梁海琦

自身免疫疾病診斷中抗ENA譜檢測的臨床價(jià)值

梁海琦

（贛州市立醫(yī)院，江西 贛州 341000）

目的 通過對(duì)自身免疫性疾病患者診斷中的抗ENA譜的檢測以及測定結(jié)果的分析，探討其在自身免疫性疾病診斷及療效判斷中的臨床價(jià)值。方法 對(duì)80例已確診為自身免疫性疾病患者的臨床資料進(jìn)行回顧性分析，選擇40例健康者對(duì)比分析，抗ENA多肽抗體檢測采用免疫印跡法（IBT），由德國歐蒙實(shí)驗(yàn)免疫制品有限公司提供。結(jié)果 抗ENA譜陽性率具有單項(xiàng)自身的陽性抗體，陽性結(jié)果均在2種或2種以上。結(jié)論 抗ENA譜的檢測具有操作簡便、不需特殊設(shè)備等多種優(yōu)點(diǎn)，并且可以同時(shí)識(shí)別和過篩10種自身抗體，可有效的提高對(duì)自身免疫性疾病的診斷準(zhǔn)確率，臨床意義顯著。

自身免疫疾??；抗ENA譜檢測；臨床價(jià)值

自身免疫性疾病指抗體或具有免疫功能的細(xì)胞作用于自身機(jī)體的正常結(jié)構(gòu)成分，導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)器質(zhì)性及功能性障礙。主要以多個(gè)臟器系統(tǒng)損傷，屬于風(fēng)濕類結(jié)締組織病。臨床上需要及時(shí)準(zhǔn)確的檢測提取性核抗原多肽抗體譜，可自身免疫性疾病的診療觀察增加了極為重要的依據(jù)。許多自身免疫性疾病在臨床中難以診斷，不能在早期被發(fā)現(xiàn)，給病患帶來巨大折磨[1-2]。國內(nèi)外已有許多報(bào)道，為了明確自身抗體在病患血清中的分布和表達(dá)狀況，抗ENA譜的檢測，在自身免疫疾病診斷中有著非常重要的應(yīng)用價(jià)值及意義。

1 資料與方法

1.1 研究資料 在2015年8月～2016年8月所在科室的80例自身免疫病患者作為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)選取40例健康體檢者作為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組中所有患者均符合國內(nèi)國際各類有關(guān)風(fēng)濕病診斷標(biāo)準(zhǔn)。

實(shí)驗(yàn)組，男35例，女45例，患者年齡15～69歲，平均年齡（39.9±2.6）歲。其中，25例患者為系統(tǒng)性紅斑狼瘡，17例患者為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，12例患者為多發(fā)性肌炎/皮肌炎，彌漫性3例患者為硬皮病，15例患者為混合型結(jié)締組織病，8例患者為干燥綜合征。對(duì)照組，男13例，女27例，患者年齡16～69歲，平均年齡（41.2±2.5）歲。兩組研究對(duì)象的基本資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集 次日清晨，采集所有研究對(duì)象的非抗凝靜脈血2～3 mL，離心機(jī)以2 500 r/min離心15 min進(jìn)行分離血清。若因?yàn)闀r(shí)間原因不能對(duì)患者的標(biāo)本進(jìn)行及時(shí)的檢測，需要在4℃的溫度下進(jìn)行保存，標(biāo)本的存放時(shí)期不得超過48 h。

1.3 檢測方法 ENA測定主要通過利用歐蒙印跡法，將緩沖液稀釋為1∶101倍；溫育，使得已稀釋的樣本和膜條發(fā)生有一定的抗原反應(yīng)，呈現(xiàn)陽性特異性IgG抗體、IgA、IgM和相對(duì)應(yīng)的抗原進(jìn)行結(jié)合，檢測已結(jié)合的抗體；加酶標(biāo)抗人IgG需要二次溫育，最終加入原底物液發(fā)生顏色反應(yīng)。所有的試劑均是由德國歐蒙實(shí)驗(yàn)免疫制品有限公司提供的，所有的實(shí)驗(yàn)操作步驟均需要嚴(yán)格的按照說明書進(jìn)行操作，最終記錄檢查的結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本實(shí)驗(yàn)采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用“x±s”表示，相關(guān)性的分析將采用Pearson法行直線相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組ENA多肽抗體譜檢測對(duì)比統(tǒng)計(jì) 自身免疫病SLE患者中抗ENA譜、抗Sm、抗U1RNP、抗SSA、抗SSB等ENA多肽抗體的檢出率分別為64.0%、44.0%、28.0%、20.0%、8.0%；自身免疫病RA患者中抗ENA譜、抗SSA、抗SSB、抗RA-54等ENA多肽抗體的檢出率分別為41.2%、23.5%、5.9%、28.4%；自身免疫病PM/DM患者中抗ENA譜、抗SSA、抗SSB、抗JO-1、抗DM-53等ENA多肽抗體的檢出率分別為25.0%、16.7%、8.3%、33.3%、8.3%；自身免疫病PSS患者中抗ENA譜、抗SSA、抗SSB、抗Scl-70等ENA多肽抗體的檢出率分別為66.7%、33.3%、33.3%、66.7%；自身免疫病MCTD患者中抗ENA譜、抗U1RNP、抗SSA、抗SSB、抗D’E等ENA多肽抗體的檢出率分別為86.7%、73.3%、13.3%、6.7%、40.0%；自身免疫病SS患者中抗ENA譜、抗SSA、抗SSB等ENA多肽抗體的檢出率分別為62.5%、75.0%、25.0%。見表1。

表1 各類自身免疫病患者和健康人ENA多肽抗體檢測結(jié)果（n）

2.2 各類自身免疫病抗ENA單項(xiàng)或多項(xiàng)陽性自身抗體分布 自身免疫病存在多種自身抗體，SLE檢出率為28.0%、RA檢出率為11.8%、PM/DM檢出率為25.0%、PSS檢出率為33.3%、MCTD檢出率為40.0%、SS檢出率為37.5%。見表2。

表2 兩組患者治療結(jié)果和并發(fā)癥統(tǒng)計(jì)

3 討論

抗可溶性抗原作為一種非組蛋白的核蛋白，屬于酸性蛋白抗原，臨床上指出該項(xiàng)物質(zhì)是可提取核抗原的全稱。該類物質(zhì)可依靠細(xì)胞發(fā)揮不同的功能，主要存在于人體的細(xì)胞核內(nèi)，是多種小分子RNA和對(duì)應(yīng)的特定蛋白質(zhì)相互結(jié)合的，作為核糖蛋白顆粒，分子中未見大量的DNA。該項(xiàng)物質(zhì)的主要功能是參與細(xì)胞內(nèi)的DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、蛋白的翻譯及合成。使得不同類型的AID分泌出不同類型的抗ENA抗體，因此，在抗ENA譜檢測對(duì)自身免疫性疾病展開系統(tǒng)的診斷，可對(duì)患者病情治療具有十分重要的指導(dǎo)意義[3]。有關(guān)研究表明，臨床醫(yī)生對(duì)測定結(jié)果的解釋需要綜合考慮兩個(gè)問題，主要有抗體效價(jià)和抗體型別。若抗ENA譜檢測中出現(xiàn)不同類型的單項(xiàng)U1RNP抗體、SSA抗體及SSB抗體陽性，顯示該項(xiàng)物質(zhì)的臨床意義較為廣泛，SSA抗體、SSB抗體陽性大多數(shù)存在于人體的RA、PM/DM、SS、SLE、MCTD及PSS中，U1RNP抗體陽性中可出現(xiàn)RA、MCTD、SLE、PSS、SS患者，同時(shí)可結(jié)合多種自身抗體開展系統(tǒng)的分析，進(jìn)一步的得出正確診斷結(jié)果，在臨床治療中發(fā)揮積極作用。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡可牽涉多種系統(tǒng)及器官的自身免疫性疾病，該病的發(fā)病機(jī)制主要是患者出現(xiàn)免疫復(fù)合物，使得患者的血清中存在多種自身抗體，在活躍期患者的補(bǔ)體會(huì)不斷的下降。因此，血清中自身抗體的檢測在臨床診斷具有十分重要的地位。診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡的臨床重要指標(biāo)是抗ENA譜檢測，系統(tǒng)性紅斑狼瘡的血清鑒定性抗體即為抗Sm抗體，可對(duì)早期、不典型的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者進(jìn)行有效的診斷，同時(shí)給予患者對(duì)應(yīng)的治療，經(jīng)過治療緩解后對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的回顧性診斷也具有十分重要的指導(dǎo)意義。上述研究中，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者抗Sm抗體陽性率是44.0%。系統(tǒng)性硬皮病是一種結(jié)締組織病，主要指的是以皮膚以及各系統(tǒng)膠原纖維發(fā)生進(jìn)行性硬化，抗Scl-70抗體的分子量作為100 KD的DNA拓樸異構(gòu)酶I的降解產(chǎn)物，對(duì)于皮膚彌漫型多發(fā)性系統(tǒng)性硬化癥患者來說，血清中含有大量的抗Scl-70抗體。系統(tǒng)性硬皮病患者的陽性率雖然不高，但是，該病患者的特異性高。干燥綜合征是涉及與外分泌腺體的慢性炎癥性的自身免疫病。在干燥綜合征的患者血清中較為常見的有抗SS-A、抗SS-B抗體，兩種抗體見于SLE、PSS等多種結(jié)締組織病，但是，患者的陽性率低于干燥綜合征。抗SS-B抗體的特異性高，但是敏感性低。若檢測出患者體內(nèi)具有抗SS-B抗體常常會(huì)伴有抗SS-A抗體。二者聯(lián)合檢測可幫助患者提高干燥綜合征的檢出率。MCTD是混合性結(jié)締組織病，血清學(xué)特征十分明顯，不論在疾病活動(dòng)期或緩解期，均可測得高滴度的抗可提取性核抗原抗體[4-5]。

免疫印跡法作為膜載體酶免疫技術(shù)中的一種方法，主要特點(diǎn)的臨床特點(diǎn)為固相載體吸附具有抗原的硝酸纖維膜，該項(xiàng)方法的原理主要是將小牛或兔胸腔提取的ENA抗原，通過SDS-聚丙烯酰胺進(jìn)行凝膠電泳，根據(jù)分子量大小主要將成區(qū)帶進(jìn)行系統(tǒng)的分離，按照對(duì)應(yīng)分子量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可積極的確定抗原區(qū)帶的分子量。將各抗原區(qū)的轉(zhuǎn)印轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，使得抗原吸附載體膜制成。之后將即將檢測的血清加入已切成細(xì)條的硝酸纖維膜中，將檢血清中存在的抗ENA抗體和硝酸纖維膜上的對(duì)應(yīng)的抗原區(qū)帶展開系統(tǒng)的結(jié)合。加入酶標(biāo)記抗人IgG抗體后可形成抗原-抗體-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，最終加入酶底物，出現(xiàn)顯色反應(yīng)，可根據(jù)當(dāng)時(shí)的抗原區(qū)帶的分子量對(duì)各特異性抗抗可溶性抗原抗體和各區(qū)帶進(jìn)行有效的辯讀。同時(shí)對(duì)單一抗原成分特異性自身抗體展開積極的判斷。

上述研究顯示，目前，臨床上對(duì)研究的6種自身免疫性疾病的發(fā)病原因至今未作出明確的解釋，臨床表現(xiàn)不一，不容易對(duì)其進(jìn)行早期的診斷。另外，免疫印跡法檢測抗可溶性抗原自身抗體采用的血量少、重復(fù)性好，在同一時(shí)間內(nèi)可對(duì)多種自身抗體的識(shí)別和過篩進(jìn)行完成，在自身免疫性疾病的診斷和治療中發(fā)揮積極的臨床意義?？箍扇苄钥乖贵w的檢測在多種自身免疫病中的陽性率較高，作為自身免疫病的診斷、治療及預(yù)后可為臨床提供積極的診斷依據(jù)。

[1]焦立民，高穎.分析自身免疫性肝病和病毒性肝炎患者血清中抗肝抗體檢測的臨床價(jià)值[J].臨床醫(yī)學(xué)研究與實(shí)踐，2016，5（19）：41-42.

[2]Yamasaki Y,Yamada H,Ohkubo M,et al.Lengterm survival and associated risk factors in patients with adultonset idiopathic inflammatoiy myopathies and amyopathic dermatomyositis:experience in a single institute in Japan[J].J Rheumatol,2011,3(8):1636-1643.

[3]Basiri Z,Gholyaf M,F^idnia M,et al.The prevalence of anticardiolipin antibody in patients with systemic lupus erythematosus and its association with clinical manifestations[J]. Acta Med Iran,2013,51(1):35-40.

[4]高仕萍，楊文勇，資云菊，等.抗核抗體和抗核抗體譜聯(lián)合檢測在自身免疫性疾病診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，1（28）：78-79.

[5]李蘇亮，葉蕓.多種自身抗體聯(lián)合檢測對(duì)自身免疫性疾病臨床診斷的意義[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志，2008，25（5）：539-541.

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.28.062