田 蜜 蔣雪云 曹麗歌 羅 葵 薛 冰*

(1.首都醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗與測試中心，北京 100069；2. 首都醫(yī)科大學(xué)化學(xué)生物學(xué)與藥學(xué)院，北京 100069)

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不同取血方式及性別對成年Wistar大鼠11種血液生物化學(xué)指標(biāo)的影響

田 蜜1蔣雪云2曹麗歌1羅 葵1薛 冰1*

(1.首都醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗與測試中心，北京 100069；2. 首都醫(yī)科大學(xué)化學(xué)生物學(xué)與藥學(xué)院，北京 100069)

目的 探討尾靜脈、腹主動脈和下腔靜脈取血對成年Wistar大鼠部分血液生物化學(xué)指標(biāo)的影響。方法 34只成年Wistar大鼠按性別等分2組，各組麻醉后依次采集尾靜脈，腹主動脈和下腔靜脈血，血清用7180E型全自動生物化學(xué)分析儀測定11種血液生物化學(xué)指標(biāo)，包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase， ALT)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase， AST)、尿素氮(urea nitrogen， BUN)、血糖(glucose， GLU)、總蛋白(total protein， TP)、白蛋白(albumin， ALB)、血肌酐(creatinine， Cr)、三酰甘油(triglyceride， TG)、總膽固醇(total cholesterol， TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol， HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol， LDL-C)。結(jié)果 在雌性Wistar大鼠中，尾靜脈和下腔靜脈血中GLU，TP和Cr差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；尾靜脈和腹主動脈血中GLU、TP、ALB、Cr、TG、TC和HDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。雄性Wistar大鼠中，尾靜脈和下腔靜脈血中ALT、AST、GLU、TP和Cr差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；尾靜脈和腹主動脈血中ALT、AST、GLU、TP、ALB、TG、TC、HDL-C和LDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。不同性別之間：尾靜脈取血時AST、TC和LDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；下腔靜脈取血時TP、ALB、Cr、TG、TC和LDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；腹主動脈取血時TP、ALB、Cr、TC和LDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 不同取血方式和性別會影響成年Wistar大鼠的血液生物化學(xué)指標(biāo)。

尾靜脈；腹主動脈；下腔靜脈；生物化學(xué)指標(biāo)；Wistar大鼠

大鼠的血液生物化學(xué)指標(biāo)可表征其肝功能、腎功能，血糖和血脂濃度等，在醫(yī)學(xué)研究中有廣泛的用途[1]。但這些指標(biāo)會受到多種因素的影響，包括年齡[1-3]、性別[1，3-5]、是否麻醉[6-8]、取血方式[6，9-10]以及動靜脈血的種類[9，11-12]等。尾靜脈取血是重要的取血方式，優(yōu)點是對動物的損傷較小，采樣方便且可連續(xù)多次采樣，在研究中應(yīng)用廣泛[13]。但尾靜脈取血通常需要擠壓尾部血管和組織，其血液生物化學(xué)指標(biāo)是否與靜脈或動脈取血結(jié)果相當(dāng)尚無研究報道。本研究比較了尾靜脈取血，下腔靜脈和腹主動脈取血所測得11種生物化學(xué)指標(biāo)的差異，可為選擇不同取血方式及動物性別時提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

34只12周齡的Wistar成年大鼠由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，雄性體質(zhì)量(231±15)g，雌性體質(zhì)量(210±5)g，動物生產(chǎn)合格證號：SCXK(京)2012-0001，首都醫(yī)科大學(xué)實驗動物SPF級動物實驗室[合格證號：SYXK(京)2010-0020]飼養(yǎng)。室內(nèi)溫度(23±2) ℃，相對濕度(50±20)%。北京科澳協(xié)力飼料有限公司真空包裝無菌飼料，合格證號：SCXK(京)2014-0010。

1.2 儀器與試劑

日本日立公司7180E全自動生物化學(xué)分析儀、離心機(DT5-6，北京時代北利離心機有限公司)、BD公司真空采血管(含分離膠)、BS124S天平(型號BS124S，賽多利斯)。

谷氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase， ALT)(批號20160201，首醫(yī)科技)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase， AST)(批號21060201，首醫(yī)科技)、血糖(glucose， GLU)(批號20160302，首醫(yī)科技)、總蛋白(total protein， TP)(批號20151125，首醫(yī)科技)、白蛋白(albumin， ALB)(批號20160323，首醫(yī)科技)、尿素氮(urea nitrogen， BUN)(批號20160302，首醫(yī)科技)、血肌酐(creatinine， Cr)(批號20160308，首醫(yī)科技)、總膽固醇(total cholesterol， TC)(批號20151111，首醫(yī)科技)、三酰甘油(triglyceride， TG)(批號20151116，首醫(yī)科技)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol， HDL-C)(批號20160205，首醫(yī)科技)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol， LDL-C)(批號20160323，首醫(yī)科技)、高低密度脂蛋白定標(biāo)液(批號20160203，首醫(yī)科技)由北京首醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)科技有限公司提供；生物化學(xué)質(zhì)控(中值批號174787，高值批號174801，上海羅氏公司)及定標(biāo)液(批號177960，上海羅氏公司)由羅氏診斷試劑提供；戊巴比妥(德國Merk公司)。

1.3 試劑配制

戊巴比妥在實驗前用0.9%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))氯化鈉注射液配制成1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))戊巴比妥溶液，麻醉劑量：5 mL/kg體質(zhì)量。生物化學(xué)試劑直接上機使用，定標(biāo)液，質(zhì)控品參照說明書配制。

1.4 血液樣本采集

實驗動物購入后稱質(zhì)量雌雄分籠，先觀察3～4 d。實驗前12 h禁食，采血前按雌雄分別稱質(zhì)量編號，戊巴比妥腹腔注射麻醉。仰臥位翻正反射消失后，先消毒大鼠尾部，用手術(shù)剪剪掉尾尖2～3 mm，用手從尾根向下輕擼，將血收集于離心管中至0.8 mL。將大鼠仰臥消毒后用手術(shù)剪刀沿腹正中線剪開腹腔，用小鑷子輕輕扒開血管周圍脂肪，再用棉球把覆蓋在血管上的多余脂肪擦凈，找到下腔靜脈用5 mL注射器采血1.5 mL，裝入真空采血管。用棉球按壓采血點止血，再找到腹主動脈用真空采血管直接取動脈血1.5 mL。3種血樣分別標(biāo)記，靜置30 min，3 000 r/min離心，吸取血清400 μL測定生物化學(xué)指標(biāo)。

儀器定標(biāo)后使用質(zhì)控品進行質(zhì)量控制，中、高濃度質(zhì)控品各測定3次，全部在合格范圍內(nèi)，結(jié)果見表1。

1.5 血清生物化學(xué)指標(biāo)測定

本研究共測定11項生物化學(xué)指標(biāo)，包括：ALT、AST、BUN、GLU、TP、ALB、Cr、TG、TC、HDL-C、LDL-C。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

3種取血方式所得血清的11種生物化學(xué)指標(biāo)結(jié)果見表2。雌性Wistar大鼠不同取血方式之間的比較，尾靜脈和下腔靜脈血中GLU，TP和Cr差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；下腔靜脈和腹主動脈血中GLU和TP差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；尾靜脈和腹主動脈血中GLU、TP、ALB、Cr、TG、TC和HDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義。雄性Wistar大鼠不同取血方式之間的比較，尾靜脈和下腔靜脈血中ALT、AST、GLU、TP和Cr差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；下腔靜脈和腹主動脈血中GLU和TP差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；尾靜脈和腹主動脈血中ALT、AST、GLU、TP、ALB、TG、TC、HDL-C和LDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。相同取血方式，不同性別生物化學(xué)指標(biāo)的比較，尾靜脈取血時，不同性別大鼠的AST、TC和LDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；下腔靜脈取血時，不同性別大鼠的TP、ALB、Cr、TG、TC和LDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；腹主動脈取血時，不同性別大鼠的TP、ALB、Cr、TC和LDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 11種生物化學(xué)指標(biāo)的質(zhì)控結(jié)果

*Qualification rate=100%× number of quality control samples within the acceptable range/number of total quality control samples; ALT:alanine aminotransferase；AST:aspartate aminotransferase；GLU:glucose；TP:total protein；ALB:albumin；BUN:urea nitrogen；Cr:creatinine；TC:total cholesterol；TG:triglyceride；HDL-C:high density lipoprotein-cholesterol；LDL-C:low density lipoprotein-cholesterol.

表2 不同取血方式對Wistar大鼠11種生物化學(xué)指標(biāo)的影響(17只雄性和17只雌性)

*P<0.05vsinferiorvena cave with the same gender;#P<0.05vsabdominal aorta with the same gender;△P<0.05vsthe same blood sampling method in different gender group. ALT:alanine aminotransferase；AST:aspartate aminotransferase；GLU:glucose；TP:total protein；ALB:albumin；BUN:urea nitrogen；Cr:creatinine；TC:total cholesterol；TG:triglyceride；HDL-C:high density lipoprotein-cholesterol；LDL-C:low density lipoprotein-cholesterol.

3 討論

不同性別的大鼠，各種取血方式的ALB、Cr、TC和LDL-C均差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，這與部分研究報道相似[1-3]，與部分研究相異[4-5]。此外，尾靜脈取血時雌雄大鼠的AST、TC和LDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，TC和AST的性別差異與采集腹主動脈血[1]，眼眶靜脈取血[3]和頸靜脈取血[2]所得結(jié)果一致，而LDL-C的差別尚未見文獻報道。下腔靜脈取血時雌雄大鼠的TP、ALB、Cr、TG、TC和LDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，除LDL-C無文獻報道外，其余結(jié)果均與文獻[2-3， 5]中眼眶靜脈取血的結(jié)果相似。腹主動脈取血時雌雄大鼠的TP、ALB、Cr、TC和LDL-C差異有統(tǒng)計學(xué)意義，除了LDL-C尚無研究外，其余結(jié)果均與文獻中腹主動脈取血的結(jié)果相似[1-2， 4]。

動靜脈血的生物化學(xué)指標(biāo)基本相同，動脈血中的TP值小于靜脈血，這與曹麗歌等[9]的結(jié)果相同而與嚴(yán)妍等[11]的結(jié)果相異，造成這一結(jié)果的原因目前尚不清楚，仍需進一步研究。而動脈血中的GLU大于靜脈血，這與付曉[12]的研究結(jié)果相同。動脈血將GLU等養(yǎng)料輸送到組織，其中的部分GLU被組織吸收利用而導(dǎo)致血中的GLU濃度降低。雌性大鼠中，尾靜脈中GLU、TP和Cr比下腔靜脈血中的濃度都要低，這可能是因為尾靜脈中的血經(jīng)過了最長的運輸過程，血中的GLU被組織逐漸消耗至最低濃度，同時組織釋放的TP和Cr也最大程度地累積在血中。雄性大鼠中，尾靜脈和下腔靜脈血中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)多了ALT和AST兩項，其原因尚待深入研究。

本研究的不足之處：樣本是在麻醉后的不同時間點依次采集的，有研究[13-14]表明，隨著麻醉時間的延長，BUN和GLU會上升，TP和ALB則會下降[7]。因此，麻醉后的不同取血時間可能對結(jié)果產(chǎn)生影響。此外，不同的麻醉劑也會對生物化學(xué)值產(chǎn)生不同的影響[7]。由于本研究的樣本數(shù)較小，各組只有17只動物，加之部分檢測項目的個體間變異較大，所得結(jié)果仍需更大樣本的研究加以證實。

不同采樣方式和性別均會影響Wistar大鼠的血生物化學(xué)指標(biāo)，在研究時應(yīng)加以考慮以獲得準(zhǔn)確科學(xué)的研究數(shù)據(jù)。

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編輯 慕 萌

Influence of sampling methods and gender on eleven blood biochemical indicators in adult Wistar rat

Tian Mi1， Jiang Xueyun2， Cao Lige1， Luo Kui1，Xue Bing1*

(1.MedicalExperimentandTestCenter，CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China；2.CollegeofPharmaceuticalScience，CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China)

Objective To establish the influence of different sampling methods and gender on 11 biochemical indicators in Wistar rat. Methods The blood of adult Wistar rats (17 males and 17 females) were collected from caudal vein， abdominal aorta and inferior vena cava， then 11 biochemical indicators including alanine aminotransferase (ALT)， aspartate aminotransferase(AST)， urea nitrogen (BUN)， glucose (GLU)， total protein (TP)， albumin(ALB)， creatinine (Cr)， triglyceride (TG)， total cholesterol (TC)， high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) and low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C) were analyzed by 7180E Automatic Biochemical Analyzer. Means comparison were performed byt-test or Mann-Whitney U-test depending on the distribution of the data. A value < 0.05 was regarded as statistical significance.Results In female rats， significant variation was observed on the value of GLU， TP and Cr between caudal vein and inferior vena cava serums; and significant difference was observed on the values of GLU， TP， ALB， Cr， TG， TC and HDL-C between caudal vein and abdominal aorta serums. In male rats， the value of ALT， AST， GLU， TP and Cr were significantly different between caudal vein and inferior vena cava serums; and significant difference was observed on the values of ALT， AST， GLU， TP， ALB， TG， TC， HDL-C and LDL-C between caudal vein and abdominal aorta serums. Between male and female rats， the value of AST， TC and LDL-C were significantly different in caudal vein serum; and significant variation on the value of TP， ALB， Cr， TG， TC and LDL-C were found; and the value of TP， ALB， Cr， TC and LDL-C were statistically different. Conclusion Researchers should pay more attention to the variation of biochemical indicators caused by the different sampling methods and gender in Wistar rat.

caudal vein; abdominal aorta; inferior vena cava; biochemical indicator; wistar rat

首都醫(yī)科大學(xué)校長基金技術(shù)類 (2015JS29)。This study was supported by Principal Fund of Capital Medical University (2015JS29).

時間：2017-07-16 17∶16 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.3662.r.20170716.1716.008.html

10.3969/j.issn.1006-7795.2017.04.016]

R917

2016-09-06)

*Corresponding author， E-mail：xuebing-bj@126.com