王書學(xué)

【摘要】 目的 分析采用超高效液相色譜（UPLC）測(cè)定比沙可啶腸溶片含量的測(cè)量不確定度。方法 采用外標(biāo)法， 應(yīng)用UPLC測(cè)定比沙可啶腸溶片中比沙可啶的含量， 并建立數(shù)學(xué)模型評(píng)估其測(cè)量不確定度。結(jié)果 UPLC外標(biāo)法測(cè)定得到的比沙可啶腸溶片的含量為98.8%， 置信概率為95%， 擴(kuò)展測(cè)量不確定度為2.5%， 測(cè)量結(jié)果表示為（98.8±2.5）%， K=2。結(jié)論 含量測(cè)定的過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制儀器的狀態(tài)， 特別是對(duì)照品的稱量過(guò)程， 另外也應(yīng)該建立測(cè)量不確定度的評(píng)估， 對(duì)于保證實(shí)驗(yàn)的精準(zhǔn)度極其重要。

【關(guān)鍵詞】 比沙可啶；超高效液相色譜；測(cè)量不確定度

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.21.114

比沙可啶腸溶片通過(guò)與腸黏膜直接接觸刺激其感覺(jué)神經(jīng)末梢增強(qiáng)腸反射性蠕動(dòng)促進(jìn)排便， 臨床主要用于治療急、慢性便秘和習(xí)慣性便秘， 被收錄于2015版《中國(guó)藥典》中[1]。《中國(guó)藥典》中對(duì)于比沙可啶腸溶片的含量測(cè)定是采用紫外-可見(jiàn)光光度法， 吸收波長(zhǎng)為264 nm[2]。作者本次通過(guò)UPLC來(lái)對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定， 并測(cè)定其含量的測(cè)量不確定度。UPLC借助于高效液相色譜的理論及原理， 涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測(cè)手段等全新技術(shù)， 增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量[3]。本研究中作者依次建立數(shù)學(xué)模型、分析不確定度來(lái)源以及計(jì)算不確定度分量、合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展不確定度的過(guò)程， 對(duì)UPLC外標(biāo)法測(cè)定比沙可啶腸溶片含量的測(cè)量不確定度進(jìn)行評(píng)定。

1 儀器與試劑

1. 1 儀器 Waters ACQUITY UPLC I-Class 超高效液相系統(tǒng)， 包括PDA檢測(cè)器， 四元高壓泵等；分析天平：梅特勒-托利多公司XS 十萬(wàn)分之一分析天平；色譜柱：Waters BEH C18；A級(jí)50 ml量瓶。

1. 2 試劑 比沙可啶對(duì)照品由中國(guó)食品藥品檢定研究院購(gòu)買， 批號(hào)為10081-200402， 純度為100.0%；比沙可啶腸溶片由A公司提供， 批號(hào)為20160821， 規(guī)格為5 mg；乙腈為美國(guó)費(fèi)歇爾公司色譜純乙腈；乙酸銨和冰乙酸由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司購(gòu)買；水為實(shí)驗(yàn)室自制超純水。

2 方法

2. 1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 流動(dòng)相A為乙腈， 流動(dòng)相B為乙酸銨溶液[20 mmol/L， 用冰乙酸調(diào)節(jié)pH至（5.0±0.2）]， 洗脫比例為A∶B=55∶45， 柱溫為40℃， 樣品室溫度為15℃， 流速0.4 ml/min， 檢測(cè)波長(zhǎng)265 nm， 進(jìn)樣量10 μl。在上述色譜條件下， 比沙可啶峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度>1.5， 滿足系統(tǒng)適用性要求。

2. 2 樣品配制

2. 2. 1 對(duì)照品溶液 精密稱取比沙可啶對(duì)照品適量置于50 ml量瓶中， 加冰乙酸-乙腈-水（4∶30∶66， V/V/V）溶解， 并制成1 ml中約含0.2 mg的比沙可啶對(duì)照品溶液。

2. 2. 2 供試品溶液 取比沙可啶腸溶片20片， 精密稱定后置于碾缽中碾成細(xì)粉， 精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于比沙可啶10 mg）置于50 ml量瓶中， 加冰乙酸-乙腈-水（4∶30∶66， V/V/V）溶解并定容， 搖勻， 溶液過(guò)0.2 μm微孔濾膜后， 取續(xù)濾液作為供試品溶液， 平行配置2份。

2. 2. 3 空白輔料溶液 精密稱取生產(chǎn)工藝中的所有輔料適量， 并按“2.2.2供試品溶液”項(xiàng)下的方法配置成空白輔料溶液。

2. 3 樣品含量測(cè)定 分別取“2.2” 項(xiàng)下的對(duì)照品溶液和供試品溶液10 μl， 注入U(xiǎn)PLC儀， 按“2.1”項(xiàng)中的色譜條件各進(jìn)樣2針進(jìn)行分析， 記錄色譜圖中相應(yīng)的峰面積， 求各自的平均值， 按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果， 比沙可啶腸溶片的含量為98.8%。

3 測(cè)量不確定度評(píng)價(jià)

3. 1 建立數(shù)學(xué)模型 根據(jù)含量測(cè)定的原理和測(cè)試過(guò)程可知， 比沙可啶腸溶片中比沙可啶的含量計(jì)算公式為：

式中， Y代表供試品中比沙可啶的標(biāo)示百分含量；A1、A2分別代表供試品的峰面積和對(duì)照品的峰面積；W1、W2分別表示供試品的稱樣量和對(duì)照品的稱樣量；V1、V2分別代表供試品溶液的稀釋體積和對(duì)照品溶液的稀釋體積；P2代表對(duì)照品的純度；W—代表供試品平均片質(zhì)量；標(biāo)示量為5 mg/片。因此可知， 比沙可啶腸溶片中比沙可啶含量測(cè)定的測(cè)定不確定度來(lái)源有：對(duì)照品的純度、對(duì)照品及供試品稱樣量、對(duì)照品及供試品的稀釋體積、對(duì)照品及供試品的峰面積、供試品平均片重量。

3. 2 測(cè)量不確定度評(píng)價(jià)結(jié)果 根據(jù)JJF1059.1-2012規(guī)程《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[4]、《常用玻璃儀器檢定規(guī)程》[5]等標(biāo)準(zhǔn)對(duì)本次研究涉及到的不確定度類型及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可以得知比沙可啶腸溶片含量的測(cè)量不確定度Uc（X）=98.8%×1.26×10-2。因測(cè)量結(jié)果符合正態(tài)分布， 置信概率取為95%， 包含因子K=2， 則U=2×1.26%=2.5%。因此可知X=（98.8±2.5）%， K=2。

4 小結(jié)

從含量測(cè)定的整個(gè)過(guò)程可以看出測(cè)量不確定度主要來(lái)源于對(duì)照品的稱量過(guò)程， 因此要是想提高比沙可啶腸溶片中比沙可啶含量的測(cè)量準(zhǔn)確度就應(yīng)該盡可能從對(duì)照品的稱量上提高準(zhǔn)確度， 分析天平應(yīng)經(jīng)過(guò)計(jì)量并做好日常維護(hù)， 稱量室應(yīng)保證溫濕度適宜， 稱量前應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)砝碼對(duì)天平的精準(zhǔn)度進(jìn)行檢驗(yàn)。

綜上所述， 要想提高此類實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度， 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有儀器都應(yīng)該經(jīng)過(guò)計(jì)量院校準(zhǔn)， 并在儀器所適宜的溫濕度下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。另外也要在進(jìn)行方法驗(yàn)證的基礎(chǔ)上建立測(cè)量不確定度的評(píng)估， 這對(duì)于保證實(shí)驗(yàn)的精準(zhǔn)度極其重要。

參考文獻(xiàn)

[1] 張西如， 孫婷， 郭永輝， 等. 比沙可啶原料藥和腸溶片中有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法研究. 中國(guó)藥房， 2016， 27（21）：2995-2997.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中國(guó)藥典（二部）.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2015.

[3] 畢曉黎， 羅文匯， 李素梅， 等. 超高速液相測(cè)定西洋參中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量研究. 中國(guó)藥師， 2012， 15（5）： 651-652.

[4] 全國(guó)計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)、計(jì)量檢定人員考核委員會(huì)組. 測(cè)量不確定度評(píng)定與表示實(shí)例. 中國(guó)計(jì)量出版社， 2001.

[5] 羅正華， 李少旦. 常用玻璃量器檢定的測(cè)量不確定度評(píng)定. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志， 2007， 17（8）：1505-1506.

[收稿日期：2017-03-09]endprint