王麗紅 任東紅 禇菲菲 張志玲

(鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院消化科，河南 鄭州 450000)

PPAR-γ和survivin基因表達(dá)與直腸癌進(jìn)展的關(guān)系

王麗紅 任東紅 禇菲菲 張志玲

(鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院消化科，河南 鄭州 450000)

目的探討過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體(PPAR)-γ和存活素(survivin)基因表達(dá)與直腸癌進(jìn)展的關(guān)系。方法選取該院自2011年5月至2015年5月臨床以及病理資料均齊全并經(jīng)手術(shù)切除方式獲得的直腸癌患者大體石蠟標(biāo)本85例，取同期手術(shù)切除的腺瘤組織82例以及同期接受痔上黏膜環(huán)切手術(shù)治療后的良性病變組織80例。采用免疫組織化學(xué)法分析PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)，分析其與患者病理特征的關(guān)系，采用Logistic回歸分析PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)的相關(guān)因素。結(jié)果癌組織的PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于正常組織及腺瘤組織(P<0.05)。正常組織與腺瘤組織PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。直腸癌患者PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)與病理情況的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Dukes分級(jí)有關(guān)，而與年齡及性別無(wú)關(guān)。Logistic回歸分析法顯示，影響直腸癌患者PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)的相關(guān)因素有低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及Dukes分級(jí)為C～D級(jí)。結(jié)論P(yáng)PAR-γ和survivin在直腸癌患者組織中高表達(dá)，與直腸癌患者的疾病進(jìn)展有較大關(guān)聯(lián)。

過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體γ；存活素；直腸癌

過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體(PPAR)-γ作為過(guò)氧化物酶體自身增殖物的其中一種激活受體，對(duì)部分腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)以及細(xì)胞周期等方面的活動(dòng)存在一定影響，而存活素(survivin)是一種近期新發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制類蛋白，通常不表達(dá)于正常組織內(nèi)，卻在特定腫瘤細(xì)胞中呈廣泛性表達(dá)〔1〕。有報(bào)道指出，深入研究并掌握以上兩種基因表達(dá)對(duì)直腸癌腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用以及凋亡活動(dòng)有促進(jìn)效果，進(jìn)而提高臨床治療敏感性〔2〕。本文分析PPAR-γ和survivin的表達(dá)及二者與直腸癌進(jìn)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院自2011年5月至2015年5月臨床以及病理資料均齊全并經(jīng)手術(shù)切除方式獲得的直腸癌患者大體石蠟標(biāo)本85例，其中男44例，女41例；年齡40～82〔平均(61.51±7.92)〕歲；患者均通過(guò)具備豐富臨床經(jīng)驗(yàn)的兩位病理醫(yī)師進(jìn)行獨(dú)立診斷并復(fù)查，最終給予確診。其中含管狀腺癌60例，乳頭狀腺癌11例，黏液腺癌10例，印戒細(xì)胞癌4例；高分化30例，中分化32例，低分化23例；Dukes分級(jí)：A級(jí)21例，B級(jí)24例，C級(jí)26例，D級(jí)14例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：無(wú)轉(zhuǎn)移67例，有轉(zhuǎn)移18例。按照正常、腺瘤、高、中、低分化以及轉(zhuǎn)移癌的次序，制作出2個(gè)7×8規(guī)格點(diǎn)陣組織芯片，芯片直徑2.0 mm，片厚4 mm。同時(shí)選取同期手術(shù)切除的腺瘤組織82例，其中男42例，女40例；年齡39～81〔平均(62.53±7.31)〕歲。并選取同期接受痔上黏膜環(huán)切手術(shù)治療后的良性病變組織80例，男41例，女39例；年齡41～80〔平均(60.36±9.01)〕歲。不同組織標(biāo)本對(duì)應(yīng)患者的年齡及性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2研究方法 以鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶(SP)法進(jìn)行免疫組織化學(xué)法染色，其中試劑規(guī)格：兔抗PPAR-γ多克隆抗體以及survivin均為美國(guó)Santa cruz公司生產(chǎn)，且抗體工作濃度設(shè)置為1∶100，免疫組化檢測(cè)所用試劑盒為福州邁新公司生產(chǎn)，其具體步驟需嚴(yán)格根據(jù)說(shuō)明書(shū)操作。結(jié)果評(píng)定：PPAR-γ蛋白于細(xì)胞中定位通常為細(xì)胞核，表現(xiàn)為棕黃顆粒狀；survivin蛋白定位在細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜之上，極少數(shù)細(xì)胞核內(nèi)可見(jiàn)其弱表達(dá)，屬于散在型陽(yáng)性表達(dá)形式。借助高倍鏡觀察，隨機(jī)對(duì)5個(gè)視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，分別計(jì)算出其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及總細(xì)胞數(shù)，并計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占比例。評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞率>90%為陽(yáng)性，反之為陰性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、Logistic回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1不同組織PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率比較 癌組織PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率〔61例(71.76%)，63例(74.12%)〕明顯高于正常組織〔1例(1.25%)，2例(2.50%)〕及腺瘤組織〔5例(6.10%)，4例(4.88%)〕(P<0.05)。正常組織與腺瘤組織比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)與直腸癌患者病理情況的關(guān)系 見(jiàn)表1。直腸癌患者PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Dukes分級(jí)有關(guān)(P<0.05)，而與年齡及性別無(wú)關(guān)。

表1 PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)與直腸癌患者病理情況的關(guān)系〔n(%)〕

2.3影響直腸癌患者PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)的Logistic回歸分析 影響直腸癌患者PPAR-γ及survivin蛋白表達(dá)的相關(guān)因素有低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及Dukes分級(jí)為C～D級(jí)。見(jiàn)表2。

表2 影響直腸癌患者PPAR-γ、survivin蛋白表達(dá)的Logistic回歸分析

3 討 論

臨床治療直腸癌通常以手術(shù)方式為主，但是由于患者術(shù)后易出現(xiàn)復(fù)發(fā)現(xiàn)象，因此，醫(yī)生多于術(shù)前對(duì)患者進(jìn)行放、化療等形式治療，以期提高臨床治療效果。但臨床研究統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，即使結(jié)合其他多種治療手段進(jìn)行綜合治療，患者的復(fù)發(fā)以及轉(zhuǎn)移等情況仍未得到有效改善〔3〕。近期研究表明，直腸癌整個(gè)發(fā)展過(guò)程中有多種蛋白以及基因的參與，其自健康組織發(fā)展為癌細(xì)胞需經(jīng)歷多個(gè)階段，且有關(guān)其發(fā)病的一項(xiàng)重要機(jī)制在于患者細(xì)胞凋亡存在調(diào)節(jié)紊亂現(xiàn)象〔4〕。找出和直腸癌發(fā)病存在重要關(guān)聯(lián)的新型標(biāo)志物，將其作為疾病治療的靶點(diǎn)，有助于臨床對(duì)直腸癌患者病情診斷以及預(yù)后效果預(yù)估等工作。有報(bào)道指出PPAR-γ在諸多腫瘤中高表達(dá)，且survivin基因不僅廣泛表達(dá)于各類腫瘤內(nèi)，且其凋亡作用最強(qiáng)〔5〕。

本研究結(jié)果符合曾錦榮等〔6〕的報(bào)道結(jié)果，提示PPAR-γ和survivin基因表達(dá)在直腸癌患者中具有更高的陽(yáng)性率，可能與直腸癌進(jìn)展存在一定聯(lián)系。原因主要可能是因?yàn)镻PAR-γ和survivin的生化作用機(jī)制發(fā)揮的調(diào)節(jié)作用而導(dǎo)致。其中PPAR-γ屬于通過(guò)配體進(jìn)行激活的一種核轉(zhuǎn)錄性因子，是核激素類受體超家族一員，具備調(diào)節(jié)脂質(zhì)以及糖等代謝作用，同時(shí)其對(duì)脂肪分化以及能量平衡等均發(fā)揮關(guān)鍵性調(diào)節(jié)功能。臨床研究發(fā)現(xiàn)，PPAR-γ可表達(dá)于人類多種腫瘤內(nèi)，可作為多種腫瘤細(xì)胞臨床病理分期和預(yù)后效果評(píng)估等工作的評(píng)定指標(biāo)〔7〕。本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)正常健康直腸組織以及腺瘤組織進(jìn)行檢測(cè)，其內(nèi)PPAR-γ蛋白均呈低表達(dá)狀態(tài)，但直腸癌患者腫瘤組織內(nèi)的PPAR-γ卻為高表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)PPAR-γ表達(dá)和直腸癌發(fā)病直接相關(guān)。而survivin是一種典型的凋亡抑制類蛋白，研究發(fā)現(xiàn)該基因在正常組織中不表達(dá)，而是選擇性單純表達(dá)于惡性腫瘤內(nèi)。目前有關(guān)survivin基因的研究結(jié)果顯示，其屬于IAP家族，能夠抑制細(xì)胞凋亡，其在人肝癌、肺癌以及結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤中均呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)〔8〕。本研究結(jié)果證實(shí)survivin基因于直腸癌發(fā)病早期激活，從而形成癌癥期的大量表達(dá)。具體來(lái)說(shuō)，survivin基因作用機(jī)制在于其能夠阻止細(xì)胞凋亡，并延伸腫瘤細(xì)胞整體生存期，進(jìn)而加大該細(xì)胞發(fā)生基因改變的概率，從而促進(jìn)直腸癌發(fā)展。由此可知，survivin基因的被激活時(shí)間為直腸癌發(fā)病初期，進(jìn)而可將survivin當(dāng)做直腸癌發(fā)病早期高效標(biāo)志物。

本研究結(jié)果還符合趙長(zhǎng)林等〔9〕的報(bào)道。隨著低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Dukes分級(jí)為C～D級(jí)的情況發(fā)生，患者的病情嚴(yán)重程度也隨之變重，這將促進(jìn)PPAR-γ及survivin蛋白的進(jìn)一步表達(dá)。同時(shí)，也可能因?yàn)橹蹦c癌患者PPAR-γ和survivin基因二者表達(dá)之間同樣存在一定關(guān)聯(lián)，預(yù)示著兩種指標(biāo)在影響直腸癌發(fā)病以及病情發(fā)展等方面可能存在一定協(xié)同作用，但具體機(jī)制目前尚未明確，仍需深入研究總結(jié)。

1Wang W，Shao Y，Tang S，etal.Peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPARγ) Pro12Ala polymorphism and colorectal cancer (CRC) risk〔J〕.Int J Clin Exp Med，2015；8(3)：4066-72.

2陳倩倩，毋永娟.結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物的研究進(jìn)展〔J〕.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2014；34(3)：422-5.

3尹 鵬，胡 君，儲(chǔ)著凌，等.替米沙坦通過(guò)上調(diào)PPAR-γ促進(jìn)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞TIMP-1表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.西部醫(yī)學(xué)，2014；26(2)：160-2.

4章向成，陳光俠，張 紅，等.尼美舒利通過(guò)PPA Rγ途徑抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2015；44(4)：446-9.

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6曾錦榮，莫碧文，王績(jī)英，等.過(guò)氧化物酶體增殖因子激活受體激動(dòng)劑對(duì)A549細(xì)胞裸鼠移植瘤Caspase-3、Survivin表達(dá)的影響〔J〕.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2013；29(10)：1418-22.

7郭建霞，張小云，趙春林，等.Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)因子與結(jié)腸癌患者預(yù)后的相關(guān)性研究〔J〕.河北醫(yī)藥，2016；38(3)：371-3.

8Kole L，Sarkar M，Deb A，etal.Pioglitazone，an anti-diabetic drug requires sustained MAPK activation for its anti-tumor activity in MCF7 breast cancer cells，independent of PPAR-γ pathway〔J〕.Pharmacol Rep，2016；68(1)：144-54.

9趙長(zhǎng)林，孫 壯，張甘露，等.直腸癌組織PI3K和Survivin及VEGF表達(dá)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)性的探討〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2012；19(1)：63-7.

〔2016-12-11修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

王麗紅(1975-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事胃腸道疾病的基礎(chǔ)與臨床研究。

R73

A

1005-9202(2017)16-3998-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.16.041