劉俊丹，曾詩梅，雷金梅，陳文杰，李紫元，梁偉燊，唐陸平，何永明

(佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院獸醫(yī)系，廣東佛山 528000)

芩黃清肺散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

劉俊丹△，曾詩梅△，雷金梅，陳文杰，李紫元，梁偉燊，唐陸平*，何永明*

(佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院獸醫(yī)系，廣東佛山 528000)

為建立芩黃清肺散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，采用顯微鑒定和薄層色譜法(TLC)對方劑中黃芩、大黃、枇杷葉和甘草進(jìn)行定性鑒別。采用高效液相色譜法(HPLC)對黃芩苷進(jìn)行含量測定，色譜柱為依利特C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)；流速1 mL/min；檢測波長280 nm；柱溫40℃；進(jìn)樣量20 μL。顯微鑒定結(jié)果表明，韌皮纖維單個(gè)散在或數(shù)個(gè)成束，梭形，長60 μm～250 μm，壁厚，孔溝細(xì)(黃芩)；草酸鈣族晶，直徑60 μm～ 140 μm(大黃)；非腺毛為單細(xì)胞，常彎曲(枇杷葉)；木纖維成束，周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶鞘纖維(甘草)。TLC結(jié)果表明，供試品中，在與對照品或?qū)φ账幉纳V相應(yīng)的位置上顯示相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。HPLC結(jié)果顯示，黃芩苷在0.241 μg ～1.208 μg(r=0.999 9)具有良好的線性范圍，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性的RSD<3.0%，加樣回收率為100.49%(RSD=1.71%，n=9)。該研究所建立標(biāo)準(zhǔn)可用于芩黃清肺散的質(zhì)量控制。

芩黃清肺散；顯微鑒別；薄層色譜；高效液相色譜；黃芩苷；含量

芩黃清肺散是課題組自創(chuàng)的特色純中藥制劑，由黃芩、大黃、枇杷葉和甘草等4味中藥組成，具有清肺熱、止咳喘的功效[1]，用于雞傳染性喉氣管炎的治療。為了控制藥品質(zhì)量，本試驗(yàn)采用顯微鑒別和TLC法對方劑中的4味藥材進(jìn)行定性鑒別；用HPLC法對方劑中君藥黃芩的主要成分黃芩苷含量進(jìn)行定量檢測，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器設(shè)備 1×71型倒置熒光顯微鏡，日本Olympus公司產(chǎn)品；DD70薄層掃描色譜儀，德國DESAGA公司；島津LC-20 A型系列高效液相色譜儀(SPD-M20A紫外檢測器，LABSOL DB CH MLCPOA色譜工作站)；恒溫水浴鍋(H.H.S21.6)，廣州紅云電器二廠生產(chǎn)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(DHG-9075A)，上海一恒科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；超聲波清洗機(jī)(HN1012)，中國華南超聲設(shè)備廠產(chǎn)品；點(diǎn)樣毛細(xì)管，華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠產(chǎn)品；電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(BSA2245-CW)，北京有限公司產(chǎn)品；100 mm×200 mm雙槽玻璃層析缸(P-1)，上海信誼儀器廠有限公司產(chǎn)品；薄層層析硅膠G和硅膠H板(201509012)，青島海洋化工有限公司產(chǎn)品。

1.1.2 藥品與試劑 黃芩對照藥材(批號：120955-201309)；黃芩苷(批號：110715-201318)；大黃對照藥材(批號：121249-201304)；大黃酸(批號：110757-200206)；枇杷葉對照藥材(批號：121261-201303)；熊果酸(批號：110742-201421)；甘草對照藥材(批號：120904-201519)，以上藥品均購自中國食品藥品檢定研究院。芩黃清肺散，佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院獸醫(yī)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供；各缺少上述藥物之一的4種陰性對照樣品，佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院獸醫(yī)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供；磷酸、甲醇為色譜純(Merk)，乙醇、甲酸、冰醋酸、正己烷、甲苯、丙酮、乙酸乙酯、丁酮、硫酸、鹽酸、氨水、三氯化鐵、水合氯醛等均為分析純，水為超純水。

1.2 方法

1.2.1 顯微鑒別 取過0.15 mm篩的樣品適量，用水合氯醛(水合氯醛50 g，加水15 mL和甘油10 mL溶解)進(jìn)行透化，根據(jù)各味中藥的顯微特征在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.2.2 薄層色譜鑒別

1.2.2.1 黃芩的薄層色譜鑒別 參照文獻(xiàn)[2]進(jìn)行。取芩黃清肺散2 g，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至10 mL，濾過，取濾液作為供試品溶液。分別取缺黃芩的芩黃清肺散2 g和黃芩對照藥材1 g，同法制成陰性對照品溶液和對照藥材溶液。再取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)。分別吸取上述對照藥材溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各3 μL以及黃芩苷對照品溶液2 μL，分別點(diǎn)在同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑，置展開缸中預(yù)飽和30 min，展開，取出，晾干，噴以20 g/L三氯化鐵乙醇溶液。

1.2.2.2 大黃薄層色譜鑒別 取芩黃清肺散0.4 g，加20 mL甲醇，浸1 h后濾過，取10 mL蒸干，殘?jiān)铀?0 mL，再加1 mL鹽酸，水浴加熱后加乙醚萃取2次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL使溶解，作為供試品溶液。分別取0.4 g缺大黃的芩黃清肺散和0.2 g大黃對照藥材，同法制成陰性對照品溶液和對照藥材溶液。再取大黃酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液[2-3]。按照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)。吸取上述4種溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶3∶0.2)為展開劑，置展缸中預(yù)飽和30 min，展開，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。

1.2.2.3 枇杷葉薄層色譜鑒別 參照文獻(xiàn)[2]進(jìn)行。取芩黃清肺散2 g，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。分別取缺枇杷葉的芩黃清肺散和枇杷葉對照藥材2 g，同法制成陰性對照品溶液和對照藥材溶液。再取熊果酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)。吸取上述4種溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(5∶1)為展開劑，展開，晾干，噴以100 ml/L硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

1.2.2.4 甘草薄層色譜鑒別 取本品10 g，加700 mL/L乙醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液加鹽酸3 mL，搖勻，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL分次溶解，用乙醚振搖提取3次，每次20 mL，合并乙醚提取液，再用水洗滌3次～5次，每次20 mL，棄去水液，乙醚液加氨水10 mL，萃取2次，收集氨水加鹽酸10 mL后用乙醚萃取2次，每次10 mL，后水洗3次～4次，收集乙醚液，蒸干，加甲醇定容到2 mL，作為供試品溶液。同法制備甘草陰性對照溶液。取甘草對照藥材粉末1 g，加700 mL/L乙醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液加濃鹽酸2 mL，搖勻，按供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液4 mL。按照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取上述對照藥材溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各1 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(4∶1∶0.5)上層為展開劑[4]，展開，取出，晾干，噴以100 mL/L硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光和紫外光燈(365 nm)下檢視。

1.2.3 含量測定 參照文獻(xiàn)[2,5-7]進(jìn)行。

1.2.3.1 色譜條件 色譜柱：色譜柱為依利特C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：甲醇-水-磷(47∶53∶0.2)；檢測波長為280 nm；流速1 mL/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量20 μL；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 500。

1.2.3.2 對照品溶液制備 黃芩苷對照品約3 mg，精密稱定，于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。搖勻，超聲處理至黃芩苷溶解，制成每1 mL含約60 μg左右的母液，即得。使用前用0.45 μm的濾膜過濾。

1.2.3.3 供試品溶液制備 取芩黃清肺散約0.6 g，精密稱定，加700 mL/L乙醇40 mL，加熱回流3 h，放冷，用濾紙過濾，濾液置100 mL容量瓶中，用少量700 mL/L乙醇分次洗滌，洗液濾入同一瓶中，加700 mL/L乙醇定容，搖勻。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜過濾到EP管中，備用。

1.2.3.4 陰性對照品溶液的制備 取自制的陰性對照品按1.2.3.3供試品的溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

1.2.3.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄其色譜圖。

1.2.3.6 線性范圍考察 使用前精密吸取1.2.3.2中的母液2、4、6、8、10 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，得到黃芩苷的濃度分別為12、24、36、48、60 μg/mL。吸取20 μL，精密吸取同一份對照品溶液20 μL,在1.2.3.1條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，求出黃芩苷的RSD 。

1.2.3.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一份對照品溶液20 μL,在1.2.3.1條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，求出黃芩苷的RSD。

1.2.3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試品溶液，按1.2.3.3方法制備，依上述色譜條件分別在0、4、8、12、24 h進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖，測定峰面積，求出RSD。

1.2.3.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一供試品平行稱取6份，每份約0.6 g，精密稱取。分別按1.2.3.3的方法進(jìn)行制樣，按1.2.3.1方法測定，按外標(biāo)法計(jì)算含量，求得黃芩苷含量的RSD值。

1.2.3.10 回收率試驗(yàn) 稱取同一批已知含量的芩黃清肺散約0.15 g，精密稱定，以當(dāng)前樣品含量的0.8、1.0、1.2倍，分別精密加入黃芩苷，按1.2.3.3的方法制備溶液，進(jìn)樣時(shí)每個(gè)提取液進(jìn)樣測定2次，根據(jù)公式計(jì)算回收率：回收率%=(C-A)/B，式中C為加入對照品后的測得值；A為樣品中所含被測成分量；B為加入對照品量。

2 結(jié)果

2.1 顯微鑒定結(jié)果

根據(jù)黃芩韌皮纖維單個(gè)散在或數(shù)個(gè)成束，梭形，長60 μm～250 μm，壁厚，孔溝細(xì)；大黃草酸鈣族晶，直徑60 μm～140 μm；枇杷葉單細(xì)胞非腺毛，常彎曲；甘草纖維成束，壁厚，周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶鞘纖維[8](圖1)。

a.黃芩，韌皮纖維; b.大黃，草酸鈣簇晶，直徑60 μm～140 μm; c.枇杷葉，單細(xì)胞非腺毛；d.甘草，草酸鈣方晶

a.RadixScutellariae，phoem fibers；b.RadixetRhizomaRhei,clusters of calcium oxalate,60 μm～140 μm in diameter；c.FoliumEriobotryae,non-gland hairs,unicellular；d.RadixetRhizomaglycyrrhizae,prisms of calcium oxalate

圖1芩黃清肺散的顯微鑒別結(jié)果

Fig.1 Microscopic identification results of Qinhuang qingfei powder

2.2 薄層色譜鑒別結(jié)果

供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性對照無干擾(圖2)。

2.3 HPLC檢測結(jié)果

2.3.1 系統(tǒng)試驗(yàn)性 在1.2.3.1色譜條件下，理論塔板數(shù)黃芩苷峰為3 575(藥典為不低于2 500)，黃芩苷的分離度為1.8(藥度典要求大于1.5)，陰性對照在相應(yīng)的位置無干擾峰(圖3、圖4和圖5)。

2.3.2 線性考察 以對照品濃度作為橫坐標(biāo)(x)，峰面積作縱坐標(biāo)(y)，得出線性回歸方程：y=60 732x-267 829，r=0.999 9。結(jié)果表明，黃芩苷在0.241 μg ～1.208 μg范圍內(nèi)，具有很好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性 精密度試驗(yàn)中黃芩苷的RSD為1.78%，穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD為0.63%及重復(fù)性試驗(yàn)中黃芩苷含量的RSD值為0.99%，三者RSD值均小于3%，符合規(guī)定。

2.3.4 加樣回收率 按1.2.3.1色譜條件測定，結(jié)果平均加樣回收率為100.49%，RSD為1.71%(表1)。

3 討論

a.黃芩;b.大黃;c.枇杷葉;1.標(biāo)準(zhǔn)品；2.對照藥材；3～5.供試品；6.陰性對照；d.甘草：1 .對照藥材；2～4.供試品；5.陰性對照

a.RadixScutellariae; b.RadixetRhizomaRhei; c.FoliumEriobotryae;1.Standard；2.Control herbs；3-5.Samples；6.Negative control；d.RadixetRhizomaglycyrrhizae; 1.Control herbs；2-4 Samples；5.Negative control

圖2芩黃清肺散薄層色譜圖

Fig.2 Thin-layer chromatography of Qinhuang Qingfei powder

對藥材進(jìn)行定性檢查有顯微鑒別和薄層色譜法，近年來高效薄層色譜發(fā)展迅速，具有低成本、高效、靈敏度和分辨率更高的特點(diǎn)，在甘草成分的檢測上有應(yīng)用[9-10]。本試驗(yàn)用一般薄層色譜法也能檢測出方劑中的各類藥材，方法簡便、重復(fù)性強(qiáng)，可用于芩黃清肺散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制。按照藥典中各味藥的顯微特征進(jìn)行黃芩、大黃、枇杷葉和甘草的顯微鑒定，效果良好(圖1)。按2015年版獸藥典中黃芩和枇杷葉的薄層色譜法進(jìn)行鑒別，黃芩、枇杷葉效果較好。大黃的TLC鑒別試驗(yàn)中，展開劑嘗試了氯仿-乙酸乙酯(6∶1)[11]、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)[12]、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)[13]。此外，

還用二次展開方式，第1次用石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸(9∶2∶0.5)展開，展距9 cm后再以氯仿-甲醇-冰醋酸(8∶2∶0.2)[14]為展開劑，結(jié)果都不理想，對照品仍在原點(diǎn)。最后以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(8∶3∶0.2)為展開劑[15]，用硅膠H板進(jìn)行試驗(yàn)結(jié)果良好。

甘草用正丁醇-冰醋酸-水(6∶1∶2)為展開劑，GF254板進(jìn)行試驗(yàn)[16]，效果不好。改用獸藥典方法，用乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)展開后在日光下觀察結(jié)果，斑點(diǎn)分離度不高，無法判斷結(jié)果，而在365 nm時(shí)陰性對照有干擾。此外，按照新近發(fā)布的桑仁清肺口服液的方法進(jìn)行試驗(yàn)，用GF254板，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開劑，展開結(jié)果與三氯甲烷-水-甲醇(13∶6∶2)、正丁醇-水-冰醋酸(8∶2∶1)類似[17-18]，即陰性和供試品相應(yīng)的位置有相應(yīng)的斑點(diǎn)。

因此，根據(jù)方劑中甘草含量太低，而其他雜質(zhì)有干擾，結(jié)合組方的特征和甘草的性質(zhì)嘗試用鹽酸加熱回流后先用乙醚得到低極性的物質(zhì)，除去色素，再讓氨水與甘草次酸和其他成分結(jié)合，后加鹽酸得到甘草次酸，然后再用乙醚萃取得到更純的甘草次酸和甘草其他成分。結(jié)果顯示與對照藥材相比，供試品相應(yīng)的位置出現(xiàn)斑點(diǎn)，陰性對照無干擾。方法獨(dú)特，分離度好。

芩黃清肺散中黃芩為君藥，黃芩總黃酮具有較好的降血脂作用[19]，而黃芩苷是黃芩中的一種黃酮，其為抗炎的主要藥效物質(zhì)，且在方中所占比例大，含量高，以其作為含量測定的指標(biāo)成分，可以準(zhǔn)確的反映本方劑的質(zhì)量，因此，選擇黃芩苷作為定量分析的成分[20]。但是試驗(yàn)沒有對成品進(jìn)行不同批次的檢測，因此不能制定該方劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法。芩黃清肺散用加熱回流下的方法提取，分離度好，方法簡便準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可有效的控制本品質(zhì)量。

圖3 黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖

圖4 芩黃清肺散HPLC色譜圖

圖5 黃芩的陰性對照品HPLC色譜圖

表1 回收率測試結(jié)果

致謝：特別感謝廣州中醫(yī)藥大學(xué)博士生導(dǎo)師張軍教授在甘草薄層鑒別中給予我們的指導(dǎo)和支持！

[1] 何永明，張浩吉,楊 鴻，等.“黃芩、大黃”合劑對人工誘發(fā)傳染性喉氣管炎患雞血液SOD、MDA水平的影響[J].中國家禽,2003,25(17):9-11.

[2] 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典：二部[S].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2015：444-445,31,293.

[3] Tian Y G,Qin S M,Ding L.Thin layer chromatography identification for rhubarb and phellodendri amurensis cortex in shuang-bai cataplasm and study of skin irritation assay[J].J Biol Regul Homeost Agent,2015,29(2):479-484.

[4] 尚曉娜，宋平順，楊 錫，等.HPLC梯度波長法同時(shí)測定甘肅省不同產(chǎn)地甘草中6種成分含量及主成分分析研究[J].中國現(xiàn)代中藥,2012,14(9):27-31.

[5] 白鳳芝,孫 錄,劉玉梅,等.高效液相色譜法測定銀花泌炎靈片中野黃芩苷含量[J].中國藥業(yè),2016,25(3):45-46.

[6] 李靈娟,付文力,李登云,等.清瘟解毒口服液黃芩苷的HPLC法測定[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2016(23):270-273.

[7] Li B Q,Chen J,Li J J,et al.High‐performance liquid chromatography with photodiode array detection and chemometrics method for the analysis of multiple components in the traditional Chinese medicine Shuanghuanglian oral liquid[J].J Separa Sci,2015,38(24):4187-4195.

[8] 中華人民共和國藥典.中藥材顯微鑒別彩色圖鑒[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，2009.

[9] Alam P,Alajmi M F,Siddiqui N A,et al.Determination of bioactive marker glycyrrhizin inGlycyrrhizaglabraroot and commercial formulation by validated HPTLC-densitometric method[J].海岸生命醫(yī)學(xué)雜志：英文版,2014,2(11):882-887.

[10] Liu X,Li Q,Lv C,et al.Combination of the advantages of chromatographic methods based on active components for the quality evaluation of licorice[J].J Separa Sci,2015,38(24):4180-4186.

[11] 胡紅艷，李 艷，黃秋明.復(fù)方茵陳合劑中梔子和大黃的薄層色譜鑒別[J].中國藥業(yè),2010,19(17):26.

[12] 岑艷華，蔡麗云,陳 華.活血祛瘀片中三七、大黃的薄層色譜鑒別[J].臨床醫(yī)學(xué)工程,2011,18(6):915-916.

[13] 陳勇軍,黃云祥,王杏娥.茵黃利膽顆粒中大黃、茵陳的薄層色譜鑒別[J].中醫(yī)學(xué)報(bào),2014(11):1635-1636.

[14] 葉 強(qiáng)，余蔥蔥.大黃全成分薄層色譜條件研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2013,9(3):15-16.

[15] 張 潔.全蝎散中大黃、冰片的薄層色譜鑒別研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2013,9(1):30-31.

[16] 賴克道，劉 元，文志云，等.薄層色譜法定性鑒別小柴胡顆粒中的柴胡、甘草[J].廣西醫(yī)學(xué),2009,31(6):886-887.

[17] 許紅輝，李曉燕，張永鋒，等.連花清瘟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥業(yè),2013,22(18):60-62.

[18] 祁 紅，劉傳統(tǒng).膽炎顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立[J].中國藥師,2013,16(3):462-464.

[19] 雷燕妮.黃芩總黃酮對高血脂大鼠的降血脂作用研究[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2014,35(7):64-68.

[20] 王厚偉，高德民，田景振.高效液相色譜法測定復(fù)方黃芩消炎片中黃芩苷的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2007,13(4):13-15.

StudyonQualityStandardofQinhuangQingfeiPowder

LIU Jun-dan,ZENG Shi-mei,LEI Jin-mei,CHEN Wen-jie,LI Zi-yuan,LIANG Wei-shen,TANG Lu-ping,HE Yong-ming

(DepartmentofVeterinaryMedicine,FoshanUniversity,Foshan,Guangdong,528000,China)

The objective was to establish the quality standard of Qinhuang Qingfei powder.The qualitative identification ofRadixScutellariae,RadixetRhizomaRhei,FoliumEriobotryaeandRadixetRhizomaglycyrrhizaewas conducted by microscopic identification and thin layer chromatography (TLC) in the prescription.The content of baicalin in the prescription was determined by high performance liquid chromatography (HPLC):the column was elite C18 column (250 mm×4.6 mm,5 μm) with the mobile phase of methanol-water-phosphoric acid (47∶53∶0.2) at a flow rate of 1 mL/min;the detection wavelength was 280 nm;column temperature was 40℃;and the injection volume was 20 μL.The results of microscopic identification were showed below.Phoem fibers scattered singly or in bundles,fusiform,60 μm-250 μm long,thick-walled,with fine pit-canals (RadixScutellariae).Clusters of calcium oxalate,60 μm-140 μm in diameter (RadixetRhizomaRhei).Non-gland hairs,large,unicellular and curved (FoliumEriobotryae).Xylem fibers in bundles,which were surrounded by parenchymatous cells containing prisms of calcium oxalate and formed crystal sheath-fibres (RadixetRhizomaglycyrrhizae).TLC results showed that there were the same color spots on the chromatography corresponding positions between test samples and reference substance or reference drug,and no interference in negatiive control.The linear range of the carlibation was 0.241 μg-1.208 μg (r=0.999 9).The RSDs of precision,stability and reproducibility tests were lower than 3.0%.The recovery rate was 100.49%(RSD=1.71%，n=9).The established standard can be used for the quality control of Qinhuang Qingfei powder.

Qinhuang Qingfei powder;microscopic identification; TLC; HPLC; baicalin;content

2017-02-08

十二五農(nóng)村領(lǐng)域國家科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAD34B00);農(nóng)業(yè)部行業(yè)科技專項(xiàng)項(xiàng)目(201003060-09);廣東省省級科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015A040404048);佛山市科技計(jì)劃項(xiàng)目(佛財(cái)工〔2015〕 143 );廣東省教育廳高?？蒲许?xiàng)目(2016KTSCX149);廣東大學(xué)生科技創(chuàng)新培育專項(xiàng)資金立項(xiàng)項(xiàng)目;佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院研究生自由探索基金項(xiàng)目

劉俊丹(1991-)，女，廣西玉林人，碩士研究生，主要從事中獸藥研制和開發(fā)工作?！魍蓉暙I(xiàn)作者。 *

S853.75

:A

:1007-5038(2017)09-0061-06