敖炬鋼，韓愛玲，錢琦琪，張錄順

大鼠不同器官組織的脫水方法改進

敖炬鋼1，韓愛玲2，錢琦琪3，張錄順4

組織脫水；大鼠；制片技術(shù)；方法改進

近期，本實驗室于大鼠組織病理學實驗中發(fā)現(xiàn)，若按大鼠常規(guī)脫水時間和流程制備大鼠的組織蠟塊，則組織切片易碎裂，染色易脫片，造成后續(xù)工作無法進行。即便使用防脫片劑效果亦不佳，尚未脫片的組織切片HE染色及特殊染色結(jié)果亦不理想。本實驗室根據(jù)大鼠各個器官組織特點進行試驗后，改進了大鼠組織的脫水方法取得較好效果，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料 按實驗要求取大鼠各部位組織，大小1.5 cm×1.5 cm，厚0.3～0.5 cm。實驗器具：國產(chǎn)脫水機。化學試劑為55%、60%、65%、70%、80%、85%、95%、100%梯度乙醇，二甲苯，石蠟(熔點58～60 ℃)。

1.2 方法 傳統(tǒng)處理流程：(1)10%中性福爾馬林充分固定2～3 h;(2)75%乙醇90 min；85%乙醇80 min；95%乙醇Ⅰ、Ⅱ各1 h；100%乙醇Ⅰ、Ⅱ各1 h;(3)二甲苯Ⅰ20 min；二甲苯Ⅱ 25 min；(4)浸蠟溫度58～65 ℃：石蠟Ⅰ、Ⅱ各30 min；石蠟Ⅲ 40 min。改良處理流程：(1)多聚甲醛溶液固定24～48 h;(2)根據(jù)不同器官組織的特點，各個器官的脫水步驟及時間詳見表1。本實驗浸蠟溫度為61 ℃。

2 結(jié)果

本實驗以肝臟組織HE染色為例。肝組織以實質(zhì)細胞為主，間質(zhì)細胞較少，肝硬化組織有假小葉形成，其實質(zhì)細胞與纖維化組織同時存在。由于其組織脆性，若按照常規(guī)方法處理，易造成肝組織脆硬，切片時易碎(圖1、2)或易產(chǎn)生皺褶折疊(圖3)、碎屑污染，影響制片和后續(xù)工作。改進脫水方法制得的大鼠組織蠟塊，手感柔潤，蠟片光潤平整。制片染色后鏡下可見胞質(zhì)透徹，胞核清晰，組織結(jié)構(gòu)完整(圖4)。切片的連續(xù)性、裂痕、褶皺和碎屑程度均優(yōu)于常規(guī)方法。

新舊方法比較：常規(guī)的組織脫水方法時間長，乙醇梯度處理粗糙，脫水效果不佳；病理制片組織易出現(xiàn)重疊、碎裂、污染、著色不佳等現(xiàn)象。改進后的梯度乙醇保證組織充分脫水，合理浸潤時間從而縮減整體脫水時間，組織的無水乙醇處理時間和二甲苯透明時間恰當，避免脫水時間過長造成組織收縮、間隙增大、組織表面變脆[1]、透明時間過長組織變硬[2]。

3 討論

本實驗室將大鼠組織脫水流程進行改進，并對組織處理過程加以分析總結(jié)：(1)本實驗中的梯度乙醇和處理時間可以保證組織充分脫水。我們依次采用梯度為55%、60%、65%、70%、80%、85%、95%、100%的乙醇，保證組織徹底脫水。脫水、透明、浸蠟時間應根據(jù)不同組織調(diào)整，浸蠟時間過長，溫度過高(本實驗設(shè)定為61 ℃)組織會過度脆化[3]，影響制片。使用改進的乙醇和浸蠟時間處理效果良好。(2)大鼠器官的組織特性增加了組織處理及制片的難度，處理不當會使石蠟切片易碎、易裂，破壞組織結(jié)構(gòu)的完整性，并易出現(xiàn)蠟屑污染現(xiàn)象。本實驗根據(jù)大鼠各部位組織器官特性采用不同的處理方式，效果良好。(3)除規(guī)范制取動物標本外，本實驗改進的梯度乙醇和脫水時間可降低制片的難度。一般認為組織的乙醇浸泡時間短會造成脫水不徹底，包埋時組織易碎，蠟片完整性低、薄厚不均、毀刀甚至粉末等問題，本實驗證明，此優(yōu)化法對于大鼠各組織的脫水效果良好。

表1 各組織的脫水透明浸蠟時間(min)

①②③④

圖1 肝組織碎裂，細胞形態(tài)模糊

圖2 肝組織碎裂，影響肝細胞有效數(shù)量觀察

圖3 肝組織間出現(xiàn)折疊，影響細胞形態(tài)觀察

圖4 肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細胞形態(tài)清晰

綜上所述，改進后的脫水方法可提高大鼠各部位組織處理效果，保證制片的整體質(zhì)量，提高工作效率。

[1] 董 偉，俞 花，冼志紅，等. 肝臟組織脫水流程及試劑更換改進方法[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2014,30(9):1060-1061.

[2] 馬恒輝，周曉軍. 如何提高組織處理的技術(shù)水平[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2011,27(4):415-418.

[3] 柏美玲，宋 昱，林群凡，等. 實驗動物肝組織石蠟切片制作中易發(fā)問題探討[J]. 中國現(xiàn)代藥物應用, 2012,6(20):121-122.

成都醫(yī)學院國家級“大學生創(chuàng)新實驗計劃”基金資助(201613705001)

成都醫(yī)學院1醫(yī)學檢驗技術(shù)2014級本科、2全科醫(yī)師2014級本科、3生物技術(shù)2014級本科、4病理學與病理生理學教研室，成都 610500

敖炬鋼，男，本科。E-mail: 540341820@qq.com 張錄順，男，博士，副教授，通訊作者。E-mail: zhangls2012@163.com

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1001-7399(2017)03-0342-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.03.030

接受日期：2017-01-08