王思思

（湖北省云夢縣人民醫(yī)院檢檢驗科，湖北 孝感 432500）

免疫檢測技術及其研究進展

王思思

（湖北省云夢縣人民醫(yī)院檢檢驗科，湖北 孝感 432500）

最近幾年免疫檢測技術已在現(xiàn)代生命科學、食品科學、臨床醫(yī)學以及生態(tài)學等領域廣泛應用。由于免疫檢測技術的優(yōu)點很多如簡便、靈敏度高及特異性強等等，它是根據(jù)抗體與抗原反應的原理，定量定性分析待測物的一種檢測方法?；诖吮疚闹攸c對近幾年應用廣泛的免疫學檢測方法的特點、原理以及應用做了分析，并做了比較，希望可以為免疫檢測技術的有關的科研工作者提供參考和借鑒作用，在促進免疫檢測技術的快速發(fā)展的路上助一臂之力。

免疫學檢測技術；酶標記；熒光素標記；放射免疫

1 免疫檢測技術相關概述

早在1959年由于美國的物理學家Mallow和Berson就通過放射免疫檢測技術（Radioimmunoassay，RIA）在血清中檢測出了一些胰島素，就此在分析化學界引入了免疫檢測技術。

免疫檢測技術是根據(jù)分析試劑以一種或多種抗體，定量或者定性檢測分析的方法。最為關鍵的特點就是通過抗體與抗體反應之間相互作用，具有靈敏性與特異性的特點。近幾年免疫檢測技術應用最廣泛的主要包括：免疫熒光技術（im-munofluorescence assay，IFA），免疫層析技術，酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked im-munosorbent assay，ELISA），免疫傳感器（im-munosensor），分子印跡技術（mo-lecularimprinting technique，MIT）等等。

2 免疫熒光技術

免疫熒光技術即被稱為熒光抗體技術，基于生物化學、免疫學以及顯微鏡技術建立了免疫熒光技術，它在標記免疫技術中是發(fā)展最早的一種技術。免疫熒光技術主要包括兩種方法分別是：通過現(xiàn)有已知的熒光抗原標記物檢查或示蹤對應的抗體的方法即熒光抗原法；熒光抗體法就是利用熒光抗體檢查或者示蹤對應的抗原法，這也是最為常見廣泛利用的方法。免疫熒光組織（或細胞）化學技術就是要利用免疫熒光技術通過顯示，進一步檢查細胞或組織內(nèi)的半抗原物質(zhì)或者抗原的方法。

伴隨著免疫熒光技術應用的廣泛性，其在微生物學領域免疫熒光技術發(fā)揮了重要的作用，根據(jù)參考已經(jīng)有人利用免疫熒光技術對沙門氏菌、李斯特氏菌以及葡萄球菌等細菌進行了快速檢測。此外，此技術已經(jīng)涉及到環(huán)境科學、免疫學以及現(xiàn)代分子生物學等眾多領域。

3 免疫層析技術

免疫層析技術，在20世紀90年代已經(jīng)是免疫分析技術中發(fā)展最快的技術?；诿庖邔W原理以及層析技術，檢測樣品在纖維膜上活動，通過毛細作用就在非常短的時間內(nèi)，顯示出特殊顏色，并分析顏色的的技術。

簡要介紹其中一種技術，熒光微球免疫層析技術。熒光微球免疫層析技術原理，通過熒光微球表面的官能團羧基和抗體表面的熒光信號，相互反應就生成穩(wěn)定物質(zhì)的技術，非常新的可以定量分析的免疫層析技術。熒光微球產(chǎn)生的產(chǎn)物具有眾多優(yōu)點，如分散均勻、持續(xù)發(fā)光、可操作性極高以及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定等等，理論上免疫層析技術的局限性降低，因此熒光微球免疫技術通常在檢測食品違禁成分中有了快速的發(fā)展。

4 酶聯(lián)免疫吸附技術

酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法，在20世紀70年代末，ELISA是對病毒、細菌抗原以及抗體進行檢測。單克隆抗體技術在研制出不同類型的抗原、抗體復合物及高純度抗體后，有了廣泛的應用領域，最終推進了免疫分析法的應用。

酶聯(lián)免疫吸附法，就是基于抗原抗體的有效結(jié)合，經(jīng)過免疫反應特異性和酶高效催化下，對樣品進行檢測的應用型技術，具有特異性強、操作簡便、靈敏度高以及檢測成本低的特點，可集中處理大容量的樣品。這種方法在獸藥與飼料的常用藥物檢測中經(jīng)常被使用。雖然酶聯(lián)免疫吸附法存在多方面優(yōu)點，但仍然有需要改進的地方。

5 電化學免疫傳感器

免疫傳感器中研究最早，比較成熟的一種檢測技術就是電化學免疫傳感器。它的原理就是通過結(jié)合免疫檢測技術與電化學技術，根據(jù)反應通過電化學信號對物質(zhì)的濃度進行檢測，分析測定分析物的方法。是由基本電極（換能器）以及抗原、抗體（分子的識別物質(zhì)）組成的。

簡單介紹一種類型，電流型免疫傳感器。電流型免疫傳感器就是在恒壓下對抗原抗體特異性反應中電流進行測定的一種免疫檢測方法。主要包括酶標記型以及非酶標記性兩種類型。

6 分子印跡技術

分子印跡技術系統(tǒng)是通過人工合成分子識別的，具有分子識別的功能的體系很多，如化學識別體系（如冠醚、環(huán)糊精等）以及生物識別系統(tǒng)（如酶、抗體和受體）。分子印跡技術也就是免疫學中的抗原與抗體進行特異性反應識別的過程，即通過客體和薄膜接受體間作用，制備出分子印跡聚合物（MIP），進一步分子精確識別的技術。在制備分子印跡聚合物時，最關鍵的就是對應模板分子選擇與制備所需要的功能單體以及交聯(lián)劑等物質(zhì)。評估印跡效率時，測定印跡高聚物的色譜可以實現(xiàn)分析客體化合物的選擇性以及鍵合強度。

總而言之，目前大部分的免疫檢測技術處于研究和發(fā)展階段，如果想要免疫檢測技術得到更廣泛的應用，我們要努力研究提高操作的經(jīng)濟性、簡便性、免疫檢測技術的精確度、穩(wěn)定性等方面，促進免疫檢測技術的發(fā)展。

[1] 張 奇,李培武,陳小媚,周海燕,印南日,甘冬生.黃曲霉毒素免疫檢測技術研究進展[J].農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全,2013,03:42-46.

[2] 王小環(huán),楊蓮如,趙林立,吳紹強.免疫熒光檢測技術及其在寄生蟲檢測中的應用進展[J].中國畜牧獸醫(yī),2012,03:81-84.

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ISSN.2095-8242.2017.045.8905.01

本文編輯：趙小龍