陳君穎?黃清勇?張美雪?鄧龍生

[摘要] 目的 研究測定男性不育患者精漿MDA、SOD活性的臨床價值。 方法 120例患者采用隨機(jī)數(shù)字表法分為三組，健康對照組、白細(xì)胞精子癥組和少弱精子癥組，比較MDA、SOD活性。 結(jié)果 少弱精子癥組與白細(xì)胞精子癥組精漿MDA明顯高于健康對照組；白細(xì)胞精子癥組精漿MDA明顯高于少弱精子癥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。少弱精子癥組與白細(xì)胞精子癥組精漿SOD明顯低于健康對照組（P<0.01）；白細(xì)胞精子癥組精漿SOD明顯低于少弱精子癥組（P<0.01）。 結(jié)論 ROS是導(dǎo)致男性不育癥的一個重要病因，男性不育患者精漿MDA和SOD的測定對男性不育癥的診斷具有重要的臨床價值。

[關(guān)鍵詞] 男性不育癥；精漿；超氧化物岐化酶；丙二醛

[中圖分類號] R446.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）16-242-03

Clinical significance of seminal plasma MDA and SOD activity in infertile patients

CHEN Junying1 HUANG Qingyong1 ZHANG Meixue1 DENG Longsheng2

1.Clinical Laboratory，Xiamen Hospital of Traditional Chinese Medicine，Xiamen 361009，China；2.Department of Andrology，Xiamen Hospital of Traditional Chinese Medicine，Xiamen 361009，China

[Abstract] Objective To observe the clinical significance of seminal plasma MDA and SOD activity in infertile patients. Methods 120 patients were randomly divided into three groups，healthy control group，leukocytospermia group and oligoasthenozoospermia group.The MDA，SOD activity were compared. Results The seminal plasma MDA of oligoasthenozoospermia group and leukocytospermia group were significantly higher than that of healthy control group.The seminal plasma MDA of leukocytospermia group was significantly higher than that of oligoasthenozoospermia group （P<0.01）.The seminal plasma SOD of oligoasthenozoospermia group and leukocytospermia group were significantly lower than that of healthy control group （P<0.01）.The seminal plasma SOD of leukocytospermia group was significantly lower than that of oligoasthenozoospermia group （P<0.01）. Conclusion ROS is an important cause of male infertility.The determination of seminal plasma MDA and SOD in male infertility patients has important clinical value in the diagnosis of male infertility.

[Key words] Male infertility；Seminal plasma；Superoxide dismutase；Malondialdehyde

活性氧（Reactive oxygen species，ROS）引起脂質(zhì)過氧化損傷導(dǎo)致精子結(jié)構(gòu)和功能損害是男性不育癥的一個重要原因，越來越受到臨床醫(yī)師的關(guān)注[1-2]。本研究擬通過檢測白細(xì)胞精子癥和少弱精子癥患者精漿中反映脂質(zhì)過氧化損傷丙二醛（Malondialdehyde，MDA）[3]和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的含量[4]并與健康男性進(jìn)行比較，從多角度為男性不育的診療提供實驗依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

白細(xì)胞精子癥組40例，少弱精子癥組40例，

研究對象病例均來自2014年1月～2016年6月廈門中醫(yī)院男科門診就診的患者，婚后性生活正常，未采取避孕措施1年以上而女方未孕育，無性功能障礙病史，無外傷及遺傳性疾病家族史，而且無明顯睪丸、附睪及輸精管異常，女方生育能力經(jīng)檢查正常。平均年齡30.5歲。健康對照組40例，來自有二胎孕前檢查的精液檢查者平均年齡32.1歲，以相同方法取材，檢測。

1.2 方法

1.2.1 精液收集與處理 精液標(biāo)本采集：禁欲（包括遺精和手淫）3～7d，以3～5d為宜，手淫采集新鮮精液，置清潔干燥無菌尿杯內(nèi)，15～30分鐘內(nèi)手心保溫送檢，置37℃水浴箱內(nèi)，30分鐘后待其完全液化，檢測精液外觀、量、精子密度、活動力、活動率、液化時間等指標(biāo)。精液以1000×ɡ離心10min，初步分離精子和精漿。精漿再經(jīng)5000×ɡ離心15min后其上清液保存于-20℃待測。endprint

1.2.2 試劑與儀器 （1）試劑：SOD、MDA，ELISA檢測試劑盒（批號Jan2017）均購自上海江萊生物科技有限公司；（2）儀器：SSW–600–2S型微電腦電熱恒溫水槽；IMarkTM.酶標(biāo)儀；Microfuge 22R centrifuge 離心機(jī)。

1.2.3 檢測與方法 精子密度和精子活動率用西班牙SCA計算機(jī)輔助精子質(zhì)量分析系統(tǒng)檢測。SOD、MDA活性測定按照試劑盒操作說明書進(jìn)行測定。

1.2.4 分組 （1）健康對照組40例：a級精子>25%或（a+b）級精子>50%，精子活率>70%，精子密度≥20×109/L，有生育史；（2）少弱精子癥組40例：a級精子<25%或（a+b）級精子<50%，精子活率<70%，精子密度<20×109/L；（3）白細(xì)胞精子癥組40例：精液中白細(xì)胞>1.0×106/mL；

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS13.0軟件包，計量資料以（）表示，采用方差分析，計數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

對健康對照組、少弱精子癥組與白細(xì)胞精子癥組精漿MDA活性進(jìn)行方差分析結(jié)果表明有統(tǒng)計學(xué)意義（F=111.337，P<0.05），兩兩比較結(jié)果顯示：少弱精子癥組與白細(xì)胞精子癥組MDA活性明顯高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；白細(xì)胞精子癥組精漿MDA活性明顯高于少弱精子癥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。健康對照組、少弱精子癥組與白細(xì)胞精子癥組精漿SOD活性進(jìn)行方差分析結(jié)果顯示有統(tǒng)計學(xué)差異（F =291.741，P<0.05），兩兩比較分析結(jié)果為：少弱精子癥組與白細(xì)胞精子癥組精漿SOD活性明顯低于健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；白細(xì)胞精子癥組精漿SOD活性明顯低于少弱精子癥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表1。

3 討論

ROS主要由內(nèi)源和外源性的因素產(chǎn)生。精液中的精子細(xì)胞和白細(xì)胞是ROS主要的內(nèi)源性來源，而精索靜脈曲張，吸煙，感染，環(huán)境因素，如毒素，輻射等可導(dǎo)致外源性ROS產(chǎn)生[5-7]。在生理情況下，ROS有利于維持精子細(xì)胞的正常功能。而ROS產(chǎn)

生過多，超過了機(jī)體抗氧化體系的還原能力時則可引起氧化應(yīng)激，導(dǎo)致精子膜、精子線粒體、精子DNA受損，破壞精子功能和存活，是造成男性不育癥的重要病因之一[8-9]。

已研究表明，ROS引發(fā)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生的降解產(chǎn)物，特別是醛式產(chǎn)物（如MDA）對細(xì)胞具有毒性作用，它破壞精子膜的流動性、完整性，導(dǎo)致精子運(yùn)動能力下降甚至喪失，從而影響精子受精能力[10-11]。機(jī)體內(nèi)存在抗氧化防御系統(tǒng)，其中包括SOD等抗氧化酶和維生素C、維生素E、谷胱甘肽等非酶類抗氧化劑，目前認(rèn)為精漿中SOD作為體內(nèi)清除ROS的主要酶，可清除中和ROS對精子的潛在毒性作用。ROS產(chǎn)生和SOD清除保持動態(tài)平衡，保持正常生育能力的基礎(chǔ)[12-13]。

本研究結(jié)果表明少弱精子癥組精漿MDA明顯高于健康對照組，從結(jié)果中提示ROS的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA增加會導(dǎo)致精子的數(shù)量和活率低。少弱精子癥組精漿SOD明顯低于健康對照組。從結(jié)果中提示少弱精子癥組精漿中清除ROS的抗氧化劑SOD明顯減少。這種抗氧化劑與ROS的脂質(zhì)過氧化損傷的不平衡可能是少弱精子癥的重要原因。

Ali等[14]研究顯示當(dāng)精液中的白細(xì)胞>1×106WBC/mL所產(chǎn)生的ROS可誘導(dǎo)精子膜脂質(zhì)過氧化損傷。Ashok等[15]研究表明低水平白細(xì)胞精子（0.1 ～ 1.0×106WBC/mL）也產(chǎn)生ROS，它可引起精子DNA碎片而導(dǎo)致精子DNA損傷。

本研究結(jié)果表明白細(xì)胞精子癥組MDA明顯高于健康對照組，從結(jié)果中提示精漿白細(xì)胞升高，導(dǎo)致ROS增高，誘導(dǎo)精子膜脂質(zhì)過氧化損傷。白細(xì)胞精子癥組精漿SOD明顯低于健康對照組，且明顯低于少弱精子癥組，推測與白細(xì)胞有抑制SOD生成有關(guān)。

綜上所述，ROS是男性不育癥的一個重要原因，ROS的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA和抗氧化劑SOD的動態(tài)平衡是保持正常生育能力的基礎(chǔ)。本研究結(jié)果提示精漿MDA和SOD的測定對男性不育癥的診斷具有重要的臨床價值。

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（收稿日期：2017-02-14）endprint