孫良廣++郭振旺

【摘要】目的：建立高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器（HPLC-CAD）法同時(shí)測(cè)定葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯和鈉的含量。方法：采用Thermo U3000-Corona CAD測(cè)定，用超純水溶解葡萄糖氯化鈉注射液，過濾后注入液相色譜儀測(cè)定。色譜柱為Thermo Mixed-Mode Hilic-1柱（3μm 21×150mm）；柱溫：40℃；流動(dòng)相：50mmol/L醋酸銨和乙腈梯度洗脫；流速：03mL/min；進(jìn)樣體積：10μL。結(jié)果：葡萄糖的線性范圍為005～100mg/mL（r=09993），氯和鈉的線性范圍為009～180mg/mL（r=09999）。方法回收率均>998%，精密度RSD均<20%，超純水中ClO-、NO3-對(duì)葡萄糖氯化鈉的含量測(cè)定幾乎沒有干擾。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確，快速、簡(jiǎn)便，可用于葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯和鈉的測(cè)定及其質(zhì)量控制，對(duì)其類似化合物的測(cè)定具有參考價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】葡萄糖氯化鈉注射液；高效液相色譜；電噴霧檢測(cè)器

【中圖分類號(hào)】R917【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2017）10-0018-03

Determination of Glucose，Cl- and Na+ in Glucose and Sodium Chloride Injectionby High Performance Liquid Chromatography with Charge Aerosol Detection（HPLC-CAD）

SUN LiangguangGUO Zhenwang*

Guangxi Wuzhou Institute for Food and Drug Control， Wuzhou 543001，China

Abstract：Objective To establish a high performance liquid chromatographic with charge aerosol detection（HPLC-CAD） method for the determination of Glucose，Cl- and Na+ in Glucose and sodium chloride injection Methods An Thermo U-3000 HPLC system with a charged aerosol detector was usedThe Glucose and sodium chloride injection samples were dissolved by water and injected into a Thermo Mixed-Mode Hilic-1（3μm 21×150mm）column at 40℃The mobile phase was composed of 50 mmol·L-1 ammonium acetate-acetonitrile with a flow rate of 03mL·min-1The injection volumn was 10μL Results The methodology recovery was higher than 998%The RSD were less than 20%The calibration curve was linear at 005～100mg·mL-1， with coefficient of determination over 09999Glucose and sodium chloride injection was detected with little interference from the excipient blend of waterConclusion The method is accurate，rapid and convenient for releage and stability test of Glucose，Cl- and Na+ in Glucose and sodium chloride injection and may be used as reference for similar compounds

Keywords：Glucose and Sodium Chloride Injection； HPLC；CAD

葡萄糖氯化鈉注射液（Glucose and sodium chloride injection）是常用的補(bǔ)充熱能和體液的復(fù)方制劑，內(nèi)含葡萄糖與氯化鈉，用于各種原因引起的進(jìn)食不足或大量體液丟失[1]。2015年版《中國(guó)藥典》二部中葡萄糖氯化鈉注射液的含量測(cè)定方法繁瑣耗時(shí)，分別用旋光度法測(cè)定葡萄糖含量，硝酸銀滴定法測(cè)定氯化鈉中氯含量。目前，葡萄糖的檢測(cè)方法中高效液相色譜法準(zhǔn)確、快速，得到廣泛采用[2]。常采用示差折光率檢測(cè)器（RID） [3-4]和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）檢測(cè)器[5]。為了縮短測(cè)定時(shí)間且同時(shí)對(duì)葡萄糖和氯化鈉含量進(jìn)行分析，筆者采用HPLC-CAD法[6-7]同時(shí)測(cè)定葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯離子和鈉離子的含量[8-10]。該方法更加快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確地對(duì)葡萄糖氯化鈉注射液進(jìn)行了定量分析。

1儀器與材料

11儀器Thermo-U3000高效液相色譜儀（美國(guó)熱電公司，附帶Corona Ultra電噴霧檢測(cè)器），色譜柱為Thermo Mixed-Mode Hilic（21×150mm 13μm）。

12材料醋酸銨（分析純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)：E1407051， Aladdin，含量≥995%）；氯化鈉對(duì)照品（批號(hào)：GBW（E）060024，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，含量=9999%）；250mL葡萄糖氯化鈉注射液（批號(hào)：E131102K2，湖南科倫制藥有限公司；批號(hào)：131228804，安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司；批號(hào)：H13121609，廣西裕源藥業(yè)有限公司），乙腈（色譜純，美國(guó)Sigma-aldrich公司），水為超純水。

2方法與結(jié)果

21色譜條件色譜柱：Thermo Mixed-Mode Hilic（21mm×150mm 13μm）；流速：03mL/min，柱溫40°C，進(jìn)樣量10μL，流動(dòng)相為A（50mmol/L醋酸銨）：B（乙腈）。詳見表1。

22供試品溶液的制備取“12”項(xiàng)下葡萄糖氯化鈉注射液，精密移取各1mL分別置于1000mL容量瓶中，加超純水稀釋并定容至刻度，搖勻，濾過，濾液過045μm濾膜，即得。

23對(duì)照品溶液的制備參照2015年版《中國(guó)藥典》二部中葡萄糖氯化鈉注射液規(guī)格（7）項(xiàng)下[1]配制，取葡萄糖125g和氯化鈉225g，精密稱定，置于250mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。作為對(duì)照品貯備液。

24標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密移取對(duì)照品貯備液1mL置于10mL量瓶中，加超純水稀釋并定容至刻度，搖勻，再精密移取各1mL分別置于100、50、25、10、5mL量瓶中，加超純水稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。制成下表所示線性溶液（見表2）。葡萄糖、Cl-、Na+分離度良好，且不受溶劑超純水中雜質(zhì)ClO-等干擾，色譜圖見圖1。精密量取上述“22”和“23”項(xiàng)下供試品溶液和對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸。葡萄糖在05～10mg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程Y=1258386X+ 12101（r= 09993）；氯、鈉在009～180mg /mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程分別為Y= 336836X+ 06429（r= 09999）、Y= 173087X+ 00395（r= 09999）。

25精密度試驗(yàn)精密精取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，分別計(jì)算葡萄糖、Cl-和Na+的RSD，分別為025%、011%、014%。結(jié)果表明，儀器精密度良好。

25重復(fù)性試驗(yàn)取樣品6份，按“22”供試品方法制備，測(cè)定峰面積。分別計(jì)算6份樣品中葡萄糖、Cl-和Na+的平均含量，分別為1251g/250mL、225g/250mL、225g/250mL，RSD分別為150%、095%和158%。結(jié)果表明，本方法重復(fù)性良好。

26穩(wěn)定性試驗(yàn)取樣品，在0、4、8、12、16、20、24h內(nèi)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，分別計(jì)算樣品中不同時(shí)間點(diǎn)的葡萄糖、Cl-和Na+含量，RSD為093%、085%、104%。結(jié)果表明，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

27回收率試驗(yàn)取已知含量的樣品6份，每份約1mL，精密稱定。分別精密加入“23”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL，按“22”供試品方法制備，測(cè)定，結(jié)果見表3。葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、Cl-和Na+的平均回收率分別為1004%、998%、1001%，RSD分別為111%、102%、115%。見表3至表5。

3討論

31定量方法的選擇由于葡萄糖和氯化鈉沒有紫外吸收官能團(tuán)，不能通過常規(guī)的高效液相色譜-紫外檢測(cè)法（HPLC-UV）同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。本文建立了一種準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便的高效液相色譜-電噴霧檢測(cè)器法同時(shí)測(cè)定葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯和鈉的含量，可應(yīng)用于其質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究，對(duì)其類似化合物的測(cè)定也具有參考價(jià)值，也可作為醫(yī)院常用的葡萄糖氯化鈉注射液含量檢測(cè)的一種有效手段[12-13]。

32色譜條件的選擇由于Thermo Mixed-Mode Hilic-1 3μm 21×150mm色譜柱具有混合模式固定相結(jié)合反相（RP）和親水性交互（HILIC）兩種屬性。高效的硅膠基質(zhì)的混合模式固定相由疏水性烷基鏈組成，末端是二醇基團(tuán)。疏水性基團(tuán)提供反相保留，末端的二醇基團(tuán)則促進(jìn)親水相互作用。其獨(dú)特組合提供可調(diào)節(jié)的選擇性，卓越的分離度和峰的不對(duì)稱性，適用于各種極性和非極性分子，使同時(shí)測(cè)定氯和鈉兩種陰陽(yáng)離子成為可能。

33CAD檢測(cè)器的優(yōu)勢(shì)電噴霧檢測(cè)器（CAD）是近年發(fā)展起來的一種新型通用檢測(cè)器，在靈敏度、重現(xiàn)性和線性方面均具有優(yōu)異的性能，且操作簡(jiǎn)便。基于其獨(dú)特的檢測(cè)原理，它的檢測(cè)范圍不受制于化合物的分子結(jié)構(gòu)，可應(yīng)用于任何非揮發(fā)或半揮發(fā)化合物[11，12]，在不具有示差折光檢測(cè)器和離子色譜的情況下，能完成對(duì)葡萄糖和氯化鈉2個(gè)陰陽(yáng)離子的檢測(cè)[13]。

34實(shí)際應(yīng)用性2015年版《中國(guó)藥典》二部采用的含量測(cè)定方法繁瑣耗時(shí)，分別用旋光度法測(cè)定葡萄糖含量，硝酸銀滴定法測(cè)定氯化鈉中氯含量[1]。研究改用HPLC-CAD法進(jìn)行測(cè)定，樣品用超純水直接溶解上機(jī)，大大節(jié)省了前處理時(shí)間，同時(shí)檢測(cè)三個(gè)成分含量，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性和耐用性。且葡萄糖、氯和鈉的分離效果好，此方法抗干擾能力強(qiáng)，適宜推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2017-03-21編輯：陶希睿）