陳會(huì)良 （安徽科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 233100）

鳳陽(yáng)大骨雞消化道內(nèi)容物脂肪酶活性試驗(yàn)

陳會(huì)良 （安徽科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 233100）

采用脂肪酶比濁法測(cè)定消化道不同部位內(nèi)容物中脂肪酶活性，為進(jìn)一步研究鳳陽(yáng)大骨雞腸道消化酶特性和生產(chǎn)中添加外源性消化酶提供參考。結(jié)果表明：鳳陽(yáng)大骨雞消化道不同部位內(nèi)容物脂肪酶活性分布存在差異顯著性。

鳳陽(yáng)大骨雞；消化道；內(nèi)容物；脂肪酶

脂肪是動(dòng)物機(jī)體重要的供能、貯能物質(zhì)，提供必需脂肪酸，具有調(diào)節(jié)機(jī)體代謝等營(yíng)養(yǎng)生理作用，是動(dòng)物必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。脂肪酶 （LPS）廣泛存在于動(dòng)植物和微生物中的一種酶，在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用[1]。脂肪酶是脂肪消化利用最基本的酶，能將脂肪水解成為游離脂肪酸、甘油和甘油單酯，以供動(dòng)物吸收利用[2]。消化道發(fā)育程度決定了動(dòng)物的生長(zhǎng)速度，消化道發(fā)育主要表現(xiàn)在消化器官組織形態(tài)上的變化和消化生理功能上的成熟。消化功能的發(fā)育很大程度上是通過(guò)增加胰腺、肝臟及腸黏膜合成或分泌的消化液量、酶活性來(lái)實(shí)現(xiàn)。其中，胰液中含有降解主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的各種酶類，如胰淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、彈性蛋白酶、胰脂肪酶和輔脂酶，具有動(dòng)物消化飼料最主要、消化力最強(qiáng)的酶系，其活性高低與動(dòng)物的消化機(jī)能直接相關(guān)；胰液酶系的活力強(qiáng)弱被認(rèn)為是衡量機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化能力的較佳指標(biāo)，也是動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)許多試驗(yàn)研究的主要酶類[3]。本試驗(yàn)測(cè)定鳳陽(yáng)大骨雞消化道不同部位內(nèi)容物脂肪酶的含量，為進(jìn)一步了解鳳陽(yáng)大骨雞對(duì)飼料不同成分的消化能力，日糧配制和適宜養(yǎng)殖條件的確立提供理論基礎(chǔ)，同時(shí)為合理開發(fā)利用地方雞種資源提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣本采集

2012年12月10日，從鳳陽(yáng)某養(yǎng)殖場(chǎng)選購(gòu)體質(zhì)量1.5～3.0kg，公雞和母雞各5只用于試驗(yàn)。首先將試驗(yàn)雞頸靜脈放血，然后分別采集十二指腸、空腸、回腸、盲腸和直腸內(nèi)容物。分別稱取被檢測(cè)腸段內(nèi)容物1.0g，每一腸段不同部位重復(fù)取3次，以1∶9氯化鈉注射液稀釋，置勻漿機(jī)勻漿3～5min，勻漿液置于離心機(jī)，3000r/min離心10min，取上清液待測(cè)。

1.2 試驗(yàn)儀器

電子分析天平 （FA1004，上海精科儀器廠）；勻漿機(jī)(DY89-1，寧波新芝科器研究所)；離心機(jī) （TGL-16C，上海安亭科學(xué)儀器廠）；紫外分光光度計(jì) （UVmini-1240，日本島津）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 脂肪酶比濁法

三酰甘油與水制成的乳膠液，因其膠束對(duì)入射光的吸收及散射而具有乳濁性狀。膠束中的三酰甘油在脂肪酶作用下水解，使膠束分裂，濁度或光散射因而減低，減低的速率與脂肪酶活力有關(guān)[4]。

1.3.2 試劑

橄欖油乙醇液；Tris-HCL緩沖液 （pH8.8）；0.17μmol/L橄欖油乳劑。單位定義：100ml血清，在37℃水浴中，作用于底物10min，能水解1μmol底物者為1個(gè)脂肪酶活力單位。

附表 消化道不同部位內(nèi)容物脂肪酶活性 u/g

1.3.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel軟件整理，采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，結(jié)果用 “平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果

由附表可以看出，消化道不同部位內(nèi)容物脂肪酶活性以空腸活性最高，其次是回腸、十二指腸、盲腸、直腸最低。空腸和直腸、盲腸比較差異極顯著 （p＜0.01）， 與十二指腸比較差異顯著 （p＜0.05），與回腸比較差異不顯著 （p＞0.05）。

3 討論

動(dòng)物消化器官所分泌的消化酶主要有：胃蛋白酶、淀粉酶、彈性蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧基肽酶A和B、脂肪酶、二肽酶、氨基肽酶、葡萄糖淀粉酶、雙糖酶和核酸酶等。胰腺合成的各種消化酶只有分泌到畜禽消化道內(nèi)，并以激活狀態(tài)存在才對(duì)畜禽飼料成分消化具有實(shí)際意義。因此，以消化道內(nèi)酶活水平為參比，才能夠真正反映出畜禽消化道酶活的真實(shí)含量情況。已有研究發(fā)現(xiàn)，食糜在空腸內(nèi)的停留時(shí)間遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于十二指腸，與測(cè)定胰腺和整段小腸內(nèi)的酶活水平相比，利用空腸內(nèi)消化酶活水平來(lái)研究雞消化道酶活發(fā)育情況更為合理[5]。動(dòng)物體內(nèi)存在多種脂肪酶，它們參與脂肪消化、吸收、利用的全過(guò)程。由于飼料中的酯類 (以甘油三酯為例)必須先被脂肪酶水解為甘油二酯、甘油一酯和脂肪酸才能被機(jī)體吸收，因此，如何提高飼料中酯類的消化吸收率成為當(dāng)前營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究的現(xiàn)實(shí)問(wèn)題[6]。消化道pH環(huán)境是保證消化酶完成正常催化反應(yīng)和消化道有益微生物繁殖的一個(gè)重要因素，尤其是胃和小腸的pH對(duì)飼料養(yǎng)分消化吸收的影響更為重要。家禽嗉囊不具有消化能力，主要起貯存、濕潤(rùn)、浸泡和軟化飼料的作用，從而有利于飼料營(yíng)養(yǎng)成分在胃及后段消化道內(nèi)進(jìn)一步消化。嗉囊弱酸性環(huán)境主要是通過(guò)嗉囊內(nèi)微生物發(fā)酵產(chǎn)生的酸性物質(zhì)和由胃內(nèi)容物逆流入嗉囊來(lái)維持其平衡，比較易受日糧組成的影響[7]。所以，腸道不同部位對(duì)脂肪的消化吸收能力也不均衡，繼而各段腸道內(nèi)容物脂肪酶活性也相差較大。此次試驗(yàn)也證實(shí)了這一觀點(diǎn)。

在脂肪酶的作用下，飼料中的脂肪被水解成甘油二酯、甘油一酯和脂肪酸。甘油一酯和脂肪酸與膽汁酸等兩性物質(zhì)形成混合微團(tuán)再被吸收，甘油二酯在十二指腸中進(jìn)一步被水解為甘油一酯被吸收。因此，如何充分利用各種脂肪酶的特性，充分利用體內(nèi)脂肪酶，使飼料或乳汁中的脂肪能夠更快、更好的消化吸收是養(yǎng)殖業(yè)面臨的一個(gè)新問(wèn)題。在現(xiàn)代畜牧業(yè)生產(chǎn)中，為提高生產(chǎn)效率，過(guò)早地將幼畜斷奶，讓其采食固體飼料，這時(shí)幼畜會(huì)面臨很多的問(wèn)題，如胰臟和肝臟功能發(fā)育不成熟導(dǎo)致胰脂肪酶和膽鹽水平較低，而十二指腸前脂肪酶也不能有效水解飼料中的脂類物質(zhì)，導(dǎo)致幼畜不能有效地利用飼料中的脂肪，致使幼畜脂肪酸、能量攝入不足或引起脂肪性腹瀉。為避免以上問(wèn)題的發(fā)生，在養(yǎng)殖過(guò)程中通常采取添加外源性胰脂肪酶樣物質(zhì)來(lái)彌補(bǔ)幼齡動(dòng)物脂肪酶的不足，有效提高飼料中脂肪的消化吸收率。

4 結(jié)論

小腸是飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的主要場(chǎng)所。本次試驗(yàn)表明，空腸脂肪酶活性高于回腸，回腸活性高于十二指腸，消化道脂肪酶活性的高低順序?yàn)椋嚎漳c＞回腸＞十二指腸＞盲腸＞直腸。空腸和直腸、盲腸比較差異極顯著 （p＜0.01），和十二指腸比較差異顯著 （p＜0.05），和回腸比較差異不顯著（p＞0.05）。脂肪酶在小腸各段具有明顯的區(qū)域性特征，空腸脂肪酶活性最高，是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的主要場(chǎng)所。

[1]王海燕,李富偉,高秀華.脂肪酶的研究進(jìn)展及其在飼料中的應(yīng)用[J].飼料工業(yè),2007,28(6)14-15.

[2]沈建明,周學(xué)光,劉寬,等.不同來(lái)源脂肪酶對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響[J].養(yǎng)豬,2011(5)：13-14.

[3]王恬,蔣正宇,周巖民,等.飼料外源酶與動(dòng)物內(nèi)源酶的互作效應(yīng)及機(jī)制研究[J].新飼料,2006(12)：5-6.

[4]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].南京：東南大學(xué)出版社,2006：433-434.

[5]王娟,臧素敏,元娜,等.太行雞生長(zhǎng)期消化道pH及主要消化酶變化規(guī)律的研究[J].中國(guó)家禽,20l0,32(1)：16-19.

[6]楊漢博,王峰.動(dòng)物消化道脂肪酶研究概述[J].飼料廣角,2009,(5)：33-34.

[7]張鐵鷹,汪儆,李永清.0～49日齡肉仔雞消化參數(shù)的變化規(guī)律研究[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2005,32(1)：6.