姬 霞 傅金英 周艷艷 曹俊紅 李 琳 胡俊攀

(河南省中醫(yī)院，河南 鄭州 450002)

補(bǔ)腎化痰祛瘀中藥對(duì)多囊卵巢模型大鼠胰島素樣生長因子-1及血清腫瘤壞死因子-α的影響

姬 霞 傅金英 周艷艷 曹俊紅 李 琳 胡俊攀

(河南省中醫(yī)院，河南 鄭州 450002)

目的探討補(bǔ)腎化痰祛瘀中醫(yī)方劑對(duì)多囊卵巢模型大鼠卵巢組織中胰島素樣生長因子(IGF)-1及大鼠血清中腫瘤壞死因子(TNF)-α的影響。方法使用皮下注射脫氫表雄酮(DHEA)法誘導(dǎo)多囊卵巢綜合征(PCOS)同種系雌性大鼠20只，分為模型組與中藥組各10只，另取10只正常大鼠作為正常組。中藥組大鼠給予補(bǔ)腎化痰祛瘀中藥方劑灌胃4 w，治療前后各取血一次，檢驗(yàn)全血IGF-1及血清TNF-α的水平。結(jié)果實(shí)驗(yàn)前，模型組大鼠血中的IGF-1和TNF-α水平〔(67.47±21.11)μg/ml、(1.78±0.31)ng/ml〕與中藥組〔IGF-1(64.13±13.55)μg/ml、TNF-α(1.74±0.22)ng/ml〕比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，而模型組和中藥組的大鼠血中IGF-1和TNF-α水平均明顯高于正常組〔(29.89±11.47)μg/ml〕、〔(1.03±0.27)ng/ml〕(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)后模型組大鼠血中IGF-1、TNF-α水平〔(63.16±24.24)μg/ml、(1.79±0.45)ng/ml〕明顯高于正常組〔(28.64±10.13)μg/ml、(1.09±0.33)ng/ml〕(P<0.01),試驗(yàn)后中藥組大鼠血中IGF-1、TNF-α水平〔(31.13±13.55)μg/ml、(1.14±0.62)ng/ml〕低于模型組(P<0.05),而中藥組大鼠IGF-1和TNF-α水平與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論補(bǔ)腎化痰祛瘀方劑可有效降低PCOS模型大鼠血中的IGF-1和TNF-α水平，穩(wěn)定大鼠卵巢內(nèi)分泌功能紊亂，改善大鼠生殖功能。

補(bǔ)腎化痰祛瘀；多囊卵巢綜合征；胰島素樣生長因子-1；腫瘤壞死因子-α

多囊卵巢綜合征(PCOS)是一種以長期無排卵、雄激素過多、多毛、肥胖、月經(jīng)失調(diào)等為主要特征的育齡期婦女常見的內(nèi)分泌異常綜合征〔1〕。我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)并無此癥的專有名詞，將其歸為“崩漏”“閉經(jīng)”“不孕”等范疇，認(rèn)為其根本在于腎，腎藏精，主生殖〔2〕。本實(shí)驗(yàn)擬探究補(bǔ)腎化痰祛瘀中醫(yī)方劑對(duì)PCOS模型大鼠卵巢組織中胰島素樣生長因子(IGF)-1及血清腫瘤壞死因子(TNF)-α的影響，旨在開辟治療PCOS的傳統(tǒng)中藥新思路。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物 清潔級(jí)同種系雌性大鼠30只，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(黑)2013-004，使用許可證號(hào)：SYXK(黑)2013-012。平均體重(55±15)g，實(shí)驗(yàn)前于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)飼養(yǎng)1 w以適應(yīng)環(huán)境，室溫18℃～25℃。隨機(jī)平均分為三組，每組10只，分別為正常組、模型組和中藥組。

1.2藥物及試劑

1.2.1補(bǔ)腎化痰祛瘀方劑組成 菟絲子、仙靈脾、肉蓯蓉、枸杞、黃芪、黨參、白術(shù)、茯苓、薏苡仁、厚樸、當(dāng)歸、川芎等，中藥飲片購自河南省中醫(yī)院中藥房，劑量通過人-大鼠相關(guān)計(jì)算公式換算而進(jìn)行轉(zhuǎn)換。

1.2.2試劑 脫氫表雄酮(DHEA)：北京百靈威科技有限公司；注射用大豆油(藥用級(jí))，250 ml/瓶，上海阿拉丁生化科技股份有限公司C1526031。血清TNF-α放射免疫法分析試劑盒：上海酶研生物科技有限公司EK-R31092；大鼠IGF-1酶聯(lián)免疫試劑盒：上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司201507。

1.3模型制作 參考相關(guān)文獻(xiàn)〔3〕采用皮下注射DHEA的方法，在預(yù)實(shí)驗(yàn)中成功復(fù)制出PCOS大鼠模型，即模型組和中藥組大鼠每天稱重后，給予DHEA 6 mg/100 g體重+0.2 ml注射用大豆油經(jīng)頸背部皮下注射，正常組在同一時(shí)間段注射大豆油0.2 ml/只，連續(xù)20 d。

1.4給藥方案 于第21天起(即造模結(jié)束后1 d)，實(shí)驗(yàn)大鼠接受藥物治療，正常組和中藥組的實(shí)驗(yàn)大鼠給予補(bǔ)腎化痰祛瘀中藥方劑灌胃4 w，2次/d，模型組大鼠則正常飼養(yǎng)。

1.5檢驗(yàn)指標(biāo) 治療前后各取血一次，離心分離血清后，使用放射免疫法檢測全血IGF-1及血清TNF-α的水平。

2 結(jié) 果

實(shí)驗(yàn)前，模型組大鼠血中的IGF-1和TNF-α水平〔(67.47±21.11)μg/ml、(1.78±0.31)ng/ml〕與中藥組的〔(64.13±13.55)μg/ml、(1.74±0.22)ng/ml〕比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而模型組和中藥組的大鼠血中IGF-1和TNF-α水平均明顯高于正常組〔(29.89±11.47)μg/ml、(1.03±0.27)ng/ml〕(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)后模型組大鼠血中IGF-1、TNF-α水平〔(63.16±24.24)μg/ml、(1.79±0.45)ng/ml〕明顯高于正常組〔(28.64±10.13)μg/ml、(1.09±0.33)ng/ml〕(P<0.01),試驗(yàn)后中藥組大鼠血中IGF-1、TNF-α水平〔(31.13±13.55)μg/ml、(1.14±0.62)ng/ml〕低于模型組(P<0.05),而中藥組大鼠IGF-1和TNF-α水平與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討 論

PCOS是育齡期婦女最常見疾病之一，患者的卵巢形態(tài)學(xué)改變主要表現(xiàn)為雙側(cè)卵巢增大，多個(gè)囊性卵泡被一層囊膜覆蓋著，并呈囊性和硬化改變〔4〕。近年來，大量的臨床研究表明PCOS 是由神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)和代謝系統(tǒng)機(jī)制調(diào)節(jié)失衡引起的惡性循環(huán)和多發(fā)反饋失調(diào)而引起的一系列癥狀〔5〕。

IGF-1是一種編碼基因位于12號(hào)染色體的單鏈堿性蛋白，其功能和結(jié)構(gòu)與胰島素類似，主要由肝臟分泌，具有參與促進(jìn)新陳代謝、加快細(xì)胞有絲分裂等胰島素樣生物學(xué)效應(yīng)〔6〕，IGF-1亦可由卵巢合成，促進(jìn)卵巢性激素分泌，尤其是雄性激素的分泌，調(diào)節(jié)卵泡發(fā)育，參與卵巢的正常生殖功能〔7〕。另外,IGF-1可活化細(xì)胞色素裂解酶，并協(xié)同胰島素抑制肝臟合成，從另一條路徑升高雄性激素〔8，9〕。而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明IGF-1水平升高與PCOS具有一定的聯(lián)系。其機(jī)制為胰島素和IGF-1的過度作用,使卵巢對(duì)黃體生成素(LH)的敏感性增加,增加卵泡募集數(shù),導(dǎo)致正常卵泡閉鎖不發(fā)生或減少；另一方面，局部產(chǎn)生大量的雄激素，造成發(fā)育到一定階段的卵泡發(fā)育停止或者延長,而高胰島素和IGF-1對(duì)原始卵泡不斷啟動(dòng),從而促進(jìn)多囊卵巢形成，無法產(chǎn)生優(yōu)勢卵泡并導(dǎo)致無排卵的持續(xù)化〔10〕，故推測胰島素和IGF-1通過多種路徑促進(jìn)雄激素大量合成，并成為PCOS發(fā)病的機(jī)制之一。補(bǔ)腎化痰祛瘀方劑能有效降低大鼠血中IGF-1水平，減少IGF-1對(duì)卵巢內(nèi)分泌的刺激。

TNF-α可影響卵泡膜細(xì)胞和卵巢顆粒細(xì)胞類固醇激素的分泌，調(diào)節(jié)卵細(xì)胞凋亡，是卵巢功能調(diào)節(jié)因子之一，并影響外周組織的胰島素敏感性、升高局部雄性激素水平〔11〕。本實(shí)驗(yàn)說明PCOS發(fā)病時(shí)，TNF-α亦起到了一定的影響，且高水平的TNF-α可刺激白細(xì)胞介素(IL)-6的合成與分泌，IL-6可通過抑制顆粒細(xì)胞FSH誘導(dǎo)而生成的E2，從而影響卵泡發(fā)育，是卵巢內(nèi)分泌的調(diào)解因子〔12〕。補(bǔ)腎化痰祛瘀方劑亦可降低大鼠血中TNF-α水平，是阻斷卵巢內(nèi)分泌紊亂的另一條路徑。

綜上所述，補(bǔ)腎化痰祛瘀方劑可有效降低PCOS模型大鼠血中的IGF-1和TNF-α的水平，穩(wěn)定大鼠卵巢內(nèi)分泌功能，改善大鼠生殖功能。補(bǔ)腎化痰祛瘀中藥方劑有望成為臨床治療PCOS的另一種有效手段。

1Liu SY,Li X,Zheng Y.Study of combined use of clomiphene citrate and gonadotropins on the infertile patients with PCOS〔J〕.J Reprod Contracep,2012;23(3):159-68.

2王秀萍.補(bǔ)腎化痰活血法治療PCOS不孕不育的臨床效果〔J〕.光明中醫(yī),2016;31(20):2971-2.

3梁東輝，宗利麗.羅頌平教授治療多囊卵巢綜合征的臨床經(jīng)驗(yàn)〔J〕.環(huán)球中醫(yī)藥，2014;7(9)：719-21.

4Gladchuk IZ,Semenyuta OM,Onyshchenko YV.Clinical effectiveness of the various approaches for infertility treatment in women with PCOS and hyperprolactinemia〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2014;24(16):1-4.

5Wang Y,Li Y,Xu F,etal.Apolipoprotein B/Apolipoprotein A1 ratio is associated with sex hormone binding globulin and may be an indicator of metabolic syndrome in PCOS women〔J〕.J Reprod Contracep,2015;26(4):213-21.

6任小胖,劉梅梅,陳 亮,等.多囊卵巢綜合征患者血清核因子-κB和轉(zhuǎn)化生長因子β1的表達(dá)及其與胰島素抵抗的相關(guān)性研究〔J〕.生殖與發(fā)育醫(yī)學(xué),2013;33(8):529-33.

7楊 芳.胰島素、雄激素、胰島素樣生長因子、血管內(nèi)皮生長因子對(duì)多囊卵巢綜合征患者卵泡發(fā)育的影響〔J〕.生殖與發(fā)育醫(yī)學(xué),2013;33(6):413-7.

8裴劉成,趙 杰.胰島素樣生長因子在PCOS病人卵泡液及顆粒細(xì)胞中的表達(dá)〔J〕.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012;34(3):225-8.

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10楊志華,趙淑萍,馬德花.多囊卵巢綜合征患者血清IGF-1水平與胰島素抵抗〔J〕.中國優(yōu)生與遺傳雜志,2012;20(5):90-1.

11蘭 楠,王 爽.復(fù)方麥芽丸對(duì)PCOS模型大鼠IL-6、TNF-α表達(dá)的影響〔J〕.中藥藥理與臨床,2016;32(3):136-40.

12孫 林,王海燕,邵小光.卵泡液氧化應(yīng)激指標(biāo)對(duì)PCOS患者IVF結(jié)局的影響〔J〕.黑龍江醫(yī)藥,2016;29(1):49-52.

〔2016-12-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

河南省中醫(yī)藥管理局科研課題(2014ZY02013)

傅金英(1968-)，女，主任醫(yī)師，主要從事多囊卵巢綜合征研究。

姬 霞(1968-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事生殖內(nèi)分泌研究。

R28

A

1005-9202(2017)16-3927-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.16.008