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        鐵皮石斛當(dāng)歸復(fù)方提取液對(duì)2型糖尿病小鼠降糖作用研究*

        2017-06-05 15:03:16戴明珠王楠楠徐俞悅顏美秋呂圭源陳素紅
        浙江中醫(yī)雜志 2017年5期
        關(guān)鍵詞:小鼠血糖糖尿病

        戴明珠 王楠楠 徐俞悅 蘇 潔 顏美秋 呂圭源 陳素紅,3#

        1 溫州醫(yī)科大學(xué) 浙江 溫州 325035 2 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053 3 浙江工業(yè)大學(xué) 浙江 杭州 310014

        鐵皮石斛當(dāng)歸復(fù)方提取液對(duì)2型糖尿病小鼠降糖作用研究*

        戴明珠1王楠楠1徐俞悅1蘇 潔2顏美秋2呂圭源2陳素紅1,3#

        1 溫州醫(yī)科大學(xué) 浙江 溫州 325035 2 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053 3 浙江工業(yè)大學(xué) 浙江 杭州 310014

        鐵皮石斛當(dāng)歸復(fù)方提取液 鏈脲佐菌素 2型糖尿病 小鼠 實(shí)驗(yàn)研究

        糖尿?。―M)是一組以高血糖為特征的終身性代謝疾病,易導(dǎo)致腎、眼、心臟、血管、神經(jīng)的慢性損害和功能障礙[1]。中醫(yī)對(duì)糖尿病的認(rèn)識(shí)始于《素問·陰陽別論》:“二陽結(jié)謂之消。”《金匱要略》:“病者如熱狀,煩渴,口干燥而渴,其脈反無熱,此為陰伏,是瘀血也。”即瘀可致消。《諸病源候論·消渴候》則以“消渴”為病證總名?,F(xiàn)代中醫(yī)對(duì)糖尿病的治則為“益氣養(yǎng)陰、活血化瘀”[2]。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局(CFDA)《輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法》,將養(yǎng)陰藥鐵皮石斛與養(yǎng)血活血藥當(dāng)歸聯(lián)用,觀察鐵皮石斛當(dāng)歸復(fù)方提取液對(duì)高糖高脂加鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠降血糖作用。

        1 材料與方法

        1.1 藥物:鐵皮石斛由浙江金華壽仙谷藥業(yè)有限公司提供,當(dāng)歸由浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片廠提供。鐵皮石斛當(dāng)歸復(fù)方提取液(TDF)即鐵皮石斛、當(dāng)歸經(jīng)水提取后配制成含生藥量0.15、0.3、0.6g/ml藥液。

        1.2 動(dòng)物:ICR小鼠,雄性,20~22g,浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào)SCXK(浙)2014-0001。

        1.3 試劑:鏈脲佐菌素(STZ,批號(hào)S0130,Sigma公司);高糖高脂飼料(浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心);葡萄糖(GLU)(批號(hào)10010518,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);葡萄糖試劑盒,批號(hào)15110201;甘油三酯(TG)試劑盒,批號(hào)15121501;總膽固醇(TC)試劑盒,批號(hào)15110401,寧波康美生物科技有限公司;胰島素(INS)測試盒,批號(hào)20160103,上海源葉生物科技有限公司。

        1.4 儀器:TBA-40FR全自動(dòng)生化分析儀(東芝醫(yī)療系統(tǒng)株式會(huì)社);Powerwave 340酶標(biāo)儀(Bio-TEK公司);雅培安妥超越血糖儀、血糖試紙(Abbott公司)。

        1.5 正常小鼠降糖實(shí)驗(yàn):ICR小鼠分為正常對(duì)照組和TDF(6.0g/kg)組,每組15只。分別灌純化水與提取液,連續(xù)30d,末次給藥后禁食4h,測空腹血糖(FBG)值。

        1.6 2型糖尿病模型小鼠降糖實(shí)驗(yàn):分述如下。

        1.6.1 造模與給藥:雄性ICR小鼠分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和TDF(1.5、3.0、6.0g/kg)組,每組15只。TDF組灌規(guī)定濃度提取液,模型對(duì)照組灌純化水,連續(xù)30d。各組給予普通飼料,1周后模型對(duì)照組和TDF組更換高糖高脂飼料,喂飼3周后,模型對(duì)照組和3個(gè)劑量禁食24h,給予1%STZ 80mg/kg BW腹腔注射,注射后繼續(xù)給予高糖高脂飼料5天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

        1.6.2 FBG、口服葡萄糖耐量(OGTT):末次給藥后禁食4h,測定空腹血糖即給葡萄糖前(0h)血糖值和血糖曲線下面積,各組按規(guī)定給藥,15min后灌予葡萄糖2.5g/kg BW,測定給葡萄糖后0.5、2h的血糖值及血糖曲線下面積。血糖曲線下面積(AUC)=(0h血糖值+0.5h血糖值)×0.5/2+(2h血糖值+0.5h血糖值)×1.5/2。

        1.6.3 總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG):末次給藥后禁食4h,檢測血清TC、TG水平。

        1.6.4 胰島素(INS)、胰島素抵抗指數(shù)(IR):末次給藥后禁食4h,檢測INS水平,并計(jì)算IR。

        1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:計(jì)量資料數(shù)據(jù)以-x±s表示,組間比較采用t檢驗(yàn),以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 對(duì)正常小鼠體重及空腹血糖的影響:TDF 6.0g/kg

        對(duì)正常小鼠體重及空腹血糖無明顯影響。見表1。

        表1 TDF對(duì)正常小鼠體重、空腹血糖影響(±s)

        表1 TDF對(duì)正常小鼠體重、空腹血糖影響(±s)

        空腹血糖(mmol/L)7.03±1.27 6.95±1.16組別正常對(duì)照組TDF組劑量(g/kg)--6.0體重(g)38.55±3.54 38.57±3.14

        2.2 對(duì)2型糖尿病小鼠FBG、OGTT、AUC的影響:與正常對(duì)照組比較,給予葡萄糖0、0.5、2h,模型對(duì)照組血糖值及AUC均顯著升高(P<0.01);與模型對(duì)照組比較,TDF1.5、3.0g/kg組各時(shí)間點(diǎn)血糖值及AUC均呈下降趨勢,其中1.5g/kg組0、2h血糖值及AUC明顯下降(P< 0.05)。提示TDF 1.5g/kg可降低糖尿病小鼠空腹及餐后2h血糖值,并提高糖耐量。見表2。

        表2 TDF對(duì)2型糖尿病小鼠空腹血糖及糖耐量的影響(±s)

        表2 TDF對(duì)2型糖尿病小鼠空腹血糖及糖耐量的影響(±s)

        注:與正常對(duì)照組比較,#P<0.01;與模型對(duì)照組比較,*P<0.05。

        組別血糖(mmol/L)AUC正常對(duì)照組模型對(duì)照組TDF組TDF組TDF組0.5h 9.07±1.24 17.43±3.02#15.93±1.58 17.05±2.53 17.25±2.12劑量(g/kg)----1.5 3.0 6.0 0h 8.63±1.37 12.50±2.39#10.81±2.01*11.94±2.62 12.55±4.59 2h 5.99±1.16 12.11±3.72#10.05±2.22*10.99±2.39 10.87±3.56 15.72±1.79 29.63±5.86#26.17±2.54*28.34±3.71 28.43±4.05

        2.3 對(duì)2型糖尿病小鼠TC、TG水平的影響:與正常對(duì)照比較,模型對(duì)照組血清TC、TG水平顯著升高(P<0.01);與模型對(duì)照組比較,TDF 1.5g/kg組TC、TG水平均呈下降趨勢,其中TC水平明顯降低(P<0.05)。提示TDF 1.5g/kg具有降低糖尿病小鼠血清TC功能。見表3。

        表3 TDF對(duì)2型糖尿病小鼠TC、TG水平影響(±s)

        表3 TDF對(duì)2型糖尿病小鼠TC、TG水平影響(±s)

        注:與正常對(duì)照組比較,#P<0.01;與模型對(duì)照組比較,*P<0.05。

        TG(mmol/L)2.09±0.61 1.24±0.33#1.07±0.27 1.24±0.17 1.18±0.14組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組TDF組TDF組TDF組劑量(g/kg)----1.5 3.0 6.0 TC(mmol/L)3.55±0.62 6.77±1.11#6.11±0.67*6.20±1.03 6.49±1.28

        2.4 對(duì)2型糖尿病小鼠INS、IR的影響:與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組IR顯著升高(P<0.01);與模型對(duì)照組比較,TDF 1.5g/kg組IR明顯下降(P<0.05)。提示TDF 1.5g/kg可提高糖尿病小鼠靶組織對(duì)胰島素的敏感性。見表4。

        表4 TDF對(duì)2型糖尿病小鼠INS、IR的影響(±s)

        表4 TDF對(duì)2型糖尿病小鼠INS、IR的影響(±s)

        注:與正常對(duì)照組比較,#P<0.01;與模型對(duì)照組比較,*P<0.05。

        IR 16.05±3.22 22.69±4.18#19.81±3.57*21.97±5.01 22.76±8.25組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組TDF組TDF組TDF組劑量(g/kg)----1.5 3.0 6.0 INS(mIU/L)41.80±4.76 41.00±2.75 41.38±2.30 41.40±2.55 40.89±1.64

        3 討論

        鐵皮石斛味甘,性偏寒,具有滋陰、清熱、潤燥作用,用于高熱、內(nèi)熱消渴者,脾胃虛寒的糖尿病患者則不宜連續(xù)服用;當(dāng)歸味甘,性溫,為補(bǔ)血活血之要藥。鐵皮石斛佐以當(dāng)歸,一可起到相成作用,發(fā)揮補(bǔ)血活血之作用,直達(dá)病所;二加強(qiáng)或與鐵皮石斛共同發(fā)揮降糖作用,增強(qiáng)藥效;三以消除或減緩石斛的寒性,增加適應(yīng)癥、擴(kuò)大應(yīng)用人群。二藥均為可用于保健食品的中藥材(見衛(wèi)生部2014版《藥食同源目錄》)。

        造模前,小鼠精神狀況良好,毛色光澤均勻,飲食飲水及大小便正常;造模后,模型組逐漸出現(xiàn)精神萎靡,掉毛,多飲,小便異味[3],個(gè)別出現(xiàn)皮膚潰爛等感染現(xiàn)象;TDF組較模型組狀態(tài)佳。模型對(duì)照組0.5h血糖值≥10mmol/L,且較正常對(duì)照組0.5、2h血糖均升高,AUC升高,差異有顯著性,判定模型糖代謝紊亂成立,在此基礎(chǔ)上,模型對(duì)照組IR明顯升高,差異有顯著性,判定胰島素抵抗糖/脂代謝紊亂模型成功。提示STZ可能僅損傷部分胰島β細(xì)胞,剩余部分可代償性分泌胰島素,使其水平不降低,但組織對(duì)INS敏感性和反應(yīng)性降低,不能攝取、儲(chǔ)存和利用葡萄糖,即出現(xiàn)糖尿病癥狀。經(jīng)TDF治療后,糖尿病小鼠對(duì)INS敏感性增加,OGTT提高,餐后血糖值降低,提示TDF對(duì)2型糖尿病小鼠的降糖機(jī)制與改善胰島素抵抗有關(guān)。

        中藥對(duì)復(fù)雜疾病的治療一直具有其獨(dú)特的作用和優(yōu)勢:不單改善癥狀,更能全面調(diào)理人體機(jī)能,恢復(fù)血管彈性,增加心、肝、腎、視網(wǎng)膜等組織營養(yǎng)性血流量,克服化學(xué)合成藥的副作用和誘發(fā)的并發(fā)癥;中藥復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)、多種作用機(jī)制的特征符合復(fù)雜疾病的治療要求??梢?,中醫(yī)藥治療糖尿病值得進(jìn)一步研究。

        [1]Looker A C,Eberhardt M S,Saydah S H.Diabetes and fracture risk in older US adults[J].Bone,2016(82):9-15.

        [2]楊啟悅,張帥,謝春光,等.參芪復(fù)方防治糖尿病大血管病變機(jī)制研究[J].中草藥,2014,45(8):1179-1183.

        [3]潘曉瓊.升清降糖合劑對(duì)糖尿病大鼠胰島β細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J].浙江中醫(yī)雜志,2016,51(9):639-641.

        2017-01-22

        國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目基于“肝/腎-腸軸”的鐵皮石斛葉黃酮碳苷抗高尿酸血癥伴高血壓的機(jī)制研究,編號(hào):81673638;國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目課題芡實(shí)等8種大宗中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高及其綜合利用研究,編號(hào):2011BA104B06

        # 通訊作者:陳素紅,E-mail:chensuhong@aliyun.com

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