楚朝暉+孫雪梅

摘 要：該實(shí)驗(yàn)為延長碳纖維簇微盤電極使用壽命，同時(shí)提高電極靈敏度，采用電解法在其表面修飾聚二烯丙基二甲基氯化銨保護(hù)的納米普魯士藍(lán)粒子，并建立了區(qū)帶毛細(xì)管電泳-電化學(xué)檢測(cè)法同時(shí)分離測(cè)定三種β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑用以驗(yàn)證該電極。實(shí)驗(yàn)最終確定的最佳修飾條件為0.9 V電解250 s；最佳電泳條件為：硼酸-鹽酸緩沖體系（pH=6.0，25 mmol·L-1），電泳電壓為10 kV，檢測(cè)電位為+1.0 V。在該條件下對(duì)豬肉樣品進(jìn)行測(cè)定，證明新法制備的修飾電極比裸電極具有給高的靈敏度，使用壽命更長，且抗干擾能力更強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：碳纖維簇微盤電極 區(qū)帶毛細(xì)管電泳 化學(xué)修飾電極 β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑

中圖分類號(hào)：R974+.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-098X（2017）07（c）-0209-04

毛細(xì)管電泳是一種具有耗樣少、效率高等優(yōu)點(diǎn)的分離方法，在各領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用[1-2]。碳纖維簇微盤電極是一種電化學(xué)檢測(cè)法較為常用的微電極[3-4]，但是由于其具有較強(qiáng)的吸附性而不耐用，因而對(duì)其進(jìn)行修飾改進(jìn)既可以延長單個(gè)電極的使用壽命，也可以提高毛細(xì)管電泳電化學(xué)檢測(cè)法的檢測(cè)性能。該實(shí)驗(yàn)采用電解法對(duì)自制碳纖維簇微盤電極進(jìn)行修飾，采用沙丁胺醇（SAL）、克倫特羅（CLB）和萊克多巴胺（RAC）作為驗(yàn)證待測(cè)物，運(yùn)用毛細(xì)管電泳電化學(xué)檢測(cè)法分離檢測(cè)豬肉樣品中上述3種待測(cè)物，證明該修飾電極比裸電極使用壽命更長，檢測(cè)限更低，穩(wěn)定性更好。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

MPI-A型毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀（西安瑞邁分析儀器有限公司）；KQ118型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；25 μm彈性石英毛細(xì)管（外徑375 μm，永年縣銳灃色譜器件有限公司）；250 μm彈性石英毛細(xì)管（外徑625 μm，永年縣銳灃色譜器件有限公司）；三電極體系：自制修飾碳纖維簇微盤電極（工作電極），鉑片電極（輔助電極），飽和甘汞電極（參比電極）。

1.2 材料與試劑

碳纖維（山東工業(yè)大學(xué)碳纖維研究中心），沙丁胺醇（中國食品藥品檢定研究院，99.7 %），鹽酸克侖特羅（阿拉丁，98 %），鹽酸萊克多巴胺（Dr.Ehrenstorfer，98 %），硼酸（AR，天津市博迪化工有限公司），四硼酸鈉（AR，天津市鼎盛鑫化工有限公司），氫氧化鈉（AR，天津市博迪化工有限公司），聚二烯丙基二甲基氯化銨（PDDA）（Mw=100 000-200000 g·mol-1，20%水溶液，Aldrich），鐵氰化鉀（AR，天津市廣成化學(xué)試劑），氯化鐵（AR，天津市瑞金特化學(xué)品有限公司），502膠，改性丙烯酸酯膠粘劑（302膠）。

實(shí)驗(yàn)用水均為FBZ6002-UP 型純水機(jī)（富勒姆）制備所得二次超純水。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 碳纖維簇微盤電極的制備與處理

裁取一簇5 cm長的碳纖維約20根，浸于無水乙醇中超聲清洗5 min后，晾干備用。裁取250 μm彈性石英毛細(xì)管約3 cm，將碳纖維滴涂丙酮后塞滿其中。將充滿碳纖維的毛細(xì)管一端接觸502膠幾秒鐘取出晾干，插入銅絲用302膠固定。以302膠包裹電極外側(cè)用于保護(hù)[5]。

1.3.2 修飾電解液的配制

A液：25 mmol·L-1的鐵氰化鉀溶液。

B液：0.025 mmol·L-1的PDDA與6.25 mmol·L-1的氯化鐵混合溶液。

修飾電解液：按照體積比A∶B=1∶4的比例分別取A液和B液，混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3.3 PDDA保護(hù)的納米普魯士藍(lán)修飾碳纖維簇微盤電極的制備

以打磨清洗好的CFMBE為工作電極組裝三電極體系，置于修飾電解液中在0.9 V電壓下電解250 s，用水清洗后晾干即得PDDA保護(hù)的納米普魯士藍(lán)修飾碳纖維簇微盤電極（P-PB/CFMBE）。

1.3.4 分離檢測(cè)條件

實(shí)驗(yàn)選擇pH=6.0、濃度為25 mmol·L-1的硼酸-鹽酸體系為緩沖液，采用的分離電壓為10 kV，檢測(cè)電勢(shì)為+1.0 V，12 kV電動(dòng)進(jìn)樣10 s。

2 結(jié)果與討論

2.1 納米普魯士藍(lán)修飾電極的優(yōu)勢(shì)

2.1.1 納米普魯士藍(lán)對(duì)β2-腎上腺素激動(dòng)劑的電催化作用

在SAL、CLB和RAC的濃度均為1.2×10-4 mol·L-1、pH為9.3以及硼酸根離子濃度為50 mmol·L-1的硼砂-硼酸溶液中，分別以CFMBE和P-PB/CFMBE為工作電極進(jìn)行循環(huán)伏安測(cè)試，所得曲線如圖1所示。由圖可以清晰地看出，修飾后的電極信號(hào)響應(yīng)（曲線2）比裸電極（曲線1）高出將近一個(gè)數(shù)量級(jí)。對(duì)比可見，電解法可以有效修飾上納米普魯士藍(lán)，且納米普魯士藍(lán)具有很優(yōu)秀的電催化氧化效應(yīng)；但此pH下帶負(fù)電荷的RAC離子被靜電屏蔽效應(yīng)屏蔽[6]，峰型更不明顯。綜上，P-PB/CFMBE具有優(yōu)秀的電催化能力，同時(shí)要想做到同步檢測(cè)必須調(diào)整pH使三種β2-腎上腺素激動(dòng)劑均帶正電荷。

2.1.2 電極穩(wěn)定性

為驗(yàn)證修飾電極的穩(wěn)定性，將CFMBE與P-PB/CFMBE分別置于鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液中進(jìn)行循環(huán)伏安掃描若干圈，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。由圖可知，P-PB/CFMBE在連續(xù)工作條件下具有更優(yōu)秀的穩(wěn)定性，電極壽命更長。

2.2 修飾時(shí)間的選擇

將不同修飾時(shí)間得到的P-PB/CFMBE置于鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液中進(jìn)行循環(huán)伏安測(cè)試。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在50～250 s之間，隨著修飾時(shí)間延長（除200 s外），氧化還原峰電位差減小，峰電位整體負(fù)移；當(dāng)修飾時(shí)間大于300 s時(shí)，在選定窗口（-0.2～+0.8 V）內(nèi)沒有氧化還原峰。綜合上述及實(shí)際分離實(shí)驗(yàn)，修飾時(shí)間選250 s。

2.3 檢測(cè)緩沖液的選擇

2.3.1 緩沖液pH的選擇

根據(jù)SAL等三種待測(cè)物的pKa[7]以及三價(jià)鐵離子沉淀pH，該實(shí)驗(yàn)研究了pH 4.0～8.0對(duì)三種物質(zhì)的峰電流（ip）、遷移時(shí)間（tm）和實(shí)際分離檢測(cè)效果的影響。SAL的峰電流隨著pH的增大先升高后降低，在pH=5.5時(shí)有極大值；CLB的峰電流隨pH的增大而降低，但降低速率很小；RAC的峰電流隨pH的增大先升高后急速降低，在pH=5.0時(shí)有極大值，當(dāng)7.06.0時(shí)，RAC的遷移時(shí)間急速增加；pH=6.5時(shí)，RAC與CLB的遷移時(shí)間最接近；pH=7.0時(shí)，RAC與SAL的遷移時(shí)間差異最??；pH>7.0時(shí)，SAL等三種待測(cè)物的出峰順序由最初的RAC、CLB、SAL轉(zhuǎn)變?yōu)镃LB、SAL、RAC，峰間距逐漸變大。因此，7.0

綜上，雖然在堿性環(huán)境中更有利于SAL等三種待測(cè)物的分離檢測(cè)，但RAC的特征峰很可能被雜質(zhì)峰掩蔽，因此實(shí)際上不利于復(fù)雜條件下的同步檢測(cè)。因此，實(shí)驗(yàn)選擇pH=6.0作為檢測(cè)緩沖液的pH條件。

2.3.2 緩沖液種類的選擇

該實(shí)驗(yàn)考察了磷酸鹽和硼酸-鹽酸兩種緩沖體系對(duì)待測(cè)物進(jìn)行了考察。雖然磷酸鹽體系的譜圖基線更加穩(wěn)定，但是其具有管壁吸附效應(yīng)，不利于實(shí)際應(yīng)用。因此，實(shí)驗(yàn)選擇硼酸-鹽酸體系作為檢測(cè)緩沖液。

2.3.3 緩沖液濃度的選擇

該實(shí)驗(yàn)在緩沖液濃度范圍在5～200 mmol·L-1的區(qū)間內(nèi)緩沖液濃度對(duì)SAL等三種待測(cè)物的遷移時(shí)間的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，SAL等的遷移時(shí)間均隨著緩沖液濃度的升高而變長。當(dāng)緩沖液濃度過低時(shí)，不利于分離；當(dāng)濃度過高時(shí)，基線很不穩(wěn)定。綜合基線穩(wěn)定程度等實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)本著盡量縮減檢測(cè)時(shí)間的原則將緩沖液濃度定為25 mmol·L-1。

2.4 分離電壓的選擇

分離電壓（VS）越高，SAL等三種待測(cè)物的遷移時(shí)間越短。但是當(dāng)電壓高于12 kV時(shí)，焦耳熱效應(yīng)明顯，基線穩(wěn)定性下降。因此，實(shí)驗(yàn)選擇10 kV作為分離電壓。

2.5 進(jìn)樣電壓與進(jìn)樣時(shí)間的選擇

我們考察了進(jìn)樣電壓2～15 kV、進(jìn)樣時(shí)間3～10 s分別對(duì)峰電流和峰形的影響。結(jié)果表明，進(jìn)樣電壓12 kV、進(jìn)樣時(shí)間10 s即可滿足實(shí)驗(yàn)要求。

2.6 線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍和檢測(cè)限

配制濃度范圍為10-2～10-10 mol·L-1的SAL、CLB和RAC混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在選定的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行分離檢測(cè)；每個(gè)濃度平行進(jìn)樣5次，各組分平均峰高記作ip，以-lg c對(duì)-lg ip做線性回歸，計(jì)算所得的線性方程、線性范圍及檢測(cè)限等如表1所示。在其他實(shí)驗(yàn)條件相同的條件下，采用CFMBE作為工作電極，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)，相關(guān)數(shù)據(jù)同列于表1。對(duì)比可知，P-PB/CFMBE的性能更優(yōu)秀。鑒于該實(shí)驗(yàn)條件并非以CFMBE為工作電極的最佳實(shí)驗(yàn)條件，參考對(duì)比本實(shí)驗(yàn)室以前的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)[8]可知，該實(shí)驗(yàn)制得的P-PB/CFMBE具有更低的檢測(cè)限。

2.7 樣品測(cè)定和回收率

在選定的實(shí)驗(yàn)條件下，將新鮮制備的豬肉提取液進(jìn)行電泳分析，電泳圖如圖3中曲線I所示。另取少量制備出的提取液，加入適量SAL、CLB和RAC，平行5次進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。豬肉樣品溶液加標(biāo)電泳結(jié)果如圖3中曲線III所示，曲線II為采用CFMBE為工作電極的對(duì)比試驗(yàn)。如圖3中曲線IV所示，三種β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑成功有效分離，通過標(biāo)準(zhǔn)加入法確定了a峰、b峰、c峰分別為RAC、CLB和SAL的特征峰，a峰為RAC的副峰。曲線III與曲線II相比，三種待測(cè)物的信號(hào)響應(yīng)明顯增強(qiáng)，證明納米普魯士藍(lán)對(duì)該三種物質(zhì)的電化學(xué)反應(yīng)確有催化作用；使用P-PB/CFMBE的基線比使用CFMBE時(shí)更加穩(wěn)定，證明納米普魯士藍(lán)可以屏蔽豬肉提取液中帶負(fù)電荷的雜質(zhì)粒子。

通過待測(cè)物的樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)可知，待測(cè)物的平均回收率在99%～102 %之間，說明本方法制備的修飾電極具有較高的準(zhǔn)確度，重現(xiàn)性較好。

3 結(jié)語

該實(shí)驗(yàn)采用電解法在碳纖維簇微盤電極表面修飾聚二烯丙基二甲基氯化銨保護(hù)的納米普魯士藍(lán)，用制備所得的納米普魯士藍(lán)修飾電極檢測(cè)三種β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，該方法制得的修飾電極可以有效屏蔽負(fù)離子雜質(zhì)的干擾，具有更長的使用壽命，更好的重現(xiàn)性，更低的檢測(cè)限，在檢測(cè)工作中可以替代裸碳纖維簇微盤電極。

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