(CK)；(B)-(D)剪切1/3的下頜分別置于γ-氨基丁酸(GABA)濃度為0.05、0.1和1 mmol/L。

2.2 四種氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)幼魚尾鰭組織再生的影響

與剪切不加氨基酸對(duì)照組相比，四種神經(jīng)遞質(zhì)在4 mmol/L濃度時(shí)，均表現(xiàn)出對(duì)尾鰭再生有不同程度的抑制作用，從強(qiáng)到弱依次為谷氨酸、γ-氨基丁酸、?；撬岷透拾彼帷Ｖ挥懈拾彼嵩? dpa時(shí)表現(xiàn)出促進(jìn)再生作用。圖5為4 mmol/L氨基酸處理各組尾鰭剪切2 d(2 dpa)和5 d(5 dpa)后再生長(zhǎng)度的測(cè)量結(jié)果。與未剪切組相比，可以看到剪切的尾鰭組織在5 d時(shí)已長(zhǎng)出原有尾鰭的一半以上，其中，牛磺酸和甘氨酸具有較好的再生效率，恢復(fù)率分別為60%～70%。

2.3 四種氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)胚胎發(fā)育的影響

結(jié)果顯示4 mmol/L的四種氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)胚胎存活均有不同影響。添加氨基酸20 h后，各試驗(yàn)組胚胎存活率均逐漸下降；48 h后牛磺酸組和GABA組胚胎全部死亡，60 h谷氨酸組胚胎死亡，只有甘氨酸組還有存活的胚胎 (圖6)。

MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示0.05 mmol/L下，牛磺酸組細(xì)胞存活明顯高于谷氨酸和甘氨酸組，但其他氨基酸組之間無(wú)顯著差異；0.1 mmol/L下，?；撬峤M明顯低于其它組，谷氨酸組明顯高于甘氨酸組。在1 mmol/L下，除甘氨酸與GABA之間無(wú)顯著差異外，牛磺酸明顯低于谷氨酸，后者又明顯低于甘氨酸和GABA(圖7)。實(shí)驗(yàn)表明：不同藥物不同濃度，對(duì)細(xì)胞增殖狀況有不同影響。其中，細(xì)胞對(duì)?；撬釢舛仍黾幼蠲舾?，而對(duì)GABA濃度變化不敏感，與體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果相符。

圖5 四種氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)幼魚尾鰭再生的影響.Fig.5 Effects of four amino acid neurotransmitters on the regeneration of larval cadual fins(注：Taurine：牛磺酸；Glu：谷氨酸；Gly：甘氨酸；GABA：γ-氨基丁酸)

圖6 四種氨基酸對(duì)胚胎發(fā)育的影響Fig.6 Effects of four amino acids on the embryonic development

圖7 早期胚胎分別置于四種小分子不同濃度的相對(duì)吸光度Fig.7 The OD value of early embryos relative to control凡有相同字母的即為差異不顯著，凡無(wú)相同字母的即為差異顯著

3 討論

機(jī)體損傷后不僅激發(fā)局部組織器官修復(fù)，而且激發(fā)全身資源的重新分配，其中神經(jīng)組織通過(guò)神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用[4]。神經(jīng)遞質(zhì)不僅介導(dǎo)神經(jīng)元之間和神經(jīng)元與效應(yīng)器之間的信息傳遞，而且作為細(xì)胞外環(huán)境中的一員也參與了神經(jīng)干細(xì)胞(NSC)的增殖和分化。但目前神經(jīng)遞質(zhì)受體在NSC增殖和分化中的表型變化尚不完全清楚，神經(jīng)遞質(zhì)以及神經(jīng)遞質(zhì)受體在NSC增殖和分化中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究也不多見。谷氨酸作為一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，可以作為神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)劑或者神經(jīng)毒性劑[7]。一些資料表明，在腦的發(fā)育過(guò)程中有高含量的谷氨酸表達(dá)。谷氨酸對(duì)神經(jīng)細(xì)胞分化也有作用，它可促進(jìn)神經(jīng)元生長(zhǎng)和分化，NMDAR(谷氨酸離子型受體)激活可促進(jìn)小腦顆粒神經(jīng)元神經(jīng)突起的過(guò)度生長(zhǎng)以及海馬細(xì)胞的分芽[8]，并可促進(jìn)神經(jīng)突觸的形成。在斑馬魚下頜修復(fù)過(guò)程中，下頜、腦部和肝臟部位從修復(fù) 2 h開始谷氨酸和甘氨酸含量便呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，到2 d時(shí)達(dá)到高峰，隨后便緩慢下降[9]。對(duì)產(chǎn)后大鼠施加代謝型谷氨酸受體激動(dòng)劑，會(huì)產(chǎn)生視神經(jīng)萎縮，并引發(fā)視網(wǎng)膜毒性[10]。此外，谷氨酸大劑量時(shí)會(huì)導(dǎo)致大鼠海馬細(xì)胞死亡[11,12]，小鼠腦皮層細(xì)胞死亡[13]，以及大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞死亡[14]。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)谷氨酸在低濃度時(shí)表現(xiàn)出促進(jìn)再生，在高濃度時(shí)則抑制再生和胚胎發(fā)育，甚至導(dǎo)致胚胎細(xì)胞死亡。

甘氨酸在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，尤其是在脊椎、腦干和一些腦區(qū)，甘氨酸受體(GlyR)通過(guò)增加突觸后細(xì)胞膜Cl-通透性而起突觸后抑制作用，是一個(gè)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)。但在本實(shí)驗(yàn)中，甘氨酸表現(xiàn)出促進(jìn)再生效果。另一個(gè)抑制性神經(jīng)遞質(zhì)GABA，也對(duì)組織再生表現(xiàn)出促進(jìn)作用。已有研究表明[15],GABA可促進(jìn)胚胎大鼠脊髓和皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞的遷移，并可部分促進(jìn)大鼠海馬錐體神經(jīng)元、小鼠顆粒神經(jīng)元和胚胎雞頂蓋神經(jīng)元神經(jīng)突起的生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)中，甘氨酸與GABA的最適濃度不一樣，分別在0.05 mmol/L和0.1 mmol/L具有較突出的組織再生促進(jìn)作用。另外，胚胎細(xì)胞對(duì)二者濃度變化有較好的耐受性，特別是GABA。

牛磺酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最豐富的游離氨基酸之一，其各種生物學(xué)功能可以作為調(diào)制生物體的激動(dòng)劑[16]。眾多研究表明，?；撬峥墒故軗p的神經(jīng)，如大鼠海馬齒狀回區(qū)神經(jīng)元再生、視網(wǎng)膜光化學(xué)損傷以及其它組織的修復(fù)、再生，以及在生長(zhǎng)發(fā)育中都有著重要的作用。牛磺酸可以提高金魚視網(wǎng)膜外植體突起的長(zhǎng)度和密度[17]，這個(gè)過(guò)程是通過(guò)增加鈣通量的營(yíng)養(yǎng)作用來(lái)進(jìn)行的[18]。與先前的研究不同，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)?；撬嵊袊?yán)格的濃度限制。只是在0.1 mmol/L濃度時(shí)表現(xiàn)出最佳的促進(jìn)下頜組織的再生作用，濃度增高相反會(huì)表現(xiàn)出細(xì)胞毒性。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分體現(xiàn)了不同濃度的氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)在組織再生的促進(jìn)和抑制雙重作用。第一，興奮性神經(jīng)遞質(zhì)和抑制性神經(jīng)遞質(zhì)在組織再生過(guò)程中都是必要的，扮演精細(xì)調(diào)節(jié)角色。在斑馬魚下頜修復(fù)早期，興奮性遞質(zhì)如 多巴胺 和谷氨酸含量增加的速度明顯高于抑制性遞質(zhì) GABA 和 甘氨酸，即興奮性遞質(zhì)的釋放很可能是在傳遞著下頜細(xì)胞增殖和組織修復(fù)的信號(hào)[9]。顯然興奮性氨基酸過(guò)度刺激會(huì)損害組織的再生。第二，這些神經(jīng)遞質(zhì)不僅以遞質(zhì)的形式存在，同時(shí)還是物質(zhì)和能量代謝的重要成份，參與細(xì)胞新陳代謝，表現(xiàn)出營(yíng)養(yǎng)和毒性。在低濃度時(shí)較多體現(xiàn)在物質(zhì)代謝中的作用，在高濃度時(shí)作為神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié)作用得到凸顯。相比之下，GABA在三種濃度下均具有促進(jìn)增殖作用，而高濃度(1 mmol/L)谷氨酸具有明顯毒性效應(yīng)。這一點(diǎn)在組織再生和胚胎發(fā)育的作用是一樣的。實(shí)時(shí)檢測(cè)氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)的含量和平衡能動(dòng)態(tài)，有助了解再生組織細(xì)胞間的神經(jīng)調(diào)節(jié)和再生細(xì)胞的新陳代謝狀況。組織再生依賴再生細(xì)胞彼此之間的協(xié)作，其代謝系統(tǒng)整體之間的氨基酸水平的精細(xì)調(diào)節(jié)十分重要。

總之，本實(shí)驗(yàn)從斑馬魚胚胎、幼魚尾鰭和成體器官以及胚胎細(xì)胞水平揭示了氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)在胚胎發(fā)育、成體組織再生和胚胎細(xì)胞增生具有不相一致的調(diào)節(jié)作用，比如，0.1 mmol/L牛磺酸最適合下頜組織再生；而在細(xì)胞水平，0.05 mmol/L?；撬嶙罾谂咛ゼ?xì)胞增生。同樣，0.05 mmol/L谷氨酸最適于下頜組織再生；而0.1 mmol/L濃度胚胎細(xì)胞生長(zhǎng)最好。如果選用氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)混合物，最佳合適濃度將定為0.05 ～0.1 mmol/L濃度。因此利用一個(gè)完整檢測(cè)系統(tǒng)，可有效篩選發(fā)育和組織再生相關(guān)的小分子藥物及其濃度。

致謝：上海海洋大學(xué)海洋生物系和神經(jīng)科學(xué)研究所老師和同學(xué)對(duì)本課題研究給予了許多幫助，在此表示感謝。

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DualeffectsoffouraminoacidneurotransmittersonDaniorerioembryonicdevelopmentandadulttissueregeneration

LI Xin-yu,LIU Ya-ping,DU Xin-lu,YAN Ji-zhou

(DepartmentofBiology,CollegeofFisheriesandLifeSciences,ShanghaiOceanUniversity,Shanghai201306,China)

2017-03-12；

2017-07-12

上海市教委大學(xué)生科研創(chuàng)新項(xiàng)目(B-5106-13-0001)；上海市教委水產(chǎn)高峰學(xué)科項(xiàng)目(A1-2035-17-0001B3-12)

李心雨(1997- )，專業(yè)方向?yàn)樗飳W(xué)。E-mail:975683903@qq.com

嚴(yán)繼舟。Email:jyan2@shou.edu.cn

S942.1

A

1000-6907-(2017)05-0058-06