楊儉　吳小霞　辛朝雄

【摘要】 目的 研究結(jié)核性胸膜炎患者實(shí)施T-SPOT.TB試驗(yàn)的診斷意義。方法 25例合并胸腔積液的結(jié)核性胸膜炎患者作為觀察組， 另選擇同時(shí)期25 例肺炎滲出性胸膜炎且無原發(fā)結(jié)核患者作為對(duì)照組， 對(duì)兩組胸腔積液實(shí)施 T-SPOT.TB結(jié)核試驗(yàn)， 觀察記錄檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 觀察組檢測(cè)結(jié)果陽性23 例， 陰性2例， 敏感性92.0%（23/25）；對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果陽性5 例， 陰性 20 例， 敏感性20.0%（5/25）。觀察組敏感性大于對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論 對(duì)結(jié)核性胸膜炎患者實(shí)施T-SPOT.TB試驗(yàn)的檢測(cè)方法可以提高診斷準(zhǔn)確性， 且該檢測(cè)方法對(duì)結(jié)核桿菌敏感性較高。

【關(guān)鍵詞】 T-SPOT.TB試驗(yàn)；結(jié)核性胸膜炎；診斷

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.13.086

作為胸腔積液發(fā)生的常見原因， 結(jié)核性胸膜炎于國(guó)內(nèi)胸腔積液患者中占49.5%～54.5%， 因其特異性表現(xiàn)缺乏， 細(xì)菌學(xué)方法檢測(cè)陽性率不高， 且胸膜活檢創(chuàng)傷性也使其在臨床應(yīng)用中受到限制[1， 2]。該病初診確診難度較大， T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（tcell enzyme-linked immunospot， T-SPOT）主要由酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)技術(shù)（enzyme-linked immunospot， ELISPOT）發(fā)展而來， 其可以于單細(xì)胞水平針對(duì)細(xì)胞因子的分泌狀況進(jìn)行檢

測(cè)[3]。主要通過事先進(jìn)行設(shè)計(jì)的抗體捕獲細(xì)胞所分泌的特殊細(xì)胞因子通過酶聯(lián)斑點(diǎn)顯色表現(xiàn)出來。通常檢驗(yàn)1 d內(nèi)可以完成， 從而為患者減少因檢驗(yàn)而滯后的治療時(shí)間。T-SPOT.TB

試驗(yàn)具有較高的敏感性、特異性及可重復(fù)性， 可以從20～30萬

的細(xì)胞中將單個(gè)蛋白分泌細(xì)胞檢測(cè)出來， 需要的標(biāo)本數(shù)量少， 操作便利。本文就結(jié)核性胸膜炎患者實(shí)施T-SPOT.TB試驗(yàn)的意義進(jìn)行研究， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集2014年1月～2015年3月到本院進(jìn)行檢查的結(jié)核性胸膜炎合并有胸腔積液患者25例作為觀察組， 其中男14例， 女11例；年齡21～69歲；平均年齡（32.2±12.5）歲，

25例患者中結(jié)核性胸膜炎合并單側(cè)胸腔積液患者13例， 合并雙側(cè)胸腔積液患者12例；診斷依據(jù)如下：有呼吸系統(tǒng)典型結(jié)核中毒癥狀、結(jié)合抗原陽性、結(jié)核菌素試驗(yàn)（PPD試驗(yàn)）強(qiáng)陽性、痰液抗酸桿菌陽性、結(jié)核抗體5項(xiàng)多項(xiàng)陽性者， 上述檢查陽性符合3個(gè)以上即可確診。另選擇同時(shí)期25 例肺炎滲出性胸膜炎且無原發(fā)結(jié)核患者作為對(duì)照組， 男13例， 女12例；年齡20～64歲；平均年齡（31.2±11.1）歲；對(duì)照組中2例胸腔積液與肺纖維化有關(guān)， 1例與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān)。所有研究對(duì)象及相關(guān)家屬均簽署知情同意書。

1. 2 方法 胸水樣本收集：采集胸腔積液 50 ml后2 h內(nèi)常規(guī)分離淋巴細(xì)胞用于檢測(cè)。ELISPOT過程：在活化后預(yù)包被好抗體的平板中， 每孔加入100 μl， 細(xì)胞濃度為 2×105個(gè)細(xì)胞/孔。背景陰性對(duì)照孔中不加入任何刺激物。陽性對(duì)照每孔加入5 PHA， 終濃度 5 μg /ml。實(shí)驗(yàn)孔加入抗原ESAT-6， 終濃度為5 μg / 孔。然后蓋上板蓋， 放入 37℃， 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～24 h。第2天洗板后， 加入檢測(cè)抗體孵育1 h， 洗板后再加入親和素孵育1 h。最后加入顯色劑顯色。待顯色洗板后， Elispot 斑點(diǎn)計(jì)數(shù)， 并記錄斑點(diǎn)的各種參數(shù)。

1. 3 結(jié)果判定 根據(jù) T-SPOT.TB 試劑盒使用說明書， 如果陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)形成細(xì)胞（SFC）<6， （ 檢測(cè)孔SFC-陰性對(duì)照孔 SFC） ×4 ≥24， 可判斷所測(cè)標(biāo)本為陽性；如果陰性對(duì)照孔SFC≥6， 檢測(cè)孔 SFC為陰性對(duì)照孔2倍， 可判斷所測(cè)標(biāo)本為陽性。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組檢測(cè)結(jié)果陽性23 例， 陰性2例， 敏感性92.0%

（23/25）；對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果陽性5 例， 陰性20例， 敏感性20.0%

（5/25）。觀察組敏感性大于對(duì)照組（P<0.05）。

3 討論

在胸腔積液中對(duì)抗酸桿菌、結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性的檢查一直是作為結(jié)核胸腔積液診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[4]， 但其診斷常常受到低陽性率和影像學(xué)特異性的限制。T-SPOT.TB試驗(yàn)是由Lalvani等發(fā)明， 在2005年12月由FDA獲得最終批準(zhǔn)， 目前已在美、英等國(guó)廣泛使用。其檢測(cè)原理主要包括：①結(jié)核分枝桿菌對(duì)比卡介苗菌株與較多環(huán)境下的分枝桿菌， 前者基因中特異性存在著RD1基因序列， 可以編碼生成兩類蛋白， 包括ESAT-6及CFP-10兩種蛋白均作為特異性抗原對(duì)T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生刺激進(jìn)而變?yōu)橹旅鬞淋巴細(xì)胞同時(shí)生成干擾素-γ（IFN-γ）；②T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)主要是由酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)發(fā)展而來， 其可以于單細(xì)胞水平針對(duì)細(xì)胞因子的分泌狀況進(jìn)行檢測(cè)。主要通過事先進(jìn)行設(shè)計(jì)的抗體捕獲細(xì)胞所分泌的特殊細(xì)胞因子通過酶聯(lián)斑點(diǎn)顯色表現(xiàn)出來[5]。單個(gè)顯色斑點(diǎn)即代表單個(gè)結(jié)核分枝桿菌致敏T淋巴細(xì)胞， 通過斑點(diǎn)計(jì)數(shù)以確定體內(nèi)結(jié)核分枝桿菌效應(yīng)T細(xì)胞的存在與否及存在數(shù)量。當(dāng)前， 較多報(bào)告均對(duì)T-SPOT.TB試驗(yàn)在活動(dòng)性肺結(jié)核、肺外結(jié)核等中的敏感度、特異度給予肯定評(píng)價(jià)。

本次研究結(jié)果顯示， 觀察組檢測(cè)結(jié)果陽性23 例， 陰性2例， 敏感性92.0% （ 23/25） ；對(duì)照組檢測(cè)結(jié)果陽性5 例， 陰性 20 例， 敏感性20.0% （5/25）。但由于本實(shí)驗(yàn)的病例數(shù)較少， 同時(shí)由于部分患者的結(jié)核性胸膜炎處于潛伏期， 會(huì)在一定程度上影響本研究的精準(zhǔn)性。但是T-SPOT.TB試驗(yàn)的高效性、便捷性、高質(zhì)量等特性有效提高了結(jié)核性胸膜炎確診率， 減少了漏診和誤診， 且T-SPOT.TB特異性和實(shí)用性較高， 具有很大的臨床意義。

參考文獻(xiàn)

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[5] 周樂亮. T-SPOT.TB聯(lián)合細(xì)胞因子INF-γ、IL-10等檢測(cè)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用. 中南大學(xué)， 2013.

[收稿日期：2016-01-14]