唐利飛 劉敏杰

瘦素及瘦素受體與子宮內(nèi)膜異位癥關(guān)系研究

唐利飛 劉敏杰

目的探討瘦素與瘦素受體在子宮內(nèi)膜異位組織中的表達。方法選取32例子宮內(nèi)膜異位癥患者作為內(nèi)異組，并選取同期行輸卵管結(jié)扎術(shù)的32例婦女作為對照組，分別采取兩組患者的血清、腹腔液（PF）和腹膜組織（PI）。內(nèi)異組患者切除子宮內(nèi)膜異位囊腫，切取囊腫組織（OE），并吸取囊腫液（EF）。采用Western blot法測定PI和OE瘦素及瘦素受體表達水平。采用ELISA法測定血清、PF及EF中的瘦素水平。結(jié)果兩組PI中瘦素和瘦素受體表達水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），而內(nèi)異組OE中瘦素和瘦素受體表達水平均較PI中瘦素及瘦素受體表達水平明顯增高（均P＜0.05）。兩組血清及PF中瘦素水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。但內(nèi)異組EF中瘦素水平明顯高于血清及PF中瘦素水平，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。內(nèi)異組患者OE與EF、PI與PF、OE與PF的瘦素表達水平均呈正相關(guān)（均P＜0.05）。OE中瘦素與瘦素受體、EF瘦素與OE瘦素受體、PI中瘦素與瘦素受體、PF瘦素與PI瘦素受體均呈正相關(guān)（均P＜0.05），而PF瘦素與OE瘦素受體表達水平無相關(guān)性（P＞0.05）。結(jié)論瘦素通過與瘦素受體之間的相互調(diào)節(jié)作用在子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)病過程中扮演了非常重要的角色。

子宮內(nèi)膜異位癥瘦素瘦素受體

瘦素是一種脂肪細胞衍生蛋白，其主要生理功能是調(diào)節(jié)機體對食物的攝取和能量的消耗[1]。有研究表明瘦素在炎癥、血管再生以及生殖功能等生理進程中起到了重要的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用[2]。瘦素受體引導(dǎo)瘦素通過JAK2/STAT3和ERK信號通路刺激子宮內(nèi)膜異位上皮細胞的生長，從而誘發(fā)子宮內(nèi)膜異位癥[3]。瘦素與炎癥、血管再生之間的關(guān)系，加上它有可能在中樞和性腺水平上影響生殖功能，因此它與子宮內(nèi)膜異位癥之間的關(guān)系得到了廣泛的研究，現(xiàn)報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象選取2013年7月至2015年3月在本院診治的32例子宮內(nèi)膜異位癥患者作為內(nèi)異組，并選取同期在本院行輸卵管結(jié)扎術(shù)的婦女32例作為對照組。內(nèi)異組年齡23～51（30.6±1.5）歲，BMI 20～30（21.6± 1.5）kg/m2；對照組年齡21～49（30.2±1.8）歲，BMI 20～30（20.9±1.3）kg/m2。兩組患者年齡、BMI等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。內(nèi)異組行腹腔鏡手術(shù)者30例，另2例患者由于盆腔粘連嚴重，出血多轉(zhuǎn)行開腹手術(shù)；對照組均行腹腔鏡手術(shù)。內(nèi)異組納入標(biāo)準：（1）卵巢單側(cè)或者雙側(cè)子宮內(nèi)膜異位囊腫，（2）正在準備開腹或腹腔鏡腹腔深部子宮內(nèi)膜異位手術(shù)患者；對照組納入標(biāo)準：（1）正在準備開腹或腹腔鏡結(jié)扎手術(shù)患者，（2）無任何子宮內(nèi)膜異位癥并且無卵巢病變。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準和患者知情同意。

1.2 樣本的準備及手術(shù)方法兩組受檢者在麻醉前經(jīng)靜脈抽取5ml血液于抗凝管中，靜置30min后，3 000r/min離心10min，取上清液，-70℃保存。兩組行腹腔鏡手術(shù)者采用氣管插管靜脈復(fù)合麻醉，頭低腳高15°～20°，膀胱截石位，安放舉宮器，臍部10mm Trocar穿刺，置入鏡頭，常規(guī)取2、3、4穿刺孔[4]，首先吸取盆腔子宮直腸陷凹處的腹腔液（PF）（均-70℃保存）備用；留取側(cè)盆壁、無粘連、肉眼觀察無病變的腹膜組織（PI），用10%中性甲醛溶液固定。內(nèi)異組患者在腹腔鏡下剝除異位囊腫，分離周圍粘連，卵巢表面電凝或直接剪開卵巢接近囊腫壁，分離卵巢與囊腫，提取囊腫組織（OE），必要時可穿刺提取囊腫液（EF）（-70℃保存）。行開腹手術(shù)患者選用腰硬聯(lián)合麻醉，直視盆腔，提取相應(yīng)組織及組織液。

1.3 Western blot法測定組織瘦素及瘦素受體表達水平將大約400mg PI樣本或OE樣本加入到400μl 1% NP-40裂解液中（上海江萊生物科技有限公司）混勻，加入一定量的蛋白酶抑制劑后于4℃，10 000r/min下離心5min，測定上清液中的蛋白濃度。量取含蛋白20μg的上清液，加入到8%SDS聚丙烯酰胺凝膠中進行垂直電泳測定，然后轉(zhuǎn)移至硝化纖維素膜上進行轉(zhuǎn)印。硝化纖維素膜分別與一抗為鼠抗人瘦素多克隆抗體（BS-0109R）和兔抗人Ob-R單克隆抗體（BS-0108M）（武漢博奧森公司）于4℃下過夜孵育(1∶200)。蛋白表達采用β-actin作為標(biāo)準對照，所有條帶經(jīng)化學(xué)發(fā)光分析儀可視化后記錄。

1.4 血清等瘦素水平的測定提前20min從冰箱中取出血清、PF及EF標(biāo)本，平衡至室溫，采用ELISA法（試劑盒為武漢伊萊瑞特生物科技有限公司生產(chǎn)）測定血清、PF及EF中的瘦素水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件。計量資料以表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗；兩變量間相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者PI和內(nèi)異組OE瘦素與瘦素受體表達水平的比較Western blot法檢測所得蛋白表達水平電泳圖見圖1。將蛋白表達轉(zhuǎn)換成相對灰度值進行比較發(fā)現(xiàn)，兩組患者PI中瘦素和瘦素受體表達水平的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。而內(nèi)異組OE中瘦素和瘦素受體表達水平分別為（30.23±2.28）和（12.88± 2.63）ng/ml，均較PI中瘦素及瘦素受體表達水平明顯增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。

圖1 兩組患者PI瘦素與瘦素受體蛋白表達電泳圖

表1 兩組患者PI中瘦素與瘦素受體表達水平的比較（ng/ml）

2.2 兩組患者血清與PF中瘦素水平的比較兩組患者血清及PF中瘦素水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表2。內(nèi)異組EF中瘦素水平為（75.19± 0.33）ng/ml，明顯高于血清和PF中瘦素水平，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）。

表2 兩組患者血清與PF中瘦素水平的比較（ng/ml）

2.3 內(nèi)異組患者組織間瘦素與瘦素及瘦素與瘦素受體水平的相關(guān)性分析內(nèi)異組患者OE與EF、PI與PF、OE與PF的瘦素表達水平均呈正相關(guān)（均P＜0.05）。OE中瘦素與瘦素受體、EF瘦素與OE瘦素受體、PI中瘦素與瘦素受體、PF瘦素與PI瘦素受體均呈正相關(guān)（均P＜0.05），而PF瘦素與OE瘦素受體表達水平無相關(guān)性（P＞0.05），見表3。

表3 內(nèi)異組患者組織間瘦素與瘦素及瘦素與瘦素受體的相關(guān)性分析

3 討論

瘦素是由肥胖基因表達的主要存在于脂肪組織中的一種激素，因其在基礎(chǔ)代謝、食物攝入及生殖功能等方面的作用而被認識并研究，隨后研究發(fā)現(xiàn)其具有血管再生、促進炎癥以及免疫調(diào)節(jié)的作用[3-5]。近年來研究者發(fā)現(xiàn)其與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病存在著一定的聯(lián)系。

近期有研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜中瘦素與瘦素受體的表達水平要明顯高于正常的子宮內(nèi)膜，同時這項研究發(fā)現(xiàn)用瘦素來治療子宮內(nèi)膜異位癥時，能夠促進瘦素受體轉(zhuǎn)錄RNA的表達，表明在子宮內(nèi)膜異位癥患者瘦素系統(tǒng)中涉及到自分泌和旁分泌兩種模式[6]。這也就意味著子宮內(nèi)膜異位癥所屬組織可能既是瘦素的來源，又是瘦素潛在的靶點。

大量研究報道了子宮內(nèi)膜異位癥患者血清與PF中的瘦素水平，但是結(jié)果卻存在著一定的矛盾性，有些研究認為與健康人員相比，子宮內(nèi)膜異位癥患者血清與PF中的瘦素水平并無什么變化[7-8]，但有些研究卻認為子宮內(nèi)膜異位癥患者的瘦素水平比健康人員要高[9-10]。此外，關(guān)于PF瘦素水平與子宮內(nèi)膜異位癥嚴重程度之間關(guān)聯(lián)性也存有爭議，一些研究結(jié)果呈正相關(guān)[11]，但另一些研究結(jié)果卻呈負相關(guān)[12]。本研究中，ELISA法測定結(jié)果顯示兩組受檢者血清以及PF中的瘦素水平無明顯差異，但EF中的瘦素水平明顯高于血清以及PF中的水平，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。本研究結(jié)果表明子宮內(nèi)膜異位癥患者嚴重程度是有關(guān)聯(lián)的，可能與瘦素水平呈正相關(guān)。

內(nèi)異組患者OE與EF、PI與PF、OE與PF的瘦素表達水平呈正相關(guān)。OE中瘦素與瘦素受體、EF瘦素與OE瘦素受體、PI中瘦素與瘦素受體、PF瘦素與PI瘦素受體均呈正相關(guān)，這些相關(guān)性結(jié)果表明瘦素受體在OE或PI中的表達可能是EF和PF中瘦素水平所引導(dǎo)的。綜上所述，瘦素通過與瘦素受體之間的相互調(diào)節(jié)作用在子宮內(nèi)膜異位囊腫的發(fā)病過程中扮演了重要的角色。

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Expression of leptin and leptin receptor in endometriosis

TANG Lifei,LIU Minjie.Department of Gynaecology and Obstetrics, Ningbo Yinzhou People's Hospital,Ningbo 315040,China

ObjectiveTo investigate the expression of leptin and leptin receptor in endometriosis.MethodsThirty-two patients with endometriosis(EM group)and 32 women undergoing tubal ligation(control group)were enrolled in the study.The serum,peritoneal fluid(PF),peritoneal biopsy(PI)samples were collected in both groups,the endometriosis cyst(OE)and aspiration of endometriosis cysts(EF)taken duting endometriosis resection were collected in EM group.The expression levels of leptin and leptin receptor in PI and OE were measured by Western blot,the levels of leptin in serum,PF and EF were measured by human leptin ELISA kit.ResultsThe levels of leptin and leptin receptor in PI were not statistically significant between two groups(all P＞0.05).In EM group the expression of leptin and leptin receptor in OE were significantly higher than that in PI(all P＜0.05).There were no significant difference in serum and PF leptin levels between the two groups(all P＞0.05).But in EM group the levels of leptin in EF were significantly higher than those in serum and PF(all P＜0.01).In EM group there were positive correlations in expression levles of leptin and leptin receptor between OE and EF,PI and PF,OE and PF(all P＜0.05),there were positive correlations between leptin and leptin receptor in OE,between leptin in EF and leptin receptor in OE,between leptin and leptin receptor in PI,between leptin in PF and leptin receptor in PI(all P＜0.05),while there was no correlation between leptin in PF and leptin receptor in OE(P＞0.05).ConclusionThe interaction of leptin and leptin receptor may play an important role in the pathogenesis of endometriosis.

EndometriosisLeptinLeptin receptor

2016-01-06）

（本文編輯：陳麗）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.13.2016-31

315040寧波市鄞州人民醫(yī)院婦產(chǎn)科

唐利飛，E-mail：15084994@qq.com