葉燁

摘 要 目的：建立同時測定氣霧劑包裝材料中17種多環(huán)芳烴的提取及遷移量的GC-MS方法。方法：采用HP-5MS色譜柱，程序升溫， 質譜檢測器采用電子轟擊源（EI），定量方法采用SIM模式。結果：17種多環(huán)芳烴在5～200 ng/ml濃度范圍內均線性良好，檢測限為2 ng/ml，回收率在74%～111%之間。

關鍵詞 氣霧劑包裝材料 多環(huán)芳烴 提取 遷移

中圖分類號：R954 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1533（2017）13-0070-04

Extraction of polycyclic aromatic hydrocarbon in metered dose inhaler packaging material and the determination of its migration

YE Ye*

（Shanghai Food and Drug Packaging material Control Center， Shanghai 201203， China）

ABSTRACT Objective： To establish a GC-MS method for simultaneous determination the extraction and migration of 17 PAHs in metered dose inhaler packaging material. Methods： A GC-MS method was established based on a column of HP-5MS with a programmed column temperature rise. The EI ion source was used for MS detector， and SIM model was used in quantification. Result： The standard curves of 17 PAHs were linear over the range of 5～200 ng/ml with detection limit of 2 ng/ml. The average recovery was in the range of 74%～111%.

KEY WORDS metered dose inhaler packaging material； polycyclic aromatic hydrocarbon （PAHs）； extraction； migration

多環(huán)芳烴（PAHs）是由兩個或多個苯環(huán)相互鍵接而形成的碳氫化合物，包括150余種化合物。其中苯并[α]芘為代表的16種PAHs因具有極強的致癌、致畸、致突變性而得到了廣泛的關注。歐盟2005年發(fā)布的《關于多環(huán)芳烴的指令》（2005/69/EC）限制了16種PAHs的使用。德國、美國、中國國標中均有關于PAHs的限量。PAHs在塑料和橡膠制品中的來源可能是加工過程的添加和原材料的殘留，如橡膠制品中含硫的硫化劑體系?，F在用于多環(huán)芳烴的測定方法主要有GC-MS法[1-3]，GC-MSMS法[4-6]，HPLC法[7-9]等，這些方法主要用于測定飲用水、土壤、食品、氣霧劑中的多環(huán)芳烴。

FDA在1999年出版的《人用藥品和生物制品的包裝容器系統》工業(yè)指導原則中，吸入氣霧劑是給藥途徑關注度最高和包裝制劑間相互作用可能性最高的藥品，因此屬于關注度最高的藥品范疇。FDA又為這類產品提供了兩個相關的指導原則。而氣霧劑使用的包裝材料系統非常復雜，主要包括耐壓容器和閥門系統。同時，現有研究文獻表明[10-11]，氣霧劑藥品中含有提取性極強的溶劑，如氫氟烷烴（HFA）類拋射劑、乙醇等。尤其對于溶液性的氣霧劑，一般使用醇類為潛溶劑，這些溶劑對于氣霧劑包裝材料中，特別是閥門系統中的多環(huán)芳烴物質有良好的溶解性能。因此研究建立了同時測定17種多環(huán)芳烴的GC-MS法，方法簡單可行，可用于不同氣霧劑包裝材料中多環(huán)芳烴的提取和遷移研究，也可進一步擴展至其他藥品包裝材料的檢測。

1 材料和方法

1.1 材料

閥門1（由A制藥企業(yè)提供），閥門2（由B制藥企業(yè)提供），閥門3（由C制藥企業(yè)提供），苯環(huán)喹溴胺定量吸入氣霧劑（采用閥門1包裝，批號201412001，由A制藥企業(yè)提供），吸入用布地奈德混懸液（采用閥門2包裝，批號141126001，由B制藥企業(yè)提供），沙美特羅替卡松氣霧劑（采用閥門3包裝，批號1502001T，由C制藥企業(yè)提供），丙酸氟替卡松吸入氣霧劑（采用閥門3包裝，批號1504004T，由C制藥企業(yè)提供）；乙腈（99.9%，批號：JA040230，Merck公司），二氯甲烷（99.8%，批號：#WXBC3464V，Sigma-Aldrich公司）；EPA16種多環(huán)芳烴混合對照液（2.0 mg/ml，批號214101348，AccuStandard）；苯并[e]芘（99.9%，批號40516）、苊-d10（98.2%，批號20525）、菲-d10（98.4%，批號20525）、蒽-d10（98.0%，批號40612）均購自Dr. Ehrenstorfer GmbH公司；苯并[α]芘-d12（101.3 mg/L，批號233834，O2Si公司）；純化水由Milli-Q系統制備。

1.2 儀器

安捷倫GC/MS聯用儀7890A/5975C（Agilent公司），電子天平XS205（梅特勒-托利多上海有限公司）。

1.3 溶液配制

1）內標儲備溶液的配制 分別取苊-d10 10 mg、菲-d10 10 mg、蒽-d10 10 mg，精密稱定，置于100 ml量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，得到濃度約為100 mg/L的苊-d10、菲-d10、蒽-d10內標對照儲備液。

取內標對照儲備液1. 00 ml至10 ml容量瓶中，取苯并[α]芘-d12對照品一支，置于同一10 ml量瓶中，用甲醇-乙腈混合溶液（體積為1∶9）稀釋至刻度，得到濃度約為10 mg/ L的苊-d10、菲-d10、蒽-d10、苯并[α]芘-d12內標混合標準溶液。

2）對照溶液的配制 取苯并[e]芘10 mg，精密稱定，置于100 ml量瓶中，用乙腈稀釋至刻度得到濃度為0.1 mg/ml的苯并[e]芘標準溶液；取0.1 mg/ml的苯并[e]芘標準溶液1.0 ml和EPA16種多環(huán)芳烴混合溶液（2.0 mg/ml）50 ml至10 ml量瓶中，用乙腈稀釋至刻度得到濃度約為10 mg/L的17種多環(huán)芳烴混合溶液。分別取10 mg/L的17種多環(huán)芳烴混合溶液適量，并精密加入10 mg/L的內標混合標準溶液50 ml，用乙腈稀釋得到四種內標濃度約為50 mg/L的17種多環(huán)芳烴系列濃度對照溶液。

1.4 GC-MS條件

進樣口溫度為300 ℃，不分流進樣； HP-5MS毛細管色譜柱（0.25 mm×30 m，0.25 mm），載氣為氦氣，流速為1.0 ml/min；柱溫：50 ℃保持1 min，25 ℃/min升至200 ℃，再7 ℃/min升至315 ℃，保持1.5 min。進樣量：1 ml。色譜與質譜接口溫度：280 ℃，電離方式：電子轟擊源（EI），監(jiān)測方式：SIM模式，離子源溫度：230 ℃，四級桿溫度：150 ℃，電離能量：70 eV，溶劑延遲：5 min。

1.5 樣品液制備

1）提取試驗液制備 取閥門10個剪碎，置于索氏提取器中，加二氯甲烷100 ml索氏提取20 h。取10 ml二氯甲烷提取液至燒杯中用氮氣吹干，用適宜乙腈少量多次洗滌燒杯至5 ml量瓶中，每瓶分別精密加入10 mg/L的內標混合標準溶液25 ml，用乙腈定容，搖勻。

2）遷移試驗試驗液制備 取樣品1瓶經液氮冷凍后，在定量閥門上鑿開一個小口緩慢放氣（避免噴出），待拋射劑揮盡后，用切割器切開鋁罐，將藥液轉移至10 ml量瓶中，用乙腈分次清洗鋁罐內壁，洗液合并至10 ml量瓶中，每瓶分別精密加入10 mg/L的內標混合標準溶液50 ml，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。

2 結果

2.1 專屬性及系統適用性試驗

取二氯甲烷及乙腈作為空白溶液、對照品溶液及空白藥品溶液，分別進樣，記錄譜圖，結果顯示，各對照品分離度良好，空白溶劑及藥品無干擾（圖1）。

2.2 線性試驗

取對照溶液，分別進樣，記錄譜圖。萘、苊、芴以苊-d10為內標計算，苊烯、菲以菲-d10為內標計算，蒽、熒蒽、芘、？、苯并[e]芘、苯并[g，h，i] 芘以蒽-d10為內標計算，苯并[α]蒽、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽、苯并[α]芘、茚并[1，2，3-cd]芘、二苯并[α，h]熒蒽以苯并[α]芘-d12為內標計算。以各組分與內標峰面積的比值（Y軸）對各組分與內標的相對濃度（X軸）進行線性回歸，結果見表1。結果顯示17種多環(huán)芳烴在5～200 ng/ml的范圍內，線性良好，相關系數均大于0.99。檢測限均不大于2 ng/ml，靈敏度良好。

2.3 回收率試驗

取相當于1個藥品包裝的空白藥液各4份，置于10 ml量瓶中，均用微量注射器注入內標工作溶液50 ml，其中3個分別用微量注射器注入17種多環(huán)芳烴混合溶液適量，混勻，用乙腈稀釋定容，分別作為空白測試溶液、低、中、高濃度回收率測試溶液。各平行制備3份，分別進樣，記錄譜圖。回收率結果見表1，結果表明在苯環(huán)喹溴胺定量吸入氣霧劑、吸入用布地奈德混懸液、沙美特羅替卡松氣霧劑、丙酸氟替卡松吸入氣霧劑四種藥品中，17種多環(huán)芳烴的回收率良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗

將濃度為100 ng/ml的混合對照溶液，分別在室溫放置0、72 h，分別進樣3次，記錄譜圖，計算各待測物與內標峰面積比值，代入表1標準曲線線性方程計算0、72 h時的濃度，計算各濃度結果的RSD值。結果表明RSD值均小于10%，17種多環(huán)芳烴的日間穩(wěn)定性良好。

2.5 樣品測定結果

取不同閥門系統的提取液，各平行制備2份，分別進樣，記錄譜圖。結果見表2。

取不同閥門系統包裝藥液的遷移試驗液，平行制備2份，分別進樣，記錄譜圖。結果見表3。

3 討論

根據表2，表3的數據結果可知，氣霧劑閥門提取液中主要存在萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘這幾種PAHs，不同藥品的遷移結果也表明了這幾種PAHs的存在。根據德國食品及日用品法規(guī)（German Food Stuff and Consumer Goods Law）中規(guī)定與食品接觸材料苯并[α] 芘不得檢出（0.2 mg/kg），16種受關注的PAHs總量不得檢出（0.2 mg/kg）。本次試驗檢出的這8中PAHs雖然不像苯并[α]芘這樣有強致癌性，但考慮到是結構類似物，根據ICH M7中可接受標準1.5 mg/天對應于十萬分之一的生命時長患癌風險，本次試驗檢出的PAHs最大遷移量為0.2 mg/罐，按氣霧劑每天4撳，每罐標示量為120撳計算[12-13]，最大的暴露量為0.007 mg/d，可認為這些藥品中的多環(huán)芳烴的遷移量是安全的。

本次試驗主要對GC-MS條件進行了摸索，通過優(yōu)化進樣口溫度和離子源溫度，改善了多環(huán)芳烴中茚并[1，2，3-cd]芘、二苯并[α，h]熒蒽、苯并[g，h，i] 芘等高沸點組份的靈敏度。通過對于色譜柱的選擇及程序升溫方法的優(yōu)化實現了17種多環(huán)芳烴的分離以及多環(huán)芳烴與藥品主峰的分離。根據文獻檢索結果，GC-MS 法測定多環(huán)芳烴多用于水、土壤、食品等基質。本研究首次建立方法用于氣霧劑包裝材料中多環(huán)芳烴的提取試驗及多種有代表性的氣霧劑藥品基質中遷移試驗，具有良好的通用性。為進一步進行不同藥品包裝材料中多環(huán)芳烴的提取及遷移研究奠定了良好的基礎。

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