方月 （遼寧省東港市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 118300）

兔巴氏桿菌病病原分離鑒定與藥敏實(shí)驗(yàn)

方月 （遼寧省東港市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 118300）

針對一例病兔進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)、生化鑒定、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以及藥敏實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果：經(jīng)染色鏡檢，生化實(shí)驗(yàn)該病原為多殺性巴氏桿菌，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，該菌有一定的致病力，藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該菌對強(qiáng)力霉素，羧芐西林中度敏感，對四環(huán)素，卡那霉素，先鋒霉素Ⅵ，萬古霉素，苯唑西林，氧氟沙星，新霉素，多西環(huán)素，奧尼妙林高度敏感，對慶大霉素耐藥。

巴氏桿菌；分離鑒定；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；藥敏實(shí)驗(yàn)

兔巴氏桿菌病是由病原菌多殺巴氏桿菌引起的一種在世界各地均發(fā)生頻率較高的傳染病，其主要特征為出血性敗血癥[1]，臨床上表現(xiàn)為敗血癥型，鼻炎型，肺炎型，中耳炎型，結(jié)膜炎型等型。發(fā)病兔子食欲不振，精神沉郁，呼吸困難，體溫升高，流鼻液[2]。該病呈世界性分布，是嚴(yán)重危害養(yǎng)兔業(yè)的重要傳染病之一。

目前兔巴氏桿菌病的發(fā)生呈上升趨勢，近年國內(nèi)也不斷有疫情報(bào)道，該病給養(yǎng)兔業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，加強(qiáng)對多殺性巴氏桿菌的研究，對兔巴氏桿菌的控制以及促進(jìn)養(yǎng)兔業(yè)的發(fā)展至關(guān)重要。本實(shí)驗(yàn)通過對兔巴氏桿菌病病原進(jìn)行分離鑒定，并結(jié)合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和藥敏實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步了解兔巴氏桿菌及其生理特性，希望能夠?yàn)橥冒褪蠗U菌疾病的診斷和治療提供一些參考。

1 材料與方法

1.1 材料

普通營養(yǎng)瓊脂、牛肉膏、蛋白胨、藥敏紙片等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 病原分離培養(yǎng)

取病料接種接種于鮮血培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h后觀察，挑取直徑1～2mm、透明、光滑、濕潤的疑似菌落接種于TSA平板上純化，然后挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色，觀察結(jié)果。

1.2.2 生化實(shí)驗(yàn)

對已經(jīng)純化細(xì)菌進(jìn)行糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，硫化氫實(shí)驗(yàn)，枸櫞酸鹽實(shí)驗(yàn)，觀察結(jié)果。

1.2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

已經(jīng)純化好的菌接種于普通肉湯培養(yǎng)基上，控制溫度在37℃培養(yǎng)24h。將實(shí)驗(yàn)所用健康小鼠分為2組，每組5只，進(jìn)行腹腔注射。第一組接種菌液0.2ml，第2組接種營養(yǎng)肉湯0.2ml，為對照組。將注射后的小白鼠隔離飼養(yǎng)，觀察其發(fā)病及死亡情況。小白鼠死亡后立即進(jìn)行剖解，采脾臟、肝臟等部位病料在鮮血培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，鏡檢觀察其是否為所接種的菌。

1.2.4 藥敏實(shí)驗(yàn)

將分離菌純培養(yǎng)物分別均勻地涂抹在營養(yǎng)瓊脂平板之上，等培養(yǎng)基表面略干以后再用無菌鑷子夾取藥敏紙片貼在瓊脂培養(yǎng)基表面，每一平板可貼7片紙片。然后翻轉(zhuǎn)置于37℃溫箱里培養(yǎng)24h，最后取出平板觀察藥敏試紙周圍有無抑菌環(huán)出現(xiàn)并測量抑菌環(huán)直徑。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 分離培養(yǎng)結(jié)果

在鮮血瓊脂平板上培養(yǎng)24h后，生長良好，平板上可見光滑濕潤，圓形隆起，淺灰色透明，直徑1～2mm的菌落，染色鏡檢可見革蘭氏染色呈陰性，兩端鈍圓無芽孢桿菌。

2.2 生化實(shí)驗(yàn)

葡萄糖，阿拉伯糖，半乳糖，甘露醇，果糖，蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不能發(fā)酵乳糖，鼠李糖，肌醇，麥芽糖。硫化氫實(shí)驗(yàn)呈陽性，枸櫞酸鹽實(shí)驗(yàn)呈陰性。該生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合巴氏桿菌生化特性。

2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

12h后實(shí)驗(yàn)組小鼠出現(xiàn)被毛凌亂，精神沉郁，食欲不振，呼吸困難，對照組小鼠無明顯變化，24h后實(shí)驗(yàn)組小鼠陸續(xù)死亡，解剖后可見淋巴結(jié)，肝臟腫大，心臟有出血，然后挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色，在油鏡下觀察到，兩端鈍圓的短桿菌或球桿菌，單個(gè)存在，無芽胞，革蘭氏染色為陰性。

2.4 藥敏實(shí)驗(yàn)

參考杭州微生物試劑有限公司紙片法藥敏實(shí)驗(yàn)抑菌環(huán)直徑判斷標(biāo)準(zhǔn)。由附表可以得知，該分離病原菌對強(qiáng)力霉素，羧芐西林中度敏感，對四環(huán)素，卡那霉素，先鋒霉素Ⅵ，萬古霉素，苯唑西林，氧氟沙星，新霉素，多西環(huán)素，奧尼妙林高度敏感對慶大霉素耐藥。

附表 分離菌的藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論分析

經(jīng)過對病料的檢查結(jié)果初步診斷，該病的病原菌為巴氏桿菌，由生化實(shí)驗(yàn)鑒定可確診病原菌為巴氏桿菌。

通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，該分離菌有較強(qiáng)的致病性，且小鼠的死亡率達(dá)100%，所以在防治過程中，除了及時(shí)預(yù)防，還要盡量輔助治療以減少損失，藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，分離病原菌對強(qiáng)力霉素，羧芐西林中度敏感，對慶大霉素耐藥，余下藥物高度敏感。由于巴氏桿菌會(huì)出現(xiàn)耐藥性，因此我們在進(jìn)行防治時(shí)需要注意更換藥物，或進(jìn)行聯(lián)合用藥，以避免出現(xiàn)抗藥菌株，導(dǎo)致防治效果不理想。

巴氏桿菌是多種動(dòng)物的重要病原菌，兔子一般是9周齡至6月齡易感，感染后常引起大批發(fā)病和死亡。比起治療，該病的防治更為最重要，飼養(yǎng)中兔病的發(fā)生與環(huán)境有很大關(guān)系，大多數(shù)病都是飼養(yǎng)環(huán)境太差造成的，所以要加強(qiáng)科學(xué)的飼養(yǎng)管理，搞好衛(wèi)生，提高兔子本身抵抗力，如果養(yǎng)兔場一旦發(fā)病應(yīng)立即進(jìn)行隔離，治療，消毒等工作，盡量不要讓該病繼續(xù)擴(kuò)散[3]。總而言之，做好日常的飼養(yǎng)管理和防疫接種，保證兔的營養(yǎng)和維持圈舍的清潔衛(wèi)生是預(yù)防本病發(fā)生的關(guān)鍵。

[1]蘇雄.兔巴氏桿菌的分離與鑒定[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2008,15(8)：21-22.

[2]郭永剛,陳益,侯春斌.一例兔巴氏桿菌病的診斷[J].河南畜牧獸醫(yī)（綜合版）,2013,28(11)：38-39.

[3]秦翠麗.豫西地區(qū)兔巴氏桿菌病病原特性與PCR檢測技術(shù)研究[D].南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2008,26(7)：124-126.