凌彩玲，趙可偉，楊皓云，趙清，區(qū)旭春

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗科，廣東 廣州)

0 引言

男性精液質(zhì)量是直接導(dǎo)致男性不育的重要原因之一。成年男性睪丸支持細胞產(chǎn)生抗苗勒氏管激素（anti-Müllerian hormone, AMH)，因此AMH 可能與精子發(fā)生有一定關(guān)系?？姑缋帐瞎芗に兀ˋMH），被歸為轉(zhuǎn)化生長因子超家族，能夠?qū)M織的生長以及分化起作用[1]。廣泛參與了生殖細胞的調(diào)控、性腺的發(fā)育及睪丸的下降。已有研究表明精漿中AMH 能夠在精子生成期間發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，與精子密度、存活率呈明顯正相關(guān)[2-3]。李常林等報道不育患者與正常生育力男性精漿AMH 存在明顯關(guān)系[4]。精漿中AMH 水平降低是男性不育的危險因素。本實驗是測定男性精漿中AMH 水平，分析精漿中AMH 水平在男性精液中的濃度。研究AMH 水平對于男性在生育能力中能否給臨床提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本實驗選擇兩個組作為研究對象：其中A 組為對照組，B 組為不育組。B 組對象為廣州中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院橋東院區(qū)不孕不育門診就診的不育癥患者?；颊吣挲g為25-35 歲，平均（26±4.5）歲，無避孕措施，正常備孕1 年以上不育者，女方無生殖系統(tǒng)疾病;A 組選擇年齡25～38 歲，平均（25.5±5.5）歲健康已育捐獻者。A 組30 例：精子計數(shù)大于（或等于）20×109/mL， 精子活率大于75%，（a+b）級精子大于50%,或a 級精子大于25%，精漿PH7.0-8.0，排精量2-7mL 平均為（4±0.5） mL，液化時間小于30min，正常形態(tài)精子率大于30%；B 組按照精液中的精液理化檢查、顯微鏡動力學(xué)檢查、形態(tài)等常規(guī)參數(shù)分B1-B5 五組；B1（精液指標無異常）28 例：精子數(shù)量、生存率、活動力、形態(tài)等常規(guī)指標無異常；B2（精液指標異）32 例：精子數(shù)量、生存率、活動力、形態(tài)等常規(guī)參數(shù)指標中存在一個或以上不正常；B3（輕度弱精癥）8 例：30%≤（a+b）級精子＜50%；B4（中度弱精癥）10 例：15% ≤（a+b）級精子 ＜30%；B5（重度弱精子）14 例：（a+b）級精子＜10%。

1.2 實驗儀器與試劑

精液常規(guī)參數(shù)測定采用北昂醫(yī)療BEION V4.20 醫(yī)學(xué)圖像軟件。AMH 測定采用采用上海江萊生物生產(chǎn)的ELISA 試劑盒。AMH 水平測定采用Rayto-2100C 酶標分析儀。

1.3 方法

1.3.1 精液標本采集

精液標本采集為手淫法，禁欲時間3-7d，將一次射出的全部精液收入干凈容器內(nèi)，置37℃水浴箱內(nèi)，并每隔10 分鐘觀察一次，用滴管法觀察液化時間。精漿標本制備：精液常規(guī)檢測后，剩下的精液以 3000r/min 離心10 min，取精漿0.5mL放置于專用5mL 試管中，并于-80℃保存待測。

1.3.2 精漿中AMH 水平的檢測

采用Rayto-2100C 酶標分析儀測定，具體操作如下：㈠標本及試劑準備：提前60min 把實驗用精漿及AMH 測定試劑盒從冰箱取出置于室溫。精漿進行復(fù)融操作、AMH 試劑盒平衡至室溫。復(fù)融后的精漿1000×g 離心20 分鐘，取上清即可檢測。此操作由專業(yè)的檢驗技術(shù)人員嚴格按照試劑盒操作規(guī)程進行檢測。

1.3.3 精液檢測分析

采用國產(chǎn)北昂醫(yī)療BEION V4.20 醫(yī)學(xué)圖像軟件系統(tǒng)對精液中的精液理化檢查、顯微鏡動力學(xué)檢查、形態(tài)等常規(guī)參數(shù)進行全自動檢測。

1.3.4 統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果

2.1 A 組與B 組精漿AMH 水平結(jié)果比較

B 組精漿AMH 水平均低于A 對照組 （P＜0.05)；B2 組精漿AMH 水平低于B1 組（P＜0.05）與A 組(P＜0.01，見表1)。

表1 A 組與B 組精漿AMH 水平結(jié)果比較

2.2 A 組與B2-B5 組精漿中AMH 水平結(jié)果比較

各組不育癥患者中精漿AMH 水平均低于對照組（P＜0.05)；三種程度弱精子癥隨著精子活力降低，精漿AMH 水平分別對應(yīng)降低，組間結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）如表2。

表2 不育癥指標異常組精漿AMH 水平與A 組結(jié)果比較

2.3 精漿中AMH 水平與精液其他參數(shù)相關(guān)性分析

精漿中AMH 水平與精子數(shù)量無相關(guān)性（P＞ 0.05）；精漿中AMH 水平與精子活動率呈正相關(guān)，其中輕度、中度弱精（P＜0.05）；重度弱精（P＜0.01)。而精漿中AMH 水平與精子畸形率在本次研究中暫未顯示存在明顯相關(guān)性。如表3。

表3 精漿AMH 水平與精液其他參數(shù)相關(guān)性分析

3 結(jié)果及討論

精液的成分是復(fù)雜多樣的，目前常規(guī)檢查可知它當中包含了精子、前列腺液、精囊液等成分，并且這些物質(zhì)在正常狀態(tài)是處于平衡狀態(tài)的。一般的精液常規(guī)檢查只專注于精子的數(shù)量、活動率、畸形率等，而對精漿中的其它成分了解甚少。從而導(dǎo)致了許多精液常規(guī)參數(shù)正常的不育癥患者得不到有效治療。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，得以讓更多問題浮現(xiàn)。精漿中的各種成分研究也引起了重視與關(guān)注。實際上，精漿中的各種成分也能直觀的反映男性生殖系統(tǒng)的狀態(tài)，為臨床不育癥患者的診斷與治療提供更多的依據(jù)。

目前對精漿成分的研究已趨向常態(tài)化與多元化，如對精漿中彈性蛋白酶（SPE）、精漿超氧化物歧化酶SOD 活性,精漿ROS、PON-1、MDA 聯(lián)合精子DNA 碎片檢測精子狀態(tài)，精漿α-葡萄糖苷酶等等一系列研究都已明確證實了精漿中的成分能對精液產(chǎn)生直觀的影響。給不育癥患者的臨床治療提供依據(jù)[5-9]。

抗繆勒管激素（anti-Müllerian hormone,AMH）,由阿爾弗雷德約斯特教授在二十世紀四十年代發(fā)現(xiàn)[10]AMH 在男性和女性體內(nèi)均有表達，但在生物學(xué)作用上存在差異。在女性當中，AMH 廣泛用于評估卵巢儲備功能、 輔助生殖、診斷多囊卵巢綜合征、預(yù)測絕經(jīng)期及診斷卵巢早衰、作為顆粒細胞腫瘤的一個特異循環(huán)指標等[11]。而在男性當中，血清AMH 檢測用于隱睪癥和無睪癥的鑒別診斷[12]。對于精漿中AMH 水平，曾有國內(nèi)外研究初步認它與精子的密度、存活率有相關(guān)性[2-3]。國內(nèi)早期有報道稱不育患者與正常生育力男性精漿中AMH 存在差異[4]，與BMI 無明顯相關(guān)性[13]因此對于肥胖或超重不育患者精液質(zhì)量評估，精漿AMH 更具意義。同時AMH 也可應(yīng)用于無精癥患者生育能力的評估[14]。AMH 作為精漿的重要組成物之一，它的含量變化是否對不育癥有臨床意義？國內(nèi)外對此研究有限，甚至未見同類文獻報道?；谝陨锨闆r，本研究以此出發(fā)，深入研究精漿中AMH 的水平變化對精液的影響。在研究中我們發(fā)現(xiàn)男性不育組精漿AMH 水平低于正常已育組，我們的實驗提示精漿中AMH 水平測定對男性的生育有指導(dǎo)意義[4]，精液常規(guī)指標異常的男性不育組精漿AMH 水平也低于指標正常的男性不育組。實驗提示精漿中AMH 水平可明顯影響常規(guī)精液參數(shù)，特別是對精子的活動能力具有決定性作用。可作為精子活動能力評價的一個獨立性檢測指標。

本研究顯示精漿中AMH 水平的變化對精子的后動能力產(chǎn)生的影響最為明顯（P＜0.05)，而對精子的密度、畸形率等作用暫不明顯（P＞0.05)。精子的生成是一個緊密、嚴謹并高度有序的過程，整個過程都依賴丘腦-垂體-性腺軸調(diào)節(jié)，而其中卵泡激素與睪酮等不能直接作用于生精細胞，主要是與睪丸支持細胞上的受體結(jié)合，而成年男性睪丸支持細胞產(chǎn)生AMH，AMH 廣泛參與了生殖細胞的調(diào)控和性腺發(fā)育、誘導(dǎo)睪丸下降等，因此可推測AMH 與精子的發(fā)生有一定的聯(lián)系。但精漿中的AMH 是通過何種機制影響精子活動能力的暫時不得而知，還需作進一步的研究。

綜上所述，精漿中AMH 水平高低可明顯影響精子的質(zhì)量，導(dǎo)致男性不育癥的發(fā)生。精漿中AMH 對精子的活動能力影響尤為明顯，臨床在治療精子的活動能力低下時，可適當考慮從提高精漿AMH 水平入手，直接使用能刺激睪丸產(chǎn)生AMH 的藥物，提高精漿中AMH 的濃度，從而增強精子的活動能力，改善精子整體質(zhì)量，提高生育能力。