邱芳，朱穎，鄒麗萍

實(shí)施去除白細(xì)胞血液成分輸注后血小板抗體與血小板輸注療效的探討

邱芳，朱穎，鄒麗萍

（贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院輸血科，江西 贛州 341000）

目的 探討反復(fù)輸注去除白細(xì)胞血液成分和單采血小板后，HLA-Ⅰ抗體和HPA抗體產(chǎn)生的概率及其與血小板輸注療效的關(guān)系。方法 選擇有反復(fù)輸注去除白細(xì)胞血液成分和單采血小板史，現(xiàn)因血小板計(jì)數(shù)低而需要輸單采血小板的患者，采集其血樣，應(yīng)用ELISA方法對(duì)進(jìn)行HLA-Ⅰ抗體和HPA抗體的檢測(cè)，然后給患者選擇保存期在3 d內(nèi)的單采血小板進(jìn)行輸注，輸血后1 h再次采集血樣應(yīng)用血細(xì)胞分析儀進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)。 結(jié)果 輸注去除白細(xì)胞血液成分次數(shù)＜10次、10～40次、＞40次的患者HLA-Ⅰ抗體陽(yáng)性率分別為7.5%、20.0%、30.0%。輸注去除白細(xì)胞單采血小板次數(shù)＜3次、3～8次、＞8次的患者HPA抗體陽(yáng)性率分別為0%、8%、16%。HLA-Ⅰ抗體和HPA抗體陽(yáng)性的患者的血小板輸注無(wú)效率分別60.9%、100.0%，顯著高于抗體陰性組的輸注無(wú)效率1.5%。結(jié)論 多次反復(fù)輸血可導(dǎo)致血小板抗體的產(chǎn)生，且與反復(fù)輸血次數(shù)成正比。HLA-Ⅰ抗體和HPA抗體陽(yáng)性能增加血小板無(wú)效輸注的概率，因此輸血前進(jìn)行血小板抗體篩查及配合性輸注能有效保障血小板的輸注效果及安全性。

HLA-Ⅰ抗體；HPA抗體；血小板輸注無(wú)效

血小板是血液的三大有形成分之一，在止血、傷口愈合、血栓形成、炎癥反應(yīng)、血脂代謝及器官移植排斥等生理和病理過(guò)程中具有重要作用[1-2]。血小板輸注是預(yù)防和治療出血的重要手段。隨著血小板在臨床治療中的廣泛應(yīng)用，其輸注過(guò)程中所發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題也日益突出，特別是血小板無(wú)效輸注。近幾年，我市所有血液成分均進(jìn)行了血液儲(chǔ)存前白細(xì)胞的濾除，血小板的輸注也以單采血小板為主，我們對(duì)反復(fù)輸注去除白細(xì)胞血液成分和單采血小板后患者血小板抗體的產(chǎn)生情況及血小板輸注療效進(jìn)行了探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年3月～2015年8月間在本院住院的195名需要輸注血小板的曾有輸血史無(wú)妊娠史且無(wú)感染、發(fā)熱、脾腫大等影響血小板輸注的非免疫性因素的患者列為研究對(duì)象。

1.2 分組 200名研究對(duì)象分為A、B兩組，A組120名，為曾輸注過(guò)去除白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞和/或去白細(xì)胞單采血小板血液成分，每袋血液的輸注為1次輸血；B組75名，每個(gè)治療量去白細(xì)胞單采血小板的輸注為1次輸血。

1.3 主要儀器和試劑式 美國(guó)BioTek ELx800通用酶標(biāo)儀（美國(guó)）；Sysmex XE2100全自動(dòng)五分類血球分析儀（日本）。主要試劑：美國(guó)GTI血小板抗體檢測(cè)試劑盒GTI-PAK2LE（批號(hào)：3002220）。

1.4 標(biāo)本采集與檢測(cè) 所有研究對(duì)象均于輸注血小板前采集血樣，用EDTA-2K抗凝真空采血管采集5 mL血樣，A組檢測(cè)血小板HLA-Ⅰ抗體；B組檢測(cè)HPA抗體。按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.5 輸注保存期在3 d內(nèi)的去白細(xì)胞單采血小板1個(gè)治療量，1 h后采集血樣進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)，并計(jì)算CCI值和PPR值。

1.6 結(jié)果判讀 OD值≤0.35為陰性，若1 h的CCI＜7.5或PPR＜30%判斷為血小板無(wú)效輸注。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計(jì)數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血小板抗體檢測(cè)結(jié)果 A、B兩組結(jié)果顯示血小板抗體的產(chǎn)生與反復(fù)輸血密切相關(guān)，隨著反復(fù)輸血次的增加，抗體陽(yáng)性率也隨之增高。見(jiàn)表1、表2。

表1 A組HLA-Ⅰ抗體陽(yáng)性率與反復(fù)輸血次數(shù)相關(guān)性Table 1 Correlation between positive rate of HLA-I antibody and repeated transfusion times in groupA

表2 B組HPA抗體陽(yáng)性率與反復(fù)輸血次數(shù)相關(guān)性Table 2 Correlation between HPAantibody positive rate and repeated transfusion times in group B

2.2 血小板輸注無(wú)效與HLA-Ⅰ抗體和HPA抗體的關(guān)系HLA-Ⅰ抗體陽(yáng)性組和HPA抗體陽(yáng)性組的1h CCI值和PPR值均顯著低于陰性組，組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3、表4。23例HLA-Ⅰ抗體陽(yáng)性組中致血小板輸注無(wú)效15例，血小板輸注無(wú)效率為60.9%，6例HPA抗體陽(yáng)性組致血小板輸注無(wú)效6例，因陽(yáng)性例數(shù)太少，沒(méi)有進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。166例陰性組致血小板輸注無(wú)效2例，血小板輸注無(wú)效率為1.5%。見(jiàn)表5。

表3 HLA-Ⅰ抗體陽(yáng)性組與陰性組血小板輸注后1 hCCI、PPR值的比較（n=23）Table 3 Comparison of 1hCCI and PPR values after platelet transfusion in HLA-I antibody positive group and negative group(n=23)

表4 HPA抗體陽(yáng)性組與陰性組血小板輸注后1 hCCI、PPR值的比較（n=6）Table 4 Comparison of 1hCCI and PPR values after platelet transfusion in HPAantibody positive group and negative group(n=6)

表5 HLA-Ⅰ抗體和HPA抗體對(duì)血小板輸注療效的影響比較（n=195）Table 5 Effects of HLA-I antibody and HPAantibody on platelet transfusion efficacy(n=195)

3 討論

隨著輸血醫(yī)學(xué)的發(fā)展，為減少輸血不良反應(yīng)的發(fā)生，各種去除白細(xì)胞血液成分及單采血小板已廣泛應(yīng)用于臨床。國(guó)標(biāo)要求：去除白細(xì)胞后，每400 mL全血白細(xì)胞數(shù)≤5.0×106個(gè)，我們分析了應(yīng)用去除白細(xì)胞血液成分和/或去除白細(xì)胞單采血小板成分后血小板抗體產(chǎn)生情況及血小板輸注的療效評(píng)價(jià)。

本次研究中，我們對(duì)在院收治的需要進(jìn)行單采血小板輸注治療且無(wú)影響血小板輸注的非免疫性因素的195名患者進(jìn)行了觀察分析，結(jié)果提示反復(fù)多次血液成分的輸注，極易產(chǎn)生血小板抗體，減少不必要的血液成分的輸注可減少輸入性抗原的接觸和刺激，從而降低抗體產(chǎn)生的概率。研究還發(fā)現(xiàn)，120名患者中HLA-Ⅰ抗體的陽(yáng)性患者23名，陽(yáng)性率19.1%，要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于以往文獻(xiàn)報(bào)道的長(zhǎng)期輸血患者中45%～70%產(chǎn)生了HLA-Ⅰ抗體[3]，從2009年起，本院患者所用血液均為去除白細(xì)胞血液成分，說(shuō)明去除白細(xì)胞血液成分的應(yīng)用極大程度地降低了HLA同種異體免疫的發(fā)生。

迄今為止，已有多篇文獻(xiàn)[4-12]報(bào)道了不同國(guó)家、不同地區(qū)、不同人群的HPA基因檢測(cè)頻率存在差異。不同人種及人群中HPA抗原的分布頻率和獲得HPA免疫機(jī)會(huì)呈正相關(guān)性，產(chǎn)生抗體的機(jī)會(huì)也會(huì)增高[13-14]。75名患者中抗HPA抗體陽(yáng)性率僅8%，低于HLA-Ⅰ類抗體的19.1%，可能因?yàn)?，我們的研究?duì)象和單采血小板絕大多數(shù)來(lái)自于同一地區(qū)，而同一區(qū)域或同一種族之間存在著高頻率的HPA等位基因，在受血者與供血者不相合的可能性相對(duì)較小，故產(chǎn)生的概率也相應(yīng)較小[15]。因此，表現(xiàn)出HPA抗體的低陽(yáng)性率。研究還顯示，血小板抗體陽(yáng)性是導(dǎo)致血小板輸注無(wú)效的主要原因。

上述結(jié)果表明要降低血小板無(wú)效輸注的發(fā)生必須減少血液輸注的次數(shù)，嚴(yán)格把握輸注指征，盡量減少不必要的血小板輸注。臨床上對(duì)于血小板輸注適應(yīng)癥，通常是以血小板計(jì)數(shù)作為判斷指標(biāo)，而血小板計(jì)數(shù)波動(dòng)較大，一些血液病患者長(zhǎng)期處于低血小板計(jì)數(shù)狀態(tài)，且血小板計(jì)數(shù)低于20×109/L時(shí)，許多常規(guī)的血球計(jì)數(shù)儀就不夠精確了，這對(duì)嚴(yán)格把握輸血適應(yīng)癥帶來(lái)了極大的困擾，英國(guó)血小板輸注指南中推薦血小板計(jì)數(shù)同時(shí)輔以血栓彈力圖檢測(cè)等。醫(yī)療機(jī)構(gòu)首先應(yīng)嚴(yán)格把握輸血指針，必要時(shí)可輔以血栓彈力圖檢測(cè)來(lái)綜合判斷。其次，應(yīng)盡量選擇去除白細(xì)胞血液成分的輸注。最后，醫(yī)療機(jī)構(gòu)還應(yīng)對(duì)血小板輸注患者實(shí)行常規(guī)血小板抗體篩檢，并盡可能地選擇配合性血小板輸注。如此，可有效減少血小板無(wú)效輸注的發(fā)生，避免寶貴血液資源的無(wú)謂浪費(fèi)。

[1]SempleJW,ItalianoJEJr,FreedmanJ.Platelets and the immune continuum[J].Nat Rev Immunol,2011,11(4):264-274.

[2]李波.不同劑量丙種球蛋白聯(lián)合激素治療小兒特發(fā)性血小板減少性紫癜療效對(duì)比分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2017，23（6）：109-111.

[3]Laundy GJ,Bradley BA,Rees BM,et al.Incidence and specificity of HLA antibodies in multitransfused patientswith acquired aplastic anemia[J].Transfusion,2004,44(6):814-825.

[4]Jones DC,Bunce M,Fuggle SV,et al.Human platelet alloantigens(HPAs):PCR-SSP genotyping of a UK population for 15HPA alleles[J]. Eur J Immunogenet,2003,30(6):415-419.

[5]PavkovicM,PetlichkovskiA,StrezovaA,etal.Gene frequencies of human platelet antigens in the Macedonianpopulation[J].Tissueantigens,2006,67(3):241-246.

[6]Nie YM,Zhou HJ,Fu YS,et al.The allele frequencies of HPA 1-16 determined by PCR-SSP in Chinese Cantonesedonors[J].TransfusMed,2010,20(6):376-382.

[7]劉建軍，李志強(qiáng).上海地區(qū)漢族人群人類血小板抗原基因的多態(tài)性研究[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2008，10（3）：209-214.

[8]李執(zhí)如，王乃紅，楊群身，等.HPA抗原基因頻率和不配合率[J].中國(guó)輸血雜志，2006，19（3）：236-237.

[9]林岳興，朱玲玲，徐建忠.浙江漢族人群血小板抗原1-16多態(tài)性調(diào)查[J].中國(guó)輸血雜志，2007，20（6）：487-490.

[10]李雙，王赤林，謝毓斌，等.長(zhǎng)沙地區(qū)固定血小板獻(xiàn)血者血小板抗原1-5、15系統(tǒng)基因多態(tài)性及分析[J].中國(guó)輸血雜志，2006，19（30）：198-200.

[11]申衛(wèi)東，李麗蘭，廖燕，等.多重PCR-SSP技術(shù)應(yīng)用于HPA-1～17bw基因分型研究和廣西壯族人群HPA多態(tài)性的分布[J].中國(guó)輸血雜志，2014，27（1）：8-13.

[12]廖燕，申衛(wèi)東，李麗蘭，等.南寧地區(qū)人群血小板抗原HPA1-16bw基因分布頻率的研究[J].中國(guó)輸血雜志，2010，23（6）：424.

[13]Brouk H,Halle L,Bertrand G,et al.Human platelet antigen allele frequencies in different Algerian populations[J]. Tissue aAntigens, 2010,75(6):673-678.

[14]Rioux-Masse B,MeCullough J.The role of the pretrnsfusion platelet count in platelet trfractoriness[J].Transfusion,2011,51(10):2258-2259.

[15]張偉東，肖露露，葉欣，等.隨機(jī)血小板輸注無(wú)效患者的HLA抗體分析[J].廣東醫(yī)學(xué)，2004，25（7）：799-800.

Effect of platelet antibody and platelet transfusion after leukocyte component transfusion

Qiu Fang,Zhu Ying,Zou Li-ping
(The firstAffiliated Hospital of Gannan Medical University,Ganzhou,Jiangxi,341000,China)

Objective To explore the probability of HLA-Ι antibodies and HPA antibodies and its relationship with the curative effect of platelets transfusion induced by repeatedly transfusions of leuko-reduced blood components and apheresis platelets.Methods The patients who have repeated transfusion to leuko-reduced blood components and apheresis platelets are selected for the transfusion of apheresis platelets due to the low platelet count,collecting the blood sample,using ELISA method for HLA-Ι antibodies resistance and resistance to HPA antibodies detection.The patients were given a single platelet infusion collected in 3 days,blood samples were collected 1 hour after transfusion and blood cell analyzer was used to platelet count then.Results Transfusion of Leuko-reduced blood components less than 10,10-40 times,more than 40 times in patients with platelet antibodies positive rates were 0%,7.5%,20.0%,30.0%.Transfusion of Leuko-reduced apheresis platelets less than 3,3-8 times,more than 8 times in patients with platelet antibodies positive rates were 0%,8%,16%.The platelets transfusion efficiency in patients with HLA-Ι and HPA antibodies were 60.9%and 100.0%,significantly higher than that of negative group infusion invalid rate(1.5%).Conclusion Repeated blood transfusion can lead to the production of platelet antibodies,and is proportional to the number of repeated blood transfusion.HLA-I antibody and HPA antibody positive rates can increase the probability of ineffective transfusion of platelets.Therefore,platelet antibodies screening before blood transfusion can effectively protect the effect and safety of platelet transfusion.

HLA-Ι antibodies;Anti-HPAantibodies;Platelets transfusion refractoriness

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.28.007