童艷

黑龍江省濟(jì)仁藥業(yè)有限公司 150000

HPLC法測定丹燈通腦片中葛根素的含量

童艷

黑龍江省濟(jì)仁藥業(yè)有限公司 150000

目的：通過使用HPLC這一測定方式對丹燈通腦片之中所含有的葛根素進(jìn)行分析。方法：使用Gemini類型色譜柱，并使用乙腈物質(zhì)，百分之一的磷酸溶液來作為梯度洗脫物質(zhì)，同時(shí)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)的過程之中保持整體流速為一摩爾每分鐘，設(shè)定相應(yīng)的檢測波長度為三百一十八納米，在實(shí)驗(yàn)過程之中維持實(shí)驗(yàn)柱的溫度為三十五攝氏度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：葛根素物質(zhì)以及阿魏酸物質(zhì)在二十一毫克每毫升到二百一十毫克每毫升的濃度數(shù)值范圍內(nèi)其數(shù)據(jù)分析表封面面積和濃度數(shù)值表現(xiàn)出了良好的線性關(guān)系。結(jié)論：這種物質(zhì)分析、檢測的方式在實(shí)驗(yàn)之中表現(xiàn)出了實(shí)驗(yàn)方式簡便、整體實(shí)驗(yàn)速度快、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性高、試驗(yàn)再現(xiàn)性良好的特點(diǎn)，所以這一方法也就成為了分析丹燈通腦藥物之中相應(yīng)的葛根素物質(zhì)的了優(yōu)秀技術(shù)。

丹燈通腦片；HPLC法；葛根素

由于目前社會(huì)之中生活、工作方面的節(jié)奏較快，并且一部分在工作之中超負(fù)荷進(jìn)行，所以也就容易導(dǎo)致身體健康受到不同程度的影響，甚至在長時(shí)間的影響之下會(huì)出現(xiàn)的冠心病等類型的疾病，使得人們的正常生活受到較大影響，甚至在危險(xiǎn)的情況下還會(huì)造成的人們生命安全方面的危險(xiǎn)。為了有效的治療這種疾病，目前出現(xiàn)了丹燈通腦片這種藥物，這種藥物是中醫(yī)治療理念和現(xiàn)代只要科技相結(jié)合的產(chǎn)物，這一藥物的原藥方在我國出現(xiàn)的時(shí)間較早，在和現(xiàn)代化的只要技術(shù)相互融合之后實(shí)現(xiàn)了批量化的生產(chǎn)，通過這一藥物的使用能有效的治療患者自身出現(xiàn)的腦中風(fēng)疾病、冠心病癥狀、心絞痛癥狀等癥狀，能改善顱腦內(nèi)血液循環(huán)，增加動(dòng)脈血氧含量。增加腦和心臟冠狀動(dòng)脈的血流量，增強(qiáng)心肌對缺血、缺氧的耐受性；增強(qiáng)血液內(nèi)溶纖酶的活性，改善血液粘度；抑制血小板集聚和凝血過程；擴(kuò)張周圍血管，改善毛細(xì)血管通透性，增加局部血流量，改善人體微循環(huán)，在這一藥方之中含有較多的藥材，而其中最為主要的就是葛根藥物以及川芎藥物，從現(xiàn)代化制藥理論的基礎(chǔ)上對這些藥物進(jìn)行分析就會(huì)發(fā)現(xiàn)這其中雖為重要的元素就葛根素物質(zhì)以及阿魏酸物質(zhì)，同時(shí)在進(jìn)行丹燈通腦片這一藥物檢驗(yàn)的過程中也主要是對這兩種進(jìn)行檢驗(yàn)。在本次實(shí)驗(yàn)的過程之中主要是對藥物之中的葛根素進(jìn)行相應(yīng)的檢驗(yàn)。

1.實(shí)驗(yàn)儀器以及藥物

島津LC－20AT型高效液相色譜儀，BS-124S電子分析天平;Ⅺ對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110752-200511，供含量測定用)，Ⅻ對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110773-200612，供含量測定用);丹燈通腦軟膠囊 3批(云南某藥廠，批號:C1306031，C1306005，C1306052);乙腈(色譜純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，磷酸(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，二次重蒸水(自制)。

2.實(shí)驗(yàn)方法以及相應(yīng)結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)條件

使用Gemini類型色譜柱，并使用乙腈物質(zhì)，百分之一的磷酸溶液來作為梯度洗脫物質(zhì)，同時(shí)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)的過程之中保持整體流速為一摩爾每分鐘，設(shè)定相應(yīng)的檢測波長度為三百一十八納米，在實(shí)驗(yàn)過程之中維持實(shí)驗(yàn)柱的溫度為三十五攝氏度。

2.2 對照作用溶液標(biāo)準(zhǔn)

量取葛根素相應(yīng)的對照物質(zhì)其質(zhì)量二十一毫克左右，在經(jīng)過精確稱量之后再使用一百毫升的容量瓶進(jìn)行定容操作，方便后續(xù)的實(shí)驗(yàn)使用。?、鼘φ掌芳s13.0mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取 20mL置上述溶液，用甲醇稀釋至刻度，即得混合對照品儲(chǔ)備液(1)，葛根素和Ⅻ的濃度分別為 210.0mg·L－1和26.0mg·L－1;取葛根素對照品約70.0mg，精密稱定，置50mL量瓶中用甲醇溶解，取; 阿魏酸對照品約7.0mg，精密稱定，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再從中精密吸取25mL，置上溶液，用甲醇稀釋至刻度，即得混合對照品儲(chǔ)備液(2)，葛根素和; 阿魏酸的濃度分別為1.4g·L－1和0.14g·L－1。2.3供試品溶液的制備取膠囊內(nèi)容物約 0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇溶液 100mL，密塞，稱定重量，加熱回流 30min，冷卻至室溫，稱定重量，用70%甲醇溶液補(bǔ)足減失重量，搖勻，靜置，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備按處方比例分別稱取除川芎以外的其余藥味和除葛根以外的其余藥味，按照制備工藝制成相應(yīng)的陰性樣品，并按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法操作，作為陰性對照溶液。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察

精密稱取葛根素對照品，加30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.5、1、2、3、4、5ml至10ml量瓶中，加30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10μl，注入液相色譜儀，按以上方法測定峰面積，并以峰面積的積分值為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，葛根素回歸方程為:y=4×106X－1.34×105(r=0.9999)，葛根素在 0.1696μg～1.6960 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5.2 精密度試驗(yàn)

取“線性關(guān)系考察”項(xiàng)下的對照品儲(chǔ)備液(1)6.0mL置10mL量瓶的對照品溶液20μL，在上述色譜條件下重復(fù)測定6次，記錄峰面積。Ⅺ和Ⅻ峰面積的RSD分別為1.7%與1.9%

2.5.3 專屬性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液、“精密度試驗(yàn)”項(xiàng)下的對照品溶液和陰性對照溶液各 20μL，注入液相色譜儀，結(jié)果陰性對照液在與對照品峰相應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對照無干擾。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取批號:C1306031供試品，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法得到供試品溶液，分別于0、2、4、8、12和24h進(jìn)樣，按照上述色譜條件進(jìn)樣分析。Ⅺ和Ⅻ峰面積的RSD分別為1.7%和1.8%。

2.5.5 重復(fù)性試驗(yàn)稱取同一批號的樣品6份，按“供試品溶液制備”項(xiàng)下方法操作，平行制備供試品溶液。依次進(jìn)樣，以色譜峰面積按外標(biāo)法計(jì)算。Ⅺ平均含量為81.46mg·g－1，RSD為1.4%;Ⅻ平均含量為7.217mg·g－1，RSD為1.2%。

2.5.6 加樣回收率試驗(yàn)稱取 0.1g已知含量的供試品(批號:C1306031)9份，精密稱定，按低、中、高濃度分別精密加入混合對照品儲(chǔ)備液(2)，每一濃度3份，照“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法操作，所得供試品溶液并進(jìn)樣分析，

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)首先采用等度洗脫比較了甲醇—水、甲醇—磷酸水溶液、乙腈—水、乙腈—磷酸水溶液等不同系統(tǒng)和比例的流動(dòng)相，結(jié)果表明，Ⅺ和Ⅻ與相鄰雜質(zhì)峰分離效果不理想，經(jīng)過不斷地探索，最終采用乙腈和0.1%磷酸水溶液梯度洗脫，兩組份與相鄰雜質(zhì)峰分離效果理想。

3.2 提取條件的選擇實(shí)驗(yàn)中曾選用甲醇、70%甲醇、30%甲醇和30%乙醇超聲提取。結(jié)果表明甲醇和70%甲醇的提取效率相當(dāng)且最高。又比較了超聲和加熱回流兩種提取方法的提取效果，結(jié)果表明加熱回流比超聲提取效果好，于是最終選擇70%甲醇加熱回流，提取完全。通過建立丹燈通腦片的含量測定指標(biāo)，對丹燈通腦的質(zhì)量進(jìn)行控制，使產(chǎn)品的質(zhì)量均一性生產(chǎn)各批次之間的差異性有了有效控制，對臨床用藥和產(chǎn)品治療法作用的一致性，有了可靠的保證。

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