郭海燕+程國虎+李擁軍

摘要：長江三角洲白山羊是國內(nèi)外唯一以生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)筆料毛為特征的肉、皮、毛兼用型山羊品種，其所生產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)筆料毛是制作高檔毛筆的獨特原料，由于其獨特的產(chǎn)毛性能，又有筆料毛山羊之稱。利用冷凍切片技術來比較生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部及背部皮膚毛囊的結構，旨在尋找2種性狀毛囊結構的區(qū)別。結果表明，優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部及背部皮膚毛囊結構無差異，但2種筆料毛型個體頸脊部初級毛囊密度顯著低于優(yōu)質(zhì)型個體背部初級毛囊密度。

關鍵詞：長江三角洲；白山羊；冷凍切片技術；筆料毛；毛囊結構；毛囊密度

中圖分類號： S827.1文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2017）14-0140-03

長江三角洲白山羊（別稱海門山羊）是我國唯一以生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)筆料毛為特征的肉、皮、毛兼用的山羊品種，其所產(chǎn)的筆料毛具有毛色潔白、挺直有峰、富有彈性等特點，是制湖筆的優(yōu)良原料。在生產(chǎn)加工中通常把筆料毛分為3類23個品種。其中，一類毛為低檔毛，主要有上爪峰、粗爪峰、中短峰、提短峰、揀南峰等；二類毛為中檔毛，主要有腳爪峰、細長峰、黃尖峰、白黃尖等；三類毛為高檔毛（即優(yōu)質(zhì)筆料毛），主要有細光峰、粗光峰、透爪峰、長蓋峰等，其中以三類毛里的細光峰最為名貴[1]。長江三角洲白山羊所生產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)筆料毛是三類毛，其與一類毛、二類毛的主要區(qū)別是髓質(zhì)的分布，一類毛、二類毛髓質(zhì)分布于整個毛干，而三類毛毛干上段透明或呈點狀髓，中段髓質(zhì)少，下段充滿髓質(zhì)[2]。

所有哺乳動物的毛發(fā)都是由毛囊產(chǎn)生的，因此毛囊在毛纖維的生長發(fā)育中起決定性作用。毛纖維的生長發(fā)育依賴毛球中毛母質(zhì)細胞的增殖與分化，而毛母質(zhì)細胞的增殖與分化受控于毛乳頭[3]。毛干位于毛囊的中央，暴露在皮膚外的為毛發(fā)，在皮膚內(nèi)的為毛根。毛根由外向內(nèi)又分為真皮鞘（dermal sheath）、外根鞘（ORS）、內(nèi)根鞘（IRS）。內(nèi)根鞘決定毛干的性狀，它在外根鞘內(nèi)部向上增殖移動，支撐生長的纖維，到了皮脂腺層，內(nèi)根鞘細胞退化成碎片，最后消失，釋放出毛纖維[4]。筆料毛的生產(chǎn)具有季節(jié)性，這可能與毛囊的生長周期有關[5]，毛囊生長周期包括生長期（anagen）、退行期（catagen）和休止期（telogen）[6]，細胞因子在毛囊生長周期的調(diào)控中起重要作用。近年來，有人證明此調(diào)節(jié)主要來自毛囊干細胞，干細胞有一定的生活周期，隨毛囊進入退行期后，其分裂終止[7]。在針對濟寧青山羊、遼寧絨山羊、新疆絨山羊、內(nèi)蒙古絨山羊等毛纖維性狀研究過程中，研究者利用切片技術對各種山羊皮膚毛囊進行觀察研究[8-12]。而在對長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀的研究中，目前尚未有研究者對其優(yōu)質(zhì)筆料毛和非優(yōu)質(zhì)筆料毛著生部位皮膚毛囊結構進行觀察。

本試驗采用冷凍切片技術對優(yōu)質(zhì)筆料毛和非優(yōu)質(zhì)筆料毛著生部位皮膚毛囊進行觀察研究，探究長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛著生部位的皮膚毛囊與其他部位皮膚毛囊是否存在差異，為研究長江三角洲白山羊優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀的形成機理提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1試驗樣品的準備

本試驗所用長江三角洲白山羊，購自江蘇省海門市國營海門山羊種羊場。隨機選擇6～8月齡的優(yōu)質(zhì)與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型公羔各5只，刮毛后局部麻醉處理，在優(yōu)質(zhì)筆料毛型公羔的頸脊部、背部及非優(yōu)質(zhì)筆料毛型公羔的頸脊部分別割取2 cm2左右的皮膚樣品，共15塊皮膚樣品，放于4%甲醛中。24 h后換新的甲醛，4 ℃保存。

1.1.2儀器與設備

冰凍切片機[Leica CM1950，購自徠卡顯微系統(tǒng)（上海）貿(mào)易有限公司]、萬能視頻成像裝置（LY-WN-HP CCD，購自成都勵揚精密機電有限公司）、倒置顯微鏡[Leica DMIL-RF1，購自徠卡顯微系統(tǒng)（上海）貿(mào)易有限公司]。

1.1.3主要試劑和耗材

甲醛、液氮、無水乙醇、蘇木素（Beyotime）、鹽酸、伊紅、二甲苯、中性樹脂和OCT包埋劑。手術刀、鑷子、載玻片、蓋玻片、樣品托。

1.2試驗方法

1.2.1冷凍切片的制作

首先修整皮膚塊：如需做橫切，根據(jù)毛囊的生長方向，用手術刀將皮膚塊修整成長方體狀；如需做縱切，把皮膚塊毛囊生長面修整出來。然后制作冷凍切片及對切片進行蘇木精-伊紅染色（簡稱HE染色），具體步驟參見肖彥增的《制作優(yōu)良冷凍切片的方法》[13]。

1.2.2切片的觀察和拍照

把染色后的樣品放在顯微鏡下進行觀察，挑選合適的視野，使用ScopePhoto（×64）軟件在4倍物鏡下拍照，每組皮膚樣品選取20個視野。

1.2.3初級毛囊密度的計算

分別對3種類型橫切切片20個視野中初級毛囊進行計數(shù)，根據(jù)標準尺計算視野實際面積，進而求出3種類型各個視野中初級毛囊的密度。利用Excel計算各組數(shù)據(jù)的平均數(shù)、標準差和差異性。

2結果與分析

2.1皮膚毛囊縱切切片的觀察

通過觀察3種類型皮膚毛囊的縱切面，發(fā)現(xiàn)優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部、背部與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部皮膚毛囊結構無差異（圖1）。

2.2皮膚毛囊橫切切片的觀察

觀察3種類型皮膚的橫切面可知，3種類型的毛囊群基本相似（圖2）。

2.3初級毛囊密度計算

根據(jù)標準尺計算出視野實際面積，為6.4 mm2，視野中3種類型的初級毛囊個數(shù)除以實際面積得到初級毛囊密度，3種類型的初級毛囊密度以及差異性如表1所示。

3討論

縱切切片圖結果顯示，優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部、背部與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部皮膚毛囊結構無差異。3種類型毛纖維的毛根部均有髓質(zhì)層，而且髓質(zhì)層勻均分布，這與黃永宏等所描述的長江三角洲白山羊三大類毛纖維的組織學結構[2]相吻合。

橫切切片圖結果顯示，長江三角洲白山羊的毛囊是成群分布的，毛囊群分布勻均，毛囊群界限明顯，每個毛囊群由 2～3個初級毛囊和10～15個次級毛囊組成。一些研究者研究發(fā)現(xiàn)，多數(shù)山羊毛囊的分布以三毛囊群（每個毛囊群由3個[CM（25]初級毛囊和若干次級毛囊構成）為主[14-16]。本研究結果顯示，長江三角洲白山羊毛囊的分布也以三毛囊群為主。比較3種類型皮膚的初級毛囊密度，優(yōu)質(zhì)與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部初級毛囊密度差異不顯著（P>0.05），2種筆料毛型個體頸脊部與背部的初級毛囊密度差異顯著（P<0.05）（表1），其原因可能是在山羊不同皮膚部位，初級毛囊密度不相同，此結果與優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀關聯(lián)性不大。

優(yōu)質(zhì)筆料毛與非優(yōu)質(zhì)筆料毛相比，最重要的區(qū)別是毛干上部的髓質(zhì)層呈點狀分布或無髓質(zhì)層。筆者認為，若想要進一步通過對比毛囊來探究優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀的成因，應利用電鏡技術對優(yōu)質(zhì)筆料毛型與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體皮膚毛囊進行超微結構的觀察，這樣有可能獲得毛囊結構差異性信息，從而對優(yōu)質(zhì)筆料毛性狀形成的機理加以佐證。

4結論

優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體與非優(yōu)質(zhì)筆料毛型個體頸脊部及背部皮膚毛囊結構無差異，但2種筆料毛型個體頸脊部初級毛囊密度均顯著低于優(yōu)質(zhì)型個體背部初級毛囊的密度。

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