劉鈴+孫曉娜+蔣偉光

【摘要】 目的 研究腺苷脫氨酶（ADA）、T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-spot）聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)核性胸膜炎疾病診斷的臨床意義。方法 選取80例疑似結(jié)核性胸膜炎患者， 采用ADA、T-spot聯(lián)合檢測(cè)， 利用ROC曲線探討胸腔積液ADA和T-spot聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率和本文確定的ADA臨界值與傳統(tǒng)的ADA臨界值進(jìn)行比較。結(jié)果 ADA檢測(cè)診斷ROC曲線下胸腔積液的面積為0.959（95%CI：0.916～1.000）， ADA檢測(cè)對(duì)結(jié)核性胸膜炎胸腔積液有較高的診斷價(jià)值， 而當(dāng)約登指數(shù)為最高值時(shí)， ADA的臨界值設(shè)定為22.5IU/L。經(jīng)診斷， 確診的胸膜炎患者有45例， 非結(jié)核性胸膜炎患者有35例；采用T-spot檢測(cè)結(jié)核性胸膜炎的陽(yáng)性率為91.11%， ADA檢測(cè)的陽(yáng)性率為80.00%， ADA、T-spot聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為97.78%；T-spot檢測(cè)的陽(yáng)性率明顯高于ADA檢測(cè)的陽(yáng)性率， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；ADA、T-spot聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率明顯高于ADA和T-spot的單獨(dú)檢測(cè)， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 ADA、T-spot聯(lián)合檢測(cè)結(jié)核性胸膜炎的診斷具有較為重要的意義， 能夠快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)患者的胸膜炎， 且具有較高的靈敏度， 診斷效果較好， 可以在臨床上推廣。

【關(guān)鍵詞】 腺苷脫氨酶；T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)；結(jié)核性胸膜炎；診斷意義

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.14.023

結(jié)核病是由于結(jié)核桿菌引起的一種具有傳染性的疾病， 是世界上單一病菌導(dǎo)致死亡的最多的疾病， 中國(guó)也具有較高的發(fā)病率， 每年估計(jì)有新發(fā)的結(jié)核病患者130萬例， 占全球發(fā)病率的14.3%[1]。結(jié)核性胸膜炎是一種較為常見的疾病， 它并不具有特異的臨床表現(xiàn)， 對(duì)其采用細(xì)菌檢測(cè)的陽(yáng)性率較低， 而胸膜活檢的使用又存在一定的局限性， 因此對(duì)結(jié)核性胸膜炎的檢測(cè)和診斷就成為了臨床醫(yī)生和學(xué)者重視的問題， 本文就結(jié)核性胸膜炎疾病采用ADA、T-spot聯(lián)合檢測(cè)， 觀察其效果， 為臨床檢測(cè)提供理論參考。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2015年8月～2016年7月在本院進(jìn)行治療的80例疑似結(jié)核性胸膜炎患者， 其中男52例， 女28例， 年齡22～78歲， 平均年齡（49.5±9.5）歲， 病程1～3個(gè)月， 平均病程（1.5±0.8）個(gè)月；患者出現(xiàn)咳嗽、咳痰、呼吸困難等癥狀， 與患者交談其家庭經(jīng)濟(jì)水平一般。

1. 2 方法

1. 2. 1 T-spot檢測(cè)：采集患者外周血5ml于肝素鈉抗凝管中， 將外周血的單個(gè)細(xì)胞用淋巴細(xì)胞分離進(jìn)行分離， 調(diào)整AIM-V培養(yǎng)液的濃度為2.5×106/ml。將T-spot試劑盒取出放在預(yù)先包被有抗γ-干擾素抗體的微孔板上， 在4個(gè)微孔中由上至下分別加入植物血凝素50 μl作為陽(yáng)性對(duì)照孔， A孔中加入50 μl ESAT-6抗原， B孔中加入培養(yǎng)濾液蛋白-10（CEP-10）抗原50 μl， 加入50 μl AIM-V培養(yǎng)液作為陰性對(duì)照孔。最后分別再加入細(xì)胞稀釋工作液100 μl于4孔中， 調(diào)節(jié)培養(yǎng)箱溫度為37℃， 加入5% CO2， 然后將培養(yǎng)板放入后孵育16～20 h， 用磷酸緩沖液（PBS）將微孔板洗4次， 在其中加入二抗， 采用堿性磷酸酶標(biāo)記， 調(diào)節(jié)溫度為2～8℃進(jìn)行孵育， 時(shí)間為1 h， PBS洗板4次， 在常溫避光條件下加入底物后， 用7min進(jìn)行顯色， 然后終止反應(yīng)并用蒸餾水沖洗[2]。

1. 2. 2 ADA檢測(cè) 采用速率法進(jìn)行ADA檢測(cè)， 選用深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)的試劑及全自動(dòng)生化分析儀， 進(jìn)行檢測(cè)并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

1. 3 觀察指標(biāo) 探討胸腔積液ADA和T-spot聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確性、特異性和陽(yáng)性率。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 ADA檢測(cè)臨界值與傳統(tǒng)ADA臨界值比較 利用ROC曲線計(jì)算胸腔積液， ADA檢測(cè)診斷ROC曲線下胸腔積液的面積為0.959（95%CI：0.916～1.000）， ADA檢測(cè)對(duì)結(jié)核性胸膜炎胸腔積液有較高的診斷價(jià)值， 而當(dāng)約登指數(shù)為最高值時(shí)， ADA的臨界值設(shè)定為22.5 IU/L， 此時(shí)本文確定的ADA臨界值與傳統(tǒng)的ADA臨界值見表1。

2. 2 ADA和T-spot檢測(cè)結(jié)核性胸膜炎的陽(yáng)性率比較 經(jīng)診斷， 確診的胸膜炎患者45例， 非結(jié)核性胸膜炎患者35例。T-spot檢測(cè)的陽(yáng)性率（91.11%）明顯高于ADA檢測(cè)的陽(yáng)性率（80.00%）， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；ADA、T-spot聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率明顯高于ADA和T-spot的單獨(dú)檢測(cè)， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

結(jié)核性胸膜炎是由于肺部的結(jié)合炎癥累及到胸部從而引發(fā)的。有時(shí)結(jié)核性胸膜炎也可以通過血行感染， 與機(jī)體的變態(tài)反應(yīng)有很大的關(guān)系[3]。它具有較多的發(fā)病原因， 原發(fā)性結(jié)核病是由于結(jié)核桿菌侵入人體造成的， 結(jié)核桿菌根據(jù)其不同的類型分為：人型、牛型、鳥型和鼠型， 而對(duì)人體具有致病力的是人型和牛型結(jié)核桿菌。大多數(shù)結(jié)核桿菌胸膜炎起病較急， 臨床表現(xiàn)主要為全身中毒癥狀和胸腔積液導(dǎo)致局部癥狀， 有發(fā)熱、乏力、出汗、食欲不振、盜汗等。而局部癥狀主要有胸痛、干咳和呼吸困難。有些患者隨著呼吸運(yùn)動(dòng)而產(chǎn)生胸痛， 深呼吸或咳嗽時(shí)疼痛較為明顯。若患者的胸腔內(nèi)出現(xiàn)積液時(shí)， 聽診可有胸膜摩擦音。

T-spot是通過特異性T細(xì)胞數(shù)量來診斷結(jié)核感染的。由于結(jié)核分枝桿菌（MTB）的RD1基因序列合成了ESAT-6和CFP-10兩種蛋白， 而這兩種基因序列又只存在于MTB中， 其他的環(huán)境中均不含這種基因序列， 因此這兩種結(jié)合感染均可以采用特異性抗原刺激這種基因進(jìn)行檢測(cè)， 致使T-spot的檢測(cè)具有高度特異性。ADA是一種輔助性T淋巴細(xì)胞的標(biāo)志物， 當(dāng)出現(xiàn)活動(dòng)性結(jié)核時(shí)， 細(xì)胞受到刺激， 致使淋巴細(xì)胞增多， 從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的ADA進(jìn)入胸腔積液中， 因此在發(fā)生結(jié)核性胸膜炎時(shí)， ADA活性的檢測(cè)在胸腔積液中的活性較高。

綜上所述， ADA、T-spot聯(lián)合檢測(cè)具有較高的特異性和靈敏度， 對(duì)結(jié)核性胸膜炎具有較高的診斷價(jià)值， 可以在臨床上推廣。

參考文獻(xiàn)

[1] 施健， 周麗榮， 孫寶華， 等. ADA聯(lián)合IFN-γ及LAM抗原檢測(cè)對(duì)結(jié)核性胸膜炎的診斷價(jià)值. 疑難病雜志， 2014， 13（1）：46-48.

[2] 廖兵， 丁顯平. T-SPOT.TB和ADA在結(jié)核性胸膜炎中的診斷價(jià)值. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志， 2014， 35（17）：2323-2325.

[3] 鄭立恒， 柳曉金， 劉會(huì)， 等. 3種方法在診斷結(jié)核性胸膜炎中的價(jià)值. 河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2016， 37（7）：822-824.

[收稿日期：2016-11-28]