曾憲瑞

APE、VEGF在宮頸癌組織中的表達(dá)及其與MVD的關(guān)系

曾憲瑞

目的探討宮頸癌組織中脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶(APE)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)及其與微血管密度(MVD)的關(guān)系。方法50份宮頸癌術(shù)后未經(jīng)放化療治療的腫瘤石蠟組織標(biāo)本設(shè)為宮頸癌組, 50份宮頸上皮內(nèi)瘤變組織蠟塊設(shè)為宮頸上皮內(nèi)瘤變組, 50份子宮肌瘤行子宮切除宮頸正常組織臘塊設(shè)為對(duì)照組, 采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)三組APE、VEGF、MVD指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)并對(duì)比。結(jié)果APE在宮頸癌組織中, 與組織分化、臨床分期有關(guān), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)；與病理類型無(wú)關(guān), 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在宮頸癌組織中, APE與VEGF呈正相關(guān)性(r=0.796, P＜0.01), APE與MVD呈正相關(guān)性(r=0.606, P＜0.01), VEGF與MVD呈正相關(guān)性(r=0.651, P＜0.01)。結(jié)論APE在誘導(dǎo)VEGF表達(dá)中有參與, 并對(duì)腫瘤血管生成有促進(jìn)作用, VEGF、APE均可作為對(duì)宮頸癌預(yù)后進(jìn)行監(jiān)測(cè)的指標(biāo), 也可用于癌前病變的評(píng)估。

脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；宮頸癌組織；微血管密度

APE屬多功能蛋白范疇, 其異常表達(dá)、功能的改變同神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病、腫瘤等病理過(guò)程關(guān)聯(lián)密切。VEGF為最為重要的一個(gè)對(duì)腫瘤血管生成發(fā)揮刺激作用的生長(zhǎng)因子［1-3］。本文經(jīng)免疫組織化學(xué)方法對(duì)正常組織、宮頸癌組織等處的VEGF、APE表達(dá)進(jìn)行檢測(cè), 分析其與MVD的關(guān)系, 為宮頸癌預(yù)后的監(jiān)測(cè)提供準(zhǔn)確參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年2月本院宮頸癌術(shù)后未經(jīng)放化療治療的腫瘤石蠟組織標(biāo)本設(shè)為宮頸癌組, 其中高分化7份,中分化20份, 低分化23份；依據(jù)2000年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)分級(jí), 0期6份, Ⅰ期18份, ≥ Ⅱ期26份。病理類型：腺癌16例, 鱗癌34例。另選取50份宮頸上皮內(nèi)瘤變組織蠟塊設(shè)為宮頸上皮內(nèi)瘤變組, 50份子宮肌瘤行子宮切除宮頸正常組織臘塊設(shè)為對(duì)照組。均經(jīng)常規(guī)切片處理,厚度為4 μm, 均經(jīng)病檢和HE染色確診。

1.2 方法 準(zhǔn)備鼠抗人APE單克隆抗體, 以1∶50作為工作濃度；準(zhǔn)備Pv-6000試劑盒、鼠抗人CD34單克隆抗體、VEGF單克隆抗體。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格根據(jù)說(shuō)明書(shū)要求開(kāi)展。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 依據(jù)Mark Kelley實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)對(duì)APE染色結(jié)果進(jìn)行評(píng)估, VEGF在細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜內(nèi)有棕褐色、棕色、淺黃色顆粒沉著, 可定義為陽(yáng)性細(xì)胞。分析經(jīng)監(jiān)測(cè)所得的陽(yáng)性細(xì)胞比例, 并依據(jù)具體的著色強(qiáng)度, 對(duì)免疫組織化學(xué)半定量計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行綜合制定。①陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)：0分：陽(yáng)性細(xì)胞＜1%；1分：陽(yáng)性細(xì)胞占1%～10%；2分：陽(yáng)性細(xì)胞占11%～50%；3分：陽(yáng)性細(xì)胞占51～80%；4分：陽(yáng)性細(xì)胞＞80%。②著色強(qiáng)度計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)：1分：著色強(qiáng)度為弱；2分：著色強(qiáng)度中等；3分：著色較強(qiáng)。上述兩分值相加, 獲取最終評(píng)估結(jié)果, 1分：可按(-)計(jì), 2～3分：可按(+)計(jì)；4～5分：可按(++)計(jì)；6～7分, 可按(+++)計(jì)。低表達(dá)組：(-)和(+)；高表達(dá)組：(++)和(+++)。被CD34抗體染成孤立的呈黃棕色顯示的內(nèi)皮細(xì)胞簇團(tuán)或內(nèi)皮細(xì)胞, 與鄰近腫瘤細(xì)胞、微血管及其他結(jié)締組織只要分開(kāi), 即可作為新微血管；結(jié)構(gòu)只要不相連, 可將分支結(jié)構(gòu)看作一個(gè)血管。依據(jù)Weidne報(bào)道法行MVD計(jì)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用S P S S 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性檢驗(yàn)采用S p e a r m a n相關(guān)分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 A P E、V E G F、M V D同病理類型的關(guān)系 APE在宮頸癌組織中, 與組織分化、臨床分期有關(guān), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與病理類型無(wú)關(guān), 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。相較于高、中分化宮頸癌, APE在低分化宮頸癌中有更高表達(dá)；相較0期及Ⅰ期, ≥Ⅱ期有更高表達(dá)；比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。VEGF及MVD計(jì)數(shù)與組織分化、臨床分期無(wú)關(guān), 差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；病理類型腺癌VEGF及MVD計(jì)數(shù)高于鱗癌, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 A P E、V E G F、M V D同病理類型的關(guān)系 ［n(%)

表1 A P E、V E G F、M V D同病理類型的關(guān)系 ［n(%)

注：與高、中分化比較,aP＜0.05；與0、Ⅰ期比較,bP＜0.05；與鱗癌比較,cP＜0.05

臨床病理特征例數(shù)A P E高表達(dá)V E G F高表達(dá)M V D計(jì)數(shù)組織分化高73(42.9)4(57.1)33.6±4.1中2017(85.0)13(65.0)41.5±6.7低2323(100.0)a16(69.6)44.5±6.1臨床分期064(66.7)3(50.0)31.9±9.1Ⅰ1813(72.2)11(61.1)42.5±5.7≥Ⅱ2626(100.0)b19(73.1)45.9±6.2病理類型鱗癌3429(85.3)19(55.9)33.5±6.7腺癌1614(87.5) 14(87.5)c46.8±8.3c

2.2 A P E與V E G F在宮頸癌組織中的表達(dá)同M V D的關(guān)系 在宮頸癌組織中, APE與VEGF呈正相關(guān)性(r=0.796, P＜0.01), APE與MVD呈正相關(guān)性(r=0.606, P＜0.01), VEGF與MVD呈正相關(guān)性(r=0.651, P＜0.01)。

2.3 A P E、V E G F及M V D在不同組織中的表達(dá) 經(jīng)測(cè)定, APE陽(yáng)性產(chǎn)物呈細(xì)顆粒狀顯示, 呈棕褐或棕黃色, 以在胞核定位為主, 間質(zhì)也存在一定表達(dá)的情況。宮頸癌組織中, 呈高表達(dá)43份, 占86%；呈低表達(dá)7份, 占14%。VEGF陽(yáng)性表達(dá)經(jīng)觀察為棕黃色顆粒, 以在胞質(zhì)定位為主, 胞膜也存在一定表達(dá)的情況；CD34陽(yáng)性產(chǎn)物于血管內(nèi)皮細(xì)胞質(zhì)定位。APE和VEGF陽(yáng)性表達(dá)率在對(duì)照組、宮頸上皮內(nèi)瘤變組、宮頸癌組組織中呈依次遞增趨勢(shì)。宮頸癌組陽(yáng)性表達(dá)率高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組和對(duì)照組, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)；宮頸上皮內(nèi)瘤變組陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。宮頸癌組MVD計(jì)數(shù)高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組和對(duì)照組, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05) ；宮頸上皮內(nèi)瘤變組MVD計(jì)數(shù)高于對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 A P E、V E G F及M V D在不同組織中的表達(dá) ［n(%)

表2 A P E、V E G F及M V D在不同組織中的表達(dá) ［n(%)

注：與對(duì)照組比較,aP＜0.05；與宮頸上皮內(nèi)瘤變組比較,bP＜0.05

組別例數(shù)A P E高表達(dá)V E G F高表達(dá)M V D計(jì)數(shù)對(duì)照組503(6.0)04.9±1.1宮頸上皮內(nèi)瘤變組5016(32.0)a12(24.0)a19.4±6.2a宮頸癌組5043(86.0)ab33(66.0)ab41.4±2.8ab

3 討論

APE同細(xì)胞的損傷修復(fù)、增殖均具一定相關(guān)性, 在腫瘤病程中所起作用顯著。其在機(jī)體內(nèi)的表達(dá)具器官和組織特異性, 因分化程度和功能存在區(qū)別, 共包括胞核表達(dá)、胞質(zhì)表達(dá)、核質(zhì)共表達(dá)3種形式, 主要功能定位同胞核存在密切關(guān)聯(lián)［4-6］。有研究示［7,8］, 在前列腺癌、肺癌等諸多腫瘤類型中, APE均可過(guò)表達(dá)和(或)擴(kuò)增表達(dá)。本次研究中, APE陽(yáng)性表達(dá)率在對(duì)照組、宮頸上皮內(nèi)瘤變組、宮頸癌組組織中呈依次遞增趨勢(shì)。宮頸癌中有最高表達(dá), 且分化程度越低, 表達(dá)率越高, 表明此指標(biāo)同病程發(fā)展關(guān)聯(lián)密切, 可作為腫瘤惡性程度鑒別的標(biāo)志［9-11］。

另外, VEGF可對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和分裂加以刺激,促某些基因在內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)改變, 使微血管通透性增加,進(jìn)而為腫瘤血管的轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)提供有利條件［12-15］。通過(guò)對(duì)MVD值測(cè)量, 可對(duì)腫瘤血管生成程度評(píng)價(jià), 正確反映腫瘤的侵襲性及惡性程度, 本次研究顯示, VEGF在腺癌中有較高表達(dá), MVD也高于鱗癌, MVD計(jì)數(shù)與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān), 表明VEGF經(jīng)對(duì)腫瘤血管生成途徑誘導(dǎo), 在宮頸癌病程中參與。

綜上所述, APE在誘導(dǎo)VEGF表達(dá)中有參與, 并對(duì)腫瘤血管生成有促進(jìn)作用, VEGF、APE均可作為對(duì)宮頸癌預(yù)后進(jìn)行監(jiān)測(cè)的指標(biāo), 也可用于癌前病變?cè)u(píng)估。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.14.015

2017-05-19］

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