楊 洋,于 潔,潘成然,張憲菊,郭 琳,陳忠政,季昌華
斜面包埋手法在組織石蠟包埋中的運用及體會
楊 洋,于 潔,潘成然,張憲菊,郭 琳,陳忠政,季昌華
病理技術(shù);石蠟包埋;包埋平整;組織制片
石蠟包埋法是目前病理科最常用的組織包埋方法之一[1],日常工作中,受組織結(jié)構(gòu)及取材等多因素影響,一個脫水盒中需放置多塊組織,在石蠟包埋時,多塊組織面難以保證在同一包埋面上,不僅導(dǎo)致組織切片切面不全,影響診斷,而且反復(fù)深切或重切,會造成局部病變組織缺失、延誤診斷等嚴重后果。實踐工作中,我們運用斜面包埋手法,較好地解決了多塊數(shù)、多層次類組織包埋的平整度,有效避免因包埋導(dǎo)致的切片不全,現(xiàn)將斜面手法應(yīng)用在石蠟包埋中及注意事項總結(jié)如下。
1.1 材料 常規(guī)選取內(nèi)鏡下黏膜剝離標本、腸類管腔樣組織標本、各種囊壁樣組織標本、乳腺麥默通微創(chuàng)標本、鈥激光前列腺剜除術(shù)標本、細針穿刺標本等,所有標本均經(jīng)規(guī)范化取材、脫水、浸蠟處理待包埋。
1.2 方法 (1)注蠟:金屬包埋模具先接2/3體積的已溶石蠟,太少不宜控制石蠟?zāi)虝r間,太多微傾時溢出。(2)模具斜面制作(圖1):包埋模具微傾置小冷臺,另一側(cè)微微翹起,傾角控制在5~10°間,形成斜面提供一個石蠟逐步凝固的環(huán)境過程[2]。(3)組織放入(圖2):待包埋組織按包埋面沿先接觸冷臺的一側(cè)依次放入組織,使組織在石蠟未凝固前已放入,微凝固時固定包埋位置,凝固后包埋鑷離開并依次放入后續(xù)組織。(4)蓋脫水盒底座:包埋完成后,放平包埋模具,將脫水盒底座蓋一端入包埋模具上,緩緩放平趕出兩者間的氣泡后再一次灌注適當石蠟,再次灌注體積最好為脫水盒底座體積的1/3,保證組織脫水盒和石蠟的緊實度。(5)成型分離:移至大冷臺,帶石蠟?zāi)毯髮⑾瀴K于包埋模具分離。斜面手法石蠟包埋過程中,在室溫下,冷臺溫度-10~0 ℃,整個模具凝固過程在10~15 s,依此時間決定包埋速度;成型蠟塊脫離模具時請勿機械強行分離,易造成局部包埋面斷裂,增加制片難度。
①②
圖1 模具斜面制作 圖2 組織的放入
標本經(jīng)規(guī)范化固定、取材、脫水、浸蠟處理后,在常規(guī)石蠟包埋中,同一包埋盒內(nèi)的各塊組織間包埋面平整度難以確保,切片顯示組織結(jié)構(gòu)不全(圖3),影響診斷醫(yī)師做出全面準確的診斷;應(yīng)用斜面包埋手法進行石蠟包埋問題得以解決,便于病理技術(shù)組能夠切出組織層次結(jié)構(gòu)完整的優(yōu)良切片(圖4),利于診斷醫(yī)師判讀的準確度。
組織包埋是病理技術(shù)基本工作;雜亂無序包埋的組織,不僅導(dǎo)致切片顯示不全、影響病理診斷,而且影響后續(xù)免疫組化、原位雜交、熒光原位雜交等后續(xù)檢查。
病理組織標本取材時,若為長條形標本,每個脫水盒放入組織應(yīng)不超過4條,以提高工作效率。若單條組織處理雖能保障包埋質(zhì)量,但取材數(shù)量太多,對組織復(fù)原不便,增加工作量。包埋應(yīng)按相同方向打開脫水盒、相同次序放入組織,組織若菲薄,應(yīng)按相同方向翻轉(zhuǎn)90°后組織豎立包埋[3]、蓋入脫水盒底座時按同樣的方向,以確保制片一致,組織層次及復(fù)原圖能夠與之對應(yīng),便于確定組織結(jié)構(gòu)和測量相應(yīng)區(qū)域面積等。組織間緊密平行集中排列包埋,便于制片,為后續(xù)如免疫組化、原位雜交、熒光原位雜交等實驗技術(shù)制片節(jié)約試劑,利于制出質(zhì)優(yōu)價廉的成品切片。取材的厚度應(yīng)在2~3 mm,若為囊壁或黏膜剝離樣標本取材寬度應(yīng)為2~3 mm,太薄時組織容易彎曲變形、影響組織結(jié)構(gòu)、難以順利包埋;太厚時組織處理不佳、影響制片。
③④
圖3 常規(guī)包埋法包埋制出的切片
圖4 斜面包埋手法包埋制出的切片
內(nèi)鏡下黏膜剝離標本、腸類管腔樣組織標本、各種囊壁樣組織標本,組織取材時切面盡量平整,若組織特別薄時可借助包埋用薄海綿固定取材組織,以防止組織變形,固定組織學(xué)相對位置,黏膜組織面應(yīng)方向一致,以保證組織學(xué)信息及組織平整度和方向性。
乳腺麥默通微創(chuàng)標本,取材時選取適量質(zhì)韌標本放于一脫水盒內(nèi),含脂肪多的穿刺條應(yīng)放于一脫水盒內(nèi),標本沿長軸放入包埋模具中,組織間緊密平行排列包埋,橫徑菲薄的組織應(yīng)豎立包埋,若含有脂肪較多的組織應(yīng)將脂肪部分盡量放于模具的邊緣位置。
前列腺鈥激光剜除標本,取材的標本每個脫水盒放置不要超過脫水盒體積的2/3,集中緊密排列后,逐步隨石蠟?zāi)逃冒耔囕p輕按壓剩余組織以確保在同一包埋面上。
細針穿刺標本取材時應(yīng)用包埋紙包裹,防止組織丟失,便于組織直立不彎曲。包埋時應(yīng)按長軸平行于模具中間處,待底層石蠟稍凝時用包埋鑷輕輕快速沿組織一端輕壓至另一端,確保組織在同一包埋面。
利用斜面手法進行包埋多塊數(shù)、多層次類組織標本可有效避免因組織包埋面不平而導(dǎo)致的切面不全,完整的病理切片大大提高診斷醫(yī)師判讀準確性。
[1] 王德田, 董建強. 實用現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)[M]. 北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社, 2012:39-45.
[2] 楊京彥,管冰心,王海濤,等. 胃ESD標本的病理取材及切片制作方法[J]. 臨床與實驗病理學(xué)雜志, 2015,31(8):939-940.
[3] 丁 偉, 王德田. 簡明病理學(xué)技術(shù)[M]. 杭州:浙江科學(xué)技術(shù)出版社, 2014:16-18.
時間:2017-3-16 14:23
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山東大學(xué)第二醫(yī)院病理科,濟南 250033
楊 洋,男,技士。Tel:(0531)85875340,E-mail: sddxdeyyblkyy@163.com 季昌華,女,技師,通訊作者。E-mail: changhuaji100@163.com
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1001-7399(2017)03-0346-02
10.13315/j.cnki.cjcep.2017.03.032
接受日期:2017-01-20