楊祎++徐云芳++張春生

[摘要] 探討人鼻病毒所致哮喘的發(fā)病機(jī)制，為尋找該病的病因及發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)。 方法 通過(guò)便利抽樣法選取2015年10月—2016年4月于溧陽(yáng)市人民醫(yī)院兒科住院治療的哮喘急性發(fā)作期患兒92例作為試驗(yàn)組，同時(shí)選取同期健康兒童30名作為對(duì)照組。采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清中的HRV感染情況。以HRV檢測(cè)結(jié)果將試驗(yàn)組分為HRV陽(yáng)性組和HRV陰性組。結(jié)果 試驗(yàn)組中HRV陽(yáng)性者為64例，陽(yáng)性率為69.57%；HRV陰性者為28例（30.43%）。對(duì)照組未檢測(cè)出HRV陽(yáng)性者，試驗(yàn)組陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。試驗(yàn)組HRV陽(yáng)性的血白細(xì)胞計(jì)數(shù)（15.78±3.89）109/L、中性粒細(xì)胞比例（0.98±0.01）、CRP濃度（14.32±2.11）mg/L和平均住院天數(shù)（9.54±3.20）d與HRV陰性[（9.88±2.67）×109/L、（0.52±0.22）、（9.56±3.23）mg/L、（6.21±2.40）d]相比后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論 哮喘發(fā)作期患兒人鼻病毒感染率明顯高于正常兒童，提示HRV感染與哮喘的急性發(fā)作有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 兒童哮喘；人鼻病毒（HRV）；感染；酶聯(lián)免疫法

[中圖分類(lèi)號(hào)] R725.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2017）05（b）-0017-03

[Abstract] Objective To discuss the pathogenesis of asthma caused by the human rhinovirus and provide basis for the cause and pathogenesis. Methods 92 cases of children during the acute asthma attack period from October 2015 to April 2016 were selected as the test group， while 30 cases of healthy children at the same period were selected as the control group， and the serum HRV infection situation was tested by the enzyme-linked immunosorbent assay， and the test group were divided into the HRV positive group and HRV negative group according to the HRV test results. Results In the test group， there were 64 HRV positive cases， and the positive rate was 69.57%， and there were 28 HRV negative cases， and the negative rate was 30.43%， and the HRV positive patients were not tested in the control group， and the positive rate in the test group was obviously higher than that in the control group（P<0.01）， and the differences in the blood white cell count， neutrophil ratio， CRP concentration and average length of stay between the HRV positive patients and the HRV negative patients were statistically significant[（15.78±3.89）×109/L， （0.98±0.01）， （14.32±2.11）mg/L， （9.54±3.20）d vs （9.88±2.67）×109/L， （0.52±0.22）， （9.56±3.23）mg/L， （6.21±2.40）d]. Conclusion The human rhinovirus infection rate of children at the acute asthma attack is obviously higher than that of normal children， which reminds that the HRV infection is related to the acute attack of asthma.

[Key words] Asthma in children； HRV； Infection； Enzyme-linked immunosorbent assay

隨著社會(huì)的高速發(fā)展，人類(lèi)的生活模式逐漸改變，全世界范圍內(nèi)哮喘患者逐年增多。支氣管哮喘是氣道的一種慢性變態(tài)反應(yīng)性炎癥性疾病，由多種誘發(fā)因素（如：感染，過(guò)敏源等）導(dǎo)致肥大細(xì)胞，嗜酸細(xì)胞，淋巴細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞介導(dǎo)的氣道炎癥，以反復(fù)喘息、咳嗽、氣促，胸悶為主要臨床表現(xiàn)。由于兒童哮喘發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，呼吸道病毒誘導(dǎo)哮喘發(fā)作可能有多種不同方式，目前尚不能完全明確，當(dāng)前尚無(wú)有效的治療和預(yù)防人鼻病毒的藥物，最近成功開(kāi)發(fā)α-ketoamide蛋白酶抑制劑可能對(duì)人鼻病毒有一定的作用[1]，該文通過(guò)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）法檢測(cè)當(dāng)?shù)叵純貉逯蠬RV（抗原）的感染情況，為該疾病尋找新型有效的治療方法提供依據(jù)，該研究主要對(duì)該院2015年10月—2016年4月期間的122例兒童進(jìn)行探析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該研究便利抽取的兒童哮喘急性發(fā)作期患兒和健康體檢兒童共122例均為該院收治，將122例患兒按照計(jì)算機(jī)表法分為試驗(yàn)組（n=90）和對(duì)照組（n=32），試驗(yàn)組中男46例，女44例，年齡范圍均在8個(gè)月～8歲之間，年齡跨度經(jīng)計(jì)算后為（5.2±1.5）歲；對(duì)照組中男46例，女44例，年齡范圍均在9個(gè)月～7歲之間，年齡跨度經(jīng)計(jì)算后為（5.4±1.3）歲。統(tǒng)計(jì)工具對(duì)兩組受檢兒童的一般資料進(jìn)行檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可比性顯著。

方法與流程

1.2 標(biāo)本采集

兩組受檢兒童入院后均接受標(biāo)本采集，在凌晨選取靜脈血，血標(biāo)本量為1 mL，共計(jì)3份，而后將其進(jìn)行靜置凝固，時(shí)間為15 min，保存條件為常溫。靜置后將其進(jìn)行離心操作，時(shí)間為20 min，其速度參數(shù)為3 000 r/min，待上述操作完成后選取上層清液，最后將其放置在適宜溫度下，即-70℃。

1.3 鼻病毒檢測(cè)流程

①編號(hào)：將選取后的上層清液樣本進(jìn)行數(shù)字編號(hào)，確保與微孔對(duì)應(yīng)。而后設(shè)置陰性與陽(yáng)性對(duì)照，分別為2孔，同時(shí)選擇1孔作為空白對(duì)照。②加樣。在上述3組對(duì)照樣品中分別將陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照，劑量分別為50 μL。隨后將稀釋好的40 μL液體加入待檢測(cè)樣品孔中，在此期間，還需將10 μL液體加入待測(cè)樣品中。上述操作全部完成后進(jìn)行緩慢搖晃，使其處于混勻狀態(tài)。③溫育：待封板膜完成封板，將其放置在適宜溫度下靜置，即37℃溫育箱，時(shí)間為30 min。④配液：將600 m；蒸餾水加入30倍濃縮洗滌液，進(jìn)行備用。⑤洗滌：事先將封板膜揭開(kāi)，將上層清液去除后甩干板，隨后將洗滌液加入至各個(gè)孔中，靜置時(shí)間為30 s，而后將洗滌液去除，將上述操作進(jìn)行反復(fù)重復(fù)，共計(jì)5次，最后拍干板。⑥加酶：將50 μL酶標(biāo)試劑加入各個(gè)孔中，而空白孔無(wú)需加入該試劑。⑦溫育和洗滌操作同與③相同。⑧顯色：將50 μL顯色劑A分別加入至各個(gè)孔中，而后進(jìn)行晃動(dòng)讓其混勻，待完成后將其放置在適宜溫度下保存，即：37℃溫育箱中避光顯色，時(shí)間為15 min。⑨終止：將50 μL終止液分別加入至各個(gè)孔中，進(jìn)行終止反應(yīng)。⑩測(cè)定：終止液加入時(shí)間在15 min內(nèi)，測(cè)定各孔，利用酶標(biāo)儀方法進(jìn)行，調(diào)零以空白孔為主，最后對(duì)各孔吸光度（OD 值）進(jìn)行測(cè)量，使用450 nm 波長(zhǎng)進(jìn)行即可。

結(jié)果判斷：陰性判定依據(jù)：若樣品吸光度參數(shù)在臨界值以下，提示為鼻病毒（RhV）陰性。陽(yáng)性判定依據(jù)：若樣品吸光度參數(shù)在臨界值及以上，提示為鼻病毒（RhV）陽(yáng)性。

1.4 指標(biāo)觀察

利用常規(guī)檢測(cè)儀器對(duì)兩組受檢人員的血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞比例、CRP進(jìn)行檢測(cè)，并將研究結(jié)果予以詳細(xì)記錄。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

該研究中的相關(guān)數(shù)據(jù)均通過(guò)SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件予以整理和計(jì)算，數(shù)據(jù)通過(guò)軟件計(jì)算后，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（x±s）表示，行t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)組與對(duì)照組HRV的感染情況

試驗(yàn)組共92例患兒，HRV陽(yáng)性者為64例，陽(yáng)性率為69.57%，HRV陰性者為28例（30.43%）。對(duì)照組未檢測(cè)出HRV陽(yáng)性者，兩組患兒的HRV感染情況比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=43.898，P=0.000<0.05），見(jiàn)表1。

2.2 試驗(yàn)組HRV陽(yáng)性和HRV陰性的血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞比例、CRP、平均住院天數(shù)情況比較

試驗(yàn)組HRV陽(yáng)性和HRV陰性的血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞比例和平均住院天數(shù)比較后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

支氣管哮喘是氣道的一種慢性變態(tài)反應(yīng)性炎癥性疾病，由肥大細(xì)胞，嗜酸細(xì)胞，淋巴細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞介導(dǎo)的氣道炎癥，以反復(fù)喘息、咳嗽、氣促，胸悶為主要臨床表現(xiàn)[2]。最近有研究表明HRV與兒童病毒誘發(fā)的喘息密切相關(guān)，占兒童及青少年病毒誘發(fā)哮喘的75%～80%，研究鼻病毒感染致兒童喘息的發(fā)作和/或哮喘加重仍是宿主-病原體相互作用研究的重要領(lǐng)域[3]。該研究結(jié)果顯示：試驗(yàn)組HRV陽(yáng)性和HRV陰性的血白細(xì)胞計(jì)數(shù)，中性粒細(xì)胞比例，C-反應(yīng)蛋白（C-Reactive protein， CRP）水平，HRV陽(yáng)性患兒在這些指標(biāo)中明顯高于HRV陰性患兒[4]。這說(shuō)明HRV陽(yáng)性患兒更容易導(dǎo)致其他疾病的發(fā)生，平均住院天數(shù)也比HRV陰性患兒高[5-7]。該實(shí)驗(yàn)初步驗(yàn)證了HRV與兒童哮喘發(fā)作的密切關(guān)系，提示了HRV與兒童哮喘的相關(guān)性，同時(shí)為HRV抗原濃度的分級(jí)提供資料，在今后研究治療該疾病的過(guò)程中，如何以HRV為兒童哮喘的預(yù)防和治療研究新型藥品，或許是治療方向之一[8-9]。這一研究結(jié)果與孫秋鳳等人[10]的研究結(jié)果相似，在孫秋鳳等人的研究中，對(duì)153例患兒的標(biāo)本進(jìn)行分析，結(jié)果表明：呼吸道病毒檢出情況：1 933份標(biāo)本中共檢出728株病毒株（37.66%），其中HRV214例（11.07%）、RSV210例（10.86%）、HBoV 146例（7.55%）、 Pinf-396例（20.49%）、Pinf-124例（6.41%）等。35例HRV感染為混合感染（35/214，16.36%），以HRV混合HBoV多見(jiàn)（15/35，42.86%），由此可見(jiàn)，哮喘2歲以下兒童多見(jiàn)；HRV感染可引起哮喘急性發(fā)作，且與過(guò)敏性體質(zhì)相關(guān)，該研究結(jié)果顯示：驗(yàn)組中HRV陽(yáng)性者為64例，陽(yáng)性率為69.57%；HRV陰性者為28例（30.43%）。對(duì)照組未檢測(cè)出HRV陽(yáng)性者，試驗(yàn)組陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。試驗(yàn)組HRV陽(yáng)性的血白細(xì)胞計(jì)數(shù)（15.78±3.89）×109/L、中性粒細(xì)胞比例（0.98±0.01）、CRP濃度（14.32±2.11）mg/L和平均住院天數(shù)（9.54±3.20）d與HRV陰性[（9.88±2.67）×109/L、（0.52±0.22）、（9.56±3.23）mg/L、（6.21±2.40）d]相比后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這一研究結(jié)果與上述學(xué)者的報(bào)道類(lèi)似。

4 結(jié)論與展望

哮喘發(fā)作期患兒人鼻病毒感染率明顯高于正常兒童，HRV感染對(duì)患兒的臨床癥狀及各項(xiàng)觀測(cè)指標(biāo)有著重要的影響，延長(zhǎng)住院時(shí)間和加重臨床哮喘癥狀的發(fā)生，這可能與人鼻病毒感染后的患兒更容易病毒感染之后引起的一系列的炎癥反應(yīng)綜合征有很大的關(guān)系，病毒感染之后可以適當(dāng)?shù)囊鸢准?xì)胞的升高。目前國(guó)內(nèi)外的調(diào)查研究較為地區(qū)化，有一定的局限性，HRV陽(yáng)性率的不同可能與檢測(cè)方法，人類(lèi)種群，氣候條件等因素有關(guān)，同時(shí)對(duì)HRV抗原定量檢測(cè)濃度的分級(jí)國(guó)內(nèi)尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，后續(xù)的研究需要擴(kuò)大樣本量使數(shù)據(jù)更具說(shuō)服力。

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（收稿日期：2017-02-15）