趙春生 王愛軍 馬發(fā)楊（西北民族大學化工學院，甘肅 蘭州 730030）

HPLC法同時測定葡萄酒中五種添加劑含量的研究

趙春生 王愛軍 馬發(fā)楊（西北民族大學化工學院，甘肅 蘭州 730030）

葡萄酒是用新鮮的葡萄或葡萄汁經(jīng)完全或部分發(fā)酵釀成的酒精飲料，《本草綱目》記載葡萄酒暖腰腎駐顏色。具有滋補、抗衰老、助消化、殺菌、利尿等多種功效[1]。一般釀造葡萄酒不允許使用防腐劑、甜味劑、合成著色劑等食品添加劑，而國標中測定食品添加劑的方法分門而立，不同種類的食品添加劑同時檢測的標準方法尚未給出[2-3]。本文參照相關文獻，結(jié)合前期研究，采用高效液相色譜法測定葡萄酒中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜、脫氫乙酸含量，方法簡便、快速、準確，為提升其質(zhì)量標準提供了科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

Thermo U-3000高效液相色譜儀(配置真空在線脫氣、自動進樣器、光電二極管陣列檢測器(DAD)、四元泵、色譜工作站)，Mettler Toledo電子分析天平、SK8210LHC數(shù)控超聲波清洗儀(上?？茖С晝x器有限公司)。

對照品苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉、脫氫乙酸均購自Dr.Ehrenstorfer,供含量測定用。甲醇(色譜級，霍尼韋爾國際公司)，乙酸銨(色譜級，西格瑪)，水為超純水，葡萄酒。

1.2 色譜條件

采用Venusil MP色譜柱(C18，5μm，4.6×250mm)，柱溫為35℃[7]，流動相為甲醇(A)—0.02mol/L乙酸銨(B)梯度洗脫(0-5min，5%A；5-10min，5%-10%A；10-15min，10%-15%A；15-20min，15%-5%A)[4]，流速1.0mL/mL，檢測波長分別為230nm(苯甲酸、山梨酸、糖精鈉)，214nm(安賽蜜)，293nm(脫氫乙酸)。

1.3 標準溶液的制備

1.3.1 對照品混合溶液

精密稱取苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉、脫氫乙酸的對照品適量，加入甲醇∶水（5∶95）的溶劑溶解，制成濃度為1.0μg/ mL的對照品混合溶液[5]。

1.3.2 供試品溶液

取樣品適量于50mL離心管中，置80℃水浴鍋中蒸去酒精，用水定容至25mL，混勻，用孔徑為0.45μm濾膜過濾[6-7]。棄去初濾液，取續(xù)濾液于液相小瓶中，即得。

2 結(jié)果與討論

2.1 精密度實驗

取同一對照品混合溶液，按1.2項下色譜條件連續(xù)自動進樣10μL共5次，記錄色譜圖，結(jié)果苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜、脫氫乙酸峰面積的RSD分別為0.51%、0.26%、0.86%、0.36%、1.01%。(見表1-表3)

2.2 線性關系考察

取對照品混合溶液，按1.2項下色譜條件，分別自定進樣2、4、6、8、10、12、14μL，記錄色譜圖。分別以峰面積Y為縱坐標，進樣量X為橫坐標，進行線性回歸分析，結(jié)果苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜、脫氫乙酸進樣量分別在0.01-2、0.04-2.14、0.08-1.20、0.04-2.45、0.1-1.98μg范圍內(nèi)線性關系良好，回歸方程分別為Y=2.66X-0.032，r=0.9996；Y=3.62X-0.028，r=0.9999； Y=4.15X-0.012，r=0.9992；Y=3.06X-0.048，r=0.9995；Y=4.12X-0.0061，r=0.9999。

2.3 加對照品回收試驗

精密稱取同一批號已測知含量的供試品9份，每份約10g，分別加入對照品苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜、脫氫乙酸，加入量分別為S1、S2、S3、S4、S5按1.3項下方法制備供試液，按1.2項下色譜條件，分別進樣10μL，記錄峰面積，計算測得供試品的量分別為X1、X2、X3、X4、X5，得到回收率分別為H1、H2、H3、H4、H5，結(jié)果見表1。

2.4 穩(wěn)定性試驗

取制備好的同一樣品的供試品溶液，室溫下放置，按1.2項下色譜條件，分別于制備后0、2、4、6、8、16、24h進樣10μL進行分析，記錄色譜圖，結(jié)果苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜、脫氫乙酸峰面積的RSD分別為1.3%、0.96%、1.11%、0.45%、2.83%，表明供試品溶液各組分在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5 討論

圖1 波長214nm安賽蜜色譜圖

圖2 波長230nm苯甲酸、山梨酸、糖精鈉色譜圖

2.5.1 檢測波長的選擇

為保證各指標成分的測定有較高靈敏度，根據(jù)光電二極管陣列檢測器上得到的紫外吸收光譜圖輔助成分定性和選擇各被測組分的檢測波長，安賽蜜在214 nm處有最大吸收，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉在230nm處均有較大吸收，脫氧乙酸在293nm處有最大吸收，故選擇檢測波長分別為214nm(安賽蜜)，275 nm (苯甲酸、山梨酸、糖精鈉)，293nm(脫氧乙酸)。

圖3 波長293nm脫氧乙酸色譜圖

表1 回收率測定結(jié)果

2.5.2 流動相的選擇

試驗中以甲醇－水、甲醇-0.02mol/L乙酸銨水溶液、乙腈-0.3%三乙胺水溶液和乙腈－0.2%磷酸水溶液等為流動相，采用等度洗脫，各組分均不能完全分離。采用梯度洗脫，以甲醇-水或乙腈-0.3%三乙胺水溶液為流動相時，色譜圖基線飄移較大，選擇甲醇-0.02mol/L乙酸銨水溶液為流動相，各組分分離好，基線較穩(wěn)定。

3 結(jié)語

本文建立的雙波長HPLC同時測定葡萄酒中山梨酸、苯甲酸、安賽蜜、糖精鈉、脫氫乙酸5個指標含量測定的方法，分離度高，操作簡便，結(jié)果準確，重復性好，且在各組分適宜波長處分別測定其含量，大大提高了檢測靈敏度，但針對不同基質(zhì)的適用性仍需進一步研究，為其在食品檢測及質(zhì)量控制提供有力依據(jù)。

[1]趙任軍.葡萄酒的功能與營銷[J].中外葡萄與葡萄酒，2006，30(5):20.

[2]黃海濤,李雪梅,徐濟倉等.同時檢測食品添加劑中五種禁限用成分含量的方法[P].中國專利，CN105510470A,2016-04-20.

[3]曾文革,羅燕.歐盟食品添加劑使用的法律規(guī)制及其啟示[J]山東科技大學學報(社會科學版).2015，25(2)，6～8.

[4]高曉宇.食品添加劑應用問題及其對策研究[D].太原:太原科技大學.2014.

[5]易智勇,黃憶明,朱明元.食品添加劑的不合理使用現(xiàn)狀及對策[J].中國衛(wèi)生監(jiān)督雜志.2008，17(5)，10～12.

[6]霍光.食品添加劑的作用與安全性控制[J].食品安全導刊.2016，2(2)，4～6.

[7]H W Sun,F CWang,L F Ai.Simultaneous determination of seven nitroimidazole residues in meat by using HPLC-UV detec?tionwith solid-phase extraction.JournalofChromatography.2007.

Simultaneous Determination of Five Kinds of Additives in Wine by HPLC

Zhao Chunsheng W ang Aijun Ma fayang（College of Chem ical Engineering,Northw est University for Nationalities,Lanzhou 730030,China）

使用HPLC法建立了一種專屬、靈敏的同時測定葡萄酒中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉、脫氫乙酸含量。采用Venusil MP—C18色譜柱，流動相為甲醇(A)，0.02mol/L乙酸銨(B)，流速為1.0m L/m in，柱溫為室溫。實驗結(jié)果表明：苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉、脫氫乙酸進樣量在0.08-2.0μg（r=0.9996）、0.075-2.5μg（r=0.9999）、0.02-3.0μg（r=0.9992）、0.12-2.3μg（r=0.9995）、0.32-1.8μg（r=0.9999）范圍內(nèi)線性關系良好；平均加樣回收率分別為97.0%、91.4%、95.0%、98.9%、96.9%，RSD分別為0.51%、0.26%、0.86%、0.36%、1.01%。

葡萄酒；苯甲酸；山梨酸；糖精鈉；安賽蜜；脫氫乙酸；高效液相色譜

To develop an HPLCmethod ofexclusive、sensitive for simultaneousdetermination ofbenzoic acid、sobic acid、acesulfame、sodium saccharin and dehydroacetic acid in w ine.Themobile phase consisted ofmethanol(A),0.02mol/L ammonium acetate(B)and the flow ratewas1.0m L/m in.The column temperaturewas room temperature.Results:the injection volume ofbenzoic acid,sorbic acid,ace?sulfame,saccharin sodium and dehydroacetic acid were0.08-2.0μg（r=0.9996）、0.075-2.5μg（r=0.9999）、0.02-3.0μg（r=0.9992）、0.12-2.3μg（r=0.9995）、0.32-1.8μg（r=0.9999）good linear relationship,The average recoverieswere 97.0%,91.4%,95.0%,98.9%and 96.9%, respectively,RSD were 0.51%,0.26%,0.86%,0.36%and 1.01%.

w ine;benzoic acid;sorbic acid;saccharin sodium;acesulfame;dehydroa-cetic acid;HPLC.

西北民族大學本科生科研創(chuàng)新資助項目（URIP16048）

趙春生（1996-），男，本科，研究方向：精細化工