高效液相色譜法測定云南小?？Х榷怪锌Х纫虻暮?/h1>
2017-09-13 04:40:20陳嫻刁玉華肖麗恒
科技創(chuàng)新導報 2017年19期
陳嫻+刁玉華+肖麗恒
摘 要：建立測定云南小?？Х榷怪锌Х纫蚝康腍PLC方法，采用高效液相色譜儀帶紫外檢測器，使用C18柱（粒徑：5 μm，3.9 mm×150 mm）；流動相：甲醇+水（24+76）；流速：1.0 mL/min；紫外檢測器：檢測器波長272 nm；柱溫：25 ℃；進樣量10 μL作為分析條件。咖啡因在0～200 ug/mL范圍內(nèi)線性關系良好，相關系數(shù)均大于0.999；回收率均在90%～110%之間；檢出限為0.125 mg/kg。結(jié)論 該法具有準確、靈敏、重復性好等優(yōu)點，適合飲料中的咖啡因含量的檢測。
關鍵詞：液相色譜法 測定 云南小?？Х榷?咖啡因
中圖分類號：O652.1 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2017）07（a）-0126-02
咖啡因：（Caffeine）是咖啡果中含有的一種生物堿，適度使用有祛除疲勞、興奮神經(jīng)的作用，臨床上用于治療神經(jīng)衰弱和昏迷復蘇。但是，大劑量或長期使用也會對人體造成損害，特別是它也有成癮性，一旦停用會出現(xiàn)精神萎頓、渾身困乏疲軟等各種戒斷癥狀，雖然其成癮性較弱，戒斷癥狀也不十分嚴重，但由于藥物的耐受性而導致用藥量不斷增加時，咖啡因就不僅作用于大腦皮層，還能直接興奮延髓，引起陣發(fā)性驚厥和骨骼震顫，損害肝、胃、腎等重要內(nèi)臟器官，誘發(fā)呼吸道炎癥、婦女乳腺瘤等疾病，甚至導致吸食者下一代智能低下，肢體畸形。因此也被列入受國家管制的精神藥品范圍。濫用咖啡因通常也有吸食和注射兩種形式，其興奮刺激作用及毒副反應、癥狀、藥物依賴性與苯丙胺相近?？Х纫蛑饕糜趯怪袠幸种茽顟B(tài)，如嚴重傳染病、鎮(zhèn)靜催眠藥過量引起的昏睡及呼吸循環(huán)抑制等，可肌肉注射苯甲酸鈉咖啡因。此外，咖啡因還常配伍麥角胺治療偏頭痛：配伍解熱鎮(zhèn)痛藥治療一般性頭痛[1]。此時，它由于收縮腦血管，減少腦血管搏動的幅度而加強以上藥物止頭痛的作用。目前對于咖啡因測定的方法主要有：滴定法[2]、紫外可見分光光度計法[3]、高效液相色譜法[4]、氣相色譜法[5]、薄層色譜法[6]、毛細管電泳法[7]等方法。文章采用高效液相色譜的方法測定咖啡因，建立了采用高效液相色譜的方法測定云南小?？Х榷怪锌Х纫虻姆椒?，試驗表明該方法前處理簡單，分離效能好，回收率高，可以快速、簡便、準確地檢測云南小?？Х榷怪械目Х纫颍玫綔蚀_的檢測結(jié)果。
1 材料與方法
1.1 試驗材料
云南小粒咖啡豆（市售）；超純水；氧化鎂（MgO）；甲醇（CH3OH）：色譜純；咖啡因標準品（C8H10N4O2）：純度≥99%；編號：58-08-2；批號：200911；生產(chǎn)廠家：美國。
高效液相色譜儀（帶紫外檢測器，Agilent 1260美國安捷倫科技有限公司）；水浴鍋（HH-6常州國華有限公司）；電子天平（CP213美國，奧豪斯），感量為0.1 mg；超純水器（明澈UV24美國密理博公司）。
1.2 試驗方法
稱取1 g（精確至0.001 g）經(jīng)粉碎低于30目的均勻樣品于250 mL錐形瓶中，加入約200 mL水，沸水浴30 min，不時振搖，取出流水冷卻1 min，加入5 g氧化鎂，振搖，再放入沸水浴20 min，取出錐形瓶，冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，加水定容至刻度（使樣品溶液中咖啡因含量在標準曲線范圍內(nèi)），搖勻，靜置，取上清液經(jīng)微孔濾膜過濾，備用。
1.2.1 標準曲線的繪制
咖啡因標準儲備液（2.0 mg/mL）：準確稱取咖啡因標準品0.002008 g（精確至0.1 mg）于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容。放置于4 ℃冰箱，有效期為6個月。
咖啡因標準中間液（200 μg/mL）：準確吸取5.0 mL咖啡因標準儲備液于50 mL容量瓶中，用水定容。放置于4 ℃冰箱，有效期為一個月?？Х纫蛐是€工作液：吸取咖啡因標準中間液，配制成濃度分別為10.0、20.0、40.0、80.0、100、120.0、160.0、200 μg/mL的工作液，臨用時配制。將標準系列工作液經(jīng)液相色譜儀測定，以標準工作液的濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。
1.2.2 儀器工作條件
色譜柱：C18柱（粒徑：5 μm，3.9 mm×150 mm）；流動相：甲醇+水（24+76）；流速：1.0 mL/min；紫外檢測器：檢測器波長272 nm；柱溫：25 ℃；進樣量10 μL。
2 結(jié)果與分析
2.1 校準曲線
取咖啡因標準溶液，用高效液相色譜儀自動進樣，標準曲線方程為y=27.32252x+12.55479，r=0.99985（見表1），表明線性關系良好。
2.2 精密度試驗
取咖啡因含量高、中、低3個濃度分別進行6次測定，計算6次結(jié)果的相對標準偏差，變異系數(shù)均小于15%（見表2），表明使用該方法測定咖啡因數(shù)據(jù)可靠。
2.3 檢出限
方法的測定限為信噪比（S/N）3∶1時的濃度，計算得到方法檢出限為：0.000 5 μg/mL，即：0.125 mg/kg。
定量限為信噪比（S/N）10∶1時的濃度為：0.42 mg/kg。標樣色譜圖如圖1，樣品色譜圖。
2.4 回收率和誤差
精確稱取1.0 g云南小?？Х榷箻悠?，加入標樣，濃度為20.28 μg/mL，進行3次測定，經(jīng)測定后平均值117.634 4 mg/kg，誤差為3.6，回收率為97%（見表3）。偏差范圍小，說明該方法的準確度較好。
3 結(jié)語
試驗結(jié)果表明，采用建立的高效液相色譜檢測方法測定云南小?？Х榷怪械目Х纫?，具有準確、快速、簡便的優(yōu)點，且測量的范圍滿足標準限量的檢測要求。
參考文獻
[1] 董善士，王義明，林似蘭，等.維磷補汁中咖啡因的HPLC分析條件的單純形法優(yōu)化[J].中國科技大學學報，1987， 18（3）：209.
[2] 張帆，賀學峰，汪學楷.高效液相色譜法測定飲料中食品添加劑的含量[J].四川大學學報：工程科學版，2000，34 （4）：56-58.
[3] 沈其元.高效液相色譜法測定飲料中的咖啡因[J].環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學，2002，19（5）：329.
[4] 趙清嵐，楊靜，白冰，等.薄層掃描法同時測定綠茶中的EGCG、ECG和咖啡因[J].河南大學學報：自然科學版，2009，39（3）：256-258.
[5] Tasker R A R，Connell B J，Strain S M.Pharmacology of systematically administered domoic acid in mice[J].Can J Physiol pharmacol，1991，69（3）：378-382.
[6] Smith D S，Kitts D D.Enzyme Immunoassay for the determination of domoic acid in mussel extracts[J].J Agric Food.Chem，1995（43）：367-371.
[7] Garthwaite I，Ross K M，Miles C O，et al.Polyclonal antibodies to domoic acid and their use in immunoassays for domoic acid in seawater and shellfish[J].Nat Toxins，1998（6）：93-104.endprint
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1.1 試驗材料
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1.2.1 標準曲線的繪制
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2.2 精密度試驗
取咖啡因含量高、中、低3個濃度分別進行6次測定，計算6次結(jié)果的相對標準偏差，變異系數(shù)均小于15%（見表2），表明使用該方法測定咖啡因數(shù)據(jù)可靠。
2.3 檢出限
方法的測定限為信噪比（S/N）3∶1時的濃度，計算得到方法檢出限為：0.000 5 μg/mL，即：0.125 mg/kg。
定量限為信噪比（S/N）10∶1時的濃度為：0.42 mg/kg。標樣色譜圖如圖1，樣品色譜圖。
2.4 回收率和誤差
精確稱取1.0 g云南小?？Х榷箻悠?，加入標樣，濃度為20.28 μg/mL，進行3次測定，經(jīng)測定后平均值117.634 4 mg/kg，誤差為3.6，回收率為97%（見表3）。偏差范圍小，說明該方法的準確度較好。
3 結(jié)語
試驗結(jié)果表明，采用建立的高效液相色譜檢測方法測定云南小?？Х榷怪械目Х纫?，具有準確、快速、簡便的優(yōu)點，且測量的范圍滿足標準限量的檢測要求。
參考文獻
[1] 董善士，王義明，林似蘭，等.維磷補汁中咖啡因的HPLC分析條件的單純形法優(yōu)化[J].中國科技大學學報，1987， 18（3）：209.
[2] 張帆，賀學峰，汪學楷.高效液相色譜法測定飲料中食品添加劑的含量[J].四川大學學報：工程科學版，2000，34 （4）：56-58.
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[4] 趙清嵐，楊靜，白冰，等.薄層掃描法同時測定綠茶中的EGCG、ECG和咖啡因[J].河南大學學報：自然科學版，2009，39（3）：256-258.
[5] Tasker R A R，Connell B J，Strain S M.Pharmacology of systematically administered domoic acid in mice[J].Can J Physiol pharmacol，1991，69（3）：378-382.
[6] Smith D S，Kitts D D.Enzyme Immunoassay for the determination of domoic acid in mussel extracts[J].J Agric Food.Chem，1995（43）：367-371.
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