項微微

浙江省臺州市中醫(yī)院 浙江 臺州 318000

菊米提取物對高血壓大鼠模型視網(wǎng)膜損傷修復(fù)的影響

項微微

浙江省臺州市中醫(yī)院 浙江 臺州 318000

目的：觀察菊米提取物對高糖高脂致高血壓大鼠模型眼底損傷的修復(fù)作用。方法：將大鼠隨機(jī)分成正常組、模型組及給藥組，模型組及給藥組建立高糖高脂致高血壓大鼠模型。給藥組給予菊米提取物，正常組、模型組給予同體積生理鹽水，連續(xù)灌胃30天后觀察指標(biāo)：①組織生化：視網(wǎng)膜組織血管舒縮因子、氧化指標(biāo)。②視網(wǎng)膜鋪片PAS染色。結(jié)果：菊米提取物可升高高血壓動物模型視網(wǎng)膜組織中NO、Glu、SOD含量，降低MDA、iNOS、vWF、MMP-9、EGF、ET-1、ICAM-1。使動靜脈血管比例接近1:2；改善視網(wǎng)膜血管及細(xì)胞排列等病理狀態(tài)。結(jié)論：菊米提取物可以改善高血壓動物模型組織抗氧化能力，減輕神經(jīng)元損傷，改善視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮損傷，維持視網(wǎng)膜微環(huán)境穩(wěn)定。

菊米 高血壓視網(wǎng)膜損傷 大鼠 實驗研究

筆者通過實驗研究觀察菊米提取物對高糖高脂致高血壓大鼠模型眼底損傷的修復(fù)作用，結(jié)果提示菊米提取物可以改善高血壓動物模型組織抗氧化能力，減輕神經(jīng)元損傷，改善視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮損傷，維持視網(wǎng)膜微環(huán)境穩(wěn)定。具體方法如下。

1 材料和方法

1.1 實驗動物:SD大鼠，雌雄各半，體重180～220g，30只，浙江省實驗動物中心，實驗動物合格證號SCXK（浙）20140033。

1.2 實驗藥劑:菊米，批號2015年8月1日，亳州市菊花緣農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司。超氧化物歧化酶測定試劑盒（批號2015022511）、谷氨酸測定試劑盒（批號02/25/ 2015）、丙二醛測定試劑盒（批號2015022510）、一氧化氮測定試劑盒（批號2015022508）、一氧化氮合酶（分型）測定試劑盒（批號2015022511）、ET-1 ELISA試劑盒（批號08/2015），以上均購自北京瑞格博科技發(fā)展有限公司。

1.3 實驗方法:分述如下。

1.3.1 菊米提取物制備:菊米，將600g菊米加入10倍量提取兩次，提取液濃縮至60ml備用。

1.3.2 分組及給藥:將SD大鼠隨機(jī)分成三組，正常對照組、模型組及給藥組（25g/kg）。高糖高脂模型組:給予高糖高脂飼料（普通飼料76%、蔗糖10%、豬油9%、膽固醇3%、膽鹽1%）喂養(yǎng)，自由飲食、采水。造模4周后，給藥組每天按10ml/kg體積給藥1次，正常對照組、模型對照組分別給予等容量生理鹽水。連續(xù)給藥30天。

1.3.3 視網(wǎng)膜組織勻漿:給藥30天后，處死大鼠，迅速摘取眼球，小心剝離視網(wǎng)膜，研磨均勻，勻漿液測定視網(wǎng)膜組織生化指標(biāo)SOD、MDA、NO、iNOS，以及細(xì)胞因子ET-1、Glu、EGF、MMP-9、ICAM-1、von Willebrand含量。

1.3.4 視網(wǎng)膜消化鋪片:大鼠左眼球，于4%多聚甲醛溶液中固定48h以上，取出眼球流水下沖洗過夜，預(yù)冷的生理鹽水中剝離視網(wǎng)膜，PBS（0.01mol/L，PH7.4）漂洗10min，甘氨酸緩沖液隔夜浸泡（0.15mol/L，PH7.4），將視網(wǎng)膜放入1.5mL的離心管中，加入溶解于0.1MTris緩沖液中的3%胰蛋白酶（Amresco，Serva 1:250）消化液，37℃孵化箱消化3h，吸出消化液，用蒸餾水漂洗，輕輕振蕩多次，顯微鏡下觀察僅剩下一層透明的視網(wǎng)膜血管網(wǎng)，將其倒在載玻片上，待其展開后，置室溫自然干燥，存放于切片盒中4℃保存以備PAS-H染色。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法:計量資料數(shù)據(jù)以-x±s表示，采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件做單因素方差分析，結(jié)果做t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 實驗結(jié)果

2.1 各組視網(wǎng)膜組織生化指標(biāo)比較:見表1。

表1 各組視網(wǎng)膜組織生化指標(biāo)比較（±s）

表1 各組視網(wǎng)膜組織生化指標(biāo)比較（±s）

注:與正常組比較，*P＜0.001；與模型組比較，#P＜0.001。

指標(biāo)SOD(U/mL) MDA(nmol/mL) NO(μmol/L) iNOS(U/mL)給藥組124.63±1.09#5.84±0.34#18.46±0.93#812.77±3.12#正常組120.96±0.91 4.30±0.24 12.70±0.56 741.83±1.56模型組116.28±2.11*4.73±0.10*11.45±0.97*824.43±2.13*

2.2 各組視網(wǎng)膜組織細(xì)胞因子比較:見表2。

2.3 視網(wǎng)膜鋪片結(jié)果:如圖1所示。正常SD大鼠視網(wǎng)膜鋪片血管管徑均勻，比例固定，血管內(nèi)周細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞排列規(guī)則，血管無閉塞區(qū)，沒有無細(xì)胞血管區(qū)域。高糖高脂模型大鼠視網(wǎng)膜鋪片中，血管管徑粗細(xì)不均勻，血管內(nèi)周細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞排列無規(guī)則，影周細(xì)胞異常多。而給藥組大鼠視網(wǎng)膜鋪片中，血管管徑均勻，血管內(nèi)細(xì)胞排列規(guī)則。

表2 視網(wǎng)膜組織細(xì)胞因子測定（±s）

表2 視網(wǎng)膜組織細(xì)胞因子測定（±s）

注:與正常組比較，*P＜0.001；與模型組比較，#P＜0.001。

細(xì)胞因子ET-1(ng/L) EGF(ng/L) MMP-9(ng/ml) ICAM-1(ng/ml) VWF(ng/ml) Glu(μmol/L)給藥組87.62± 6.69 187.46±13.80 1.67± 0.19 4.68± 1.44 9.09± 0.50 211.91± 1.48#正常組84.92±1.06 193.10±4.12 1.61±0.11 4.79±1.34 9.74±0.69 280.65±1.82模型組92.49±3.56*198.13±6.98 1.89±0.16 4.96±1.55 9.17±0.55 210.13±1.90*

圖1 大鼠視網(wǎng)膜鋪片

3 討論

菊米，即精制野菊花花蕊，呈黃綠色，因形狀如米粒，故稱野菊米。據(jù)《增廣本草綱目》記載:“處州出一種山中野菊，土人采其蕊而干之，如半粒綠豆大，甚香而輕圓黃亮。敗毒、散疔、祛風(fēng)、清火、明目為第一。產(chǎn)自遂昌石練山中?！毖芯縖1]發(fā)現(xiàn)，菊米含有菊米內(nèi)脂、蛋白質(zhì)、黃酮甙、揮發(fā)油、氨基酸等多種營養(yǎng)成份及抗病要素，具有殺菌、降壓、降脂等作用，尤其是對對于高血壓臨床患者眼底視網(wǎng)膜病變具有一定的保護(hù)作用[2]，對視力衰退及高血壓患者具有較好的抗病保健功效。

目前國內(nèi)對菊米的研究主要有對心血管的作用，對血壓、血脂的影響[3]，調(diào)整血流動力學(xué)和抗心肌缺血作用，清除亞硝酸鹽及抑制N-亞硝基二乙胺(NDEA)生成，抑菌和抗病毒作用；抗氧化作用以及毒性作用等。從本實驗視網(wǎng)膜鋪片中可以發(fā)現(xiàn)，由高糖高脂引起的高血壓大鼠模型眼底視網(wǎng)膜血管管徑粗細(xì)不均勻，血管內(nèi)周細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞排列無規(guī)則，影周細(xì)胞異常多。血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、周細(xì)胞減少，出現(xiàn)影周細(xì)胞、無細(xì)胞毛細(xì)血管、毛細(xì)血管基底膜增厚等是糖尿病性視網(wǎng)膜病變特征性改變[4]。本實驗沒有做細(xì)胞凋亡實驗，未知血管內(nèi)皮細(xì)胞是否增生、周細(xì)胞是否減少，但可以觀察到視網(wǎng)膜鋪片中高糖高脂模型組影周細(xì)胞異常多。本實驗中發(fā)現(xiàn)，給藥后，發(fā)現(xiàn)模型大鼠眼底視網(wǎng)膜組織SOD、NO、Glu含量升高，而iNOS含量降低，減少了血管閉塞區(qū)，影周細(xì)胞減少，緩解高糖高脂及高血壓對眼底視網(wǎng)膜造成的損傷。提示菊米提取物對高糖高脂引起的高血壓大鼠模型視網(wǎng)膜損傷也有一定的改善作用。

[1]廖樹森.高血壓病眼底診斷學(xué)[M].西安:陜西科學(xué)技術(shù)出版社,1990:510.

[2]應(yīng)海航,徐高.益氣清肝活血湯治療高血壓性視網(wǎng)膜病變40例臨床觀察[J].浙江中醫(yī)雜志，2015，50(3):192-192.

[3]黃景明,黃誠孝.菊米對血壓、血脂影響的研究[J].浙江中醫(yī)雜志,,2006,41(4):233-234.

[4]周水平,郭治昕,仝小林,等.復(fù)方丹參滴丸對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2002(S1): 174-178.

2016-11-14